本文關(guān)鍵詞：豬支原體肺炎滅活疫苗水性及水包油型佐劑研制及初步免疫效果評價，，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：研究目的：為了改進(jìn)現(xiàn)有的國產(chǎn)豬支原體肺炎滅活疫苗,增強(qiáng)疫苗免疫刺激能力、降低疫苗毒副作用,本試驗(yàn)對豬支原體肺炎滅活疫苗水性或水包油型佐劑進(jìn)行研究,旨在研發(fā)出更為優(yōu)質(zhì)和安全的水性或水包油型佐劑,與豬支原體肺炎滅活抗原(NJ株)配合使用,研制得到安全高效的豬支原體肺炎滅活疫苗(NJ株)升級產(chǎn)品。 試驗(yàn)方法：在此前研究的基礎(chǔ)上,配制不同的佐劑配方,得到卡波姆974+左旋咪唑混合佐劑、卡波姆971+左旋咪唑混合佐劑、卡波姆974+左旋咪唑+黃芪多糖混合佐劑、殼聚糖十左旋咪唑混合佐劑、卡波姆974+免疫刺激復(fù)合物基質(zhì)(ISCOM-matrix)昆合佐劑、DEAE-Dextran+左旋咪唑混合佐劑、β-葡聚糖+左旋咪唑混合物佐劑、DEAE-dextran+左旋咪唑+黃芪多糖混合物佐劑和β-葡聚糖十左旋咪唑+黃芪多糖混合物佐劑,同時選用2種水性及水包油型商品化佐劑(GEL01ST、ISA11R VG)進(jìn)行同步試驗(yàn)評價。將不同佐劑分別與豬肺炎支原體(NJ株)滅活抗原混合制成佐劑滅活疫苗免疫小鼠,檢測小鼠淋巴細(xì)胞增殖情況及血清抗體水平,用以比較幾種佐劑在豬支原體肺炎滅活疫苗上的免疫增強(qiáng)效果。 在本動物試驗(yàn)研究中,選用經(jīng)小鼠試驗(yàn)初步評價篩選出免疫增強(qiáng)效果較好的4種水性或水包油型佐劑,即卡波姆974+左旋咪唑混合物佐劑、卡波姆974+左旋咪唑+黃芪多糖混合物佐劑、卡波姆974+免疫刺激復(fù)合物基質(zhì)(ISCOM-matrix)混合物佐劑、殼聚糖+左旋咪唑混合物佐劑,同時選用2種水性及水包油型商品化佐劑(GEL01ST、 ISA11R VG)進(jìn)行同步試驗(yàn)評價。使用不同佐劑分別與豬肺炎支原體(NJ株)滅活抗原配合免疫試驗(yàn)豬,同時,設(shè)埃索白油油苗和輝瑞瑞倍適旺滅活苗作對照,另外各設(shè)一組健康對照和攻毒對照,檢測豬淋巴細(xì)胞增殖情況及血清抗體水平,此外,還對各試驗(yàn)組的攻毒保護(hù)效果進(jìn)行評價。 在安全性評價研究中,將選用經(jīng)小鼠試驗(yàn)所篩選的佐劑,與豬肺炎支原體(NJ株)滅活抗原制備滅活疫苗,皮下注射免疫小鼠,評價含佐劑疫苗的安全性。 試驗(yàn)結(jié)果：1.通過小鼠模型初步評價佐劑對豬支原體肺炎滅活疫苗的免疫增強(qiáng)效果,結(jié)果顯示,卡波姆974+免疫刺激復(fù)合物基質(zhì)混合物佐劑和殼聚糖+左旋咪唑混合物佐劑強(qiáng)烈地誘導(dǎo)產(chǎn)生高水平細(xì)胞免疫和體液免疫應(yīng)答;卡波姆974+左旋咪唑混合物佐劑、卡波姆974+左旋咪唑+黃芪多糖混合物佐劑和ISA11R VG佐劑次之；β-葡聚糖+左旋咪唑混合物佐劑、DEAE-dextran+左旋咪唑+黃芪多糖混合物佐劑和β-葡聚糖+左旋咪唑+黃芪多糖混合物佐劑在細(xì)胞免疫應(yīng)答方面作用顯著,但體液免疫應(yīng)答作用稍弱；而GEL01ST佐劑在體液免疫應(yīng)答方面作用顯著,細(xì)胞免疫應(yīng)答作用稍弱。 2.在本動物試驗(yàn)研究中,相較于健康對照組/攻毒對照組,卡波姆974+左旋咪唑混合物佐劑在體液免疫應(yīng)答和細(xì)胞免疫應(yīng)答方面均有較強(qiáng)的免疫刺激能力;滅活疫苗組和油苗組次之。 攻毒后28d,剖檢試驗(yàn)豬,對試驗(yàn)豬進(jìn)行肺部病變評分,評價各試驗(yàn)組攻毒保護(hù)效果。結(jié)果表明,與攻毒對照組相比,佐劑1組(卡波姆974+左旋咪唑)、滅活疫苗組和油苗組(P0.01)顯示出明顯的攻毒保護(hù)效果,具有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。其攻毒保護(hù)效率分別為佐劑1組7/9,滅活疫苗組為6/9,油苗組4/9。 3.在佐劑疫苗安全性評價研究中,皮下注射免疫小鼠,均未產(chǎn)生不良影響。 試驗(yàn)結(jié)論：1.利用小鼠模型評價不同水性及水包油型佐劑對豬支原體肺炎滅活疫苗免疫增強(qiáng)作用的研究結(jié)果發(fā)現(xiàn),卡波姆+免疫刺激復(fù)合物基質(zhì)混合物(ISCOM-matrix)佐劑和殼聚糖+左旋咪唑混合物佐劑強(qiáng)烈地誘導(dǎo)機(jī)體產(chǎn)生高水平細(xì)胞免疫和體液免疫應(yīng)答;卡波姆974+左旋咪唑混合物佐劑、卡波姆974+左旋咪唑+黃芪多糖混合物佐劑和ISA11R VG佐劑次之。 2.本動物的免疫及攻毒保護(hù)效果評價研究結(jié)果發(fā)現(xiàn),佐劑1組(卡波姆974+左旋咪唑)強(qiáng)烈地誘導(dǎo)試驗(yàn)豬產(chǎn)生高水平細(xì)胞免疫和體液免疫應(yīng)答,同時佐劑1組在攻毒保護(hù)效果評價中保護(hù)力最強(qiáng),該佐劑有潛力成為豬支原體肺炎滅活疫苗佐劑。 3.佐劑安全性評價研究結(jié)果發(fā)現(xiàn),將幾種不同水性及水包油型滅活疫苗皮下注射免疫小鼠,均未對小鼠產(chǎn)生不良反應(yīng),可將幾種不同水性及水包油型佐劑配合豬支原體肺炎滅活抗原免疫本動物。 本試驗(yàn)結(jié)果將為研發(fā)新型的用于豬支原體肺炎滅活疫苗的佐劑應(yīng)用于臨床提供基礎(chǔ)。
【關(guān)鍵詞】：佐劑 豬支原體肺炎 滅活疫苗 免疫效果評價 佐劑疫苗安全性
【學(xué)位授予單位】：山西農(nóng)業(yè)大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2014
【分類號】：R392
【目錄】：

• 摘要6-8
• 第一部分 文獻(xiàn)綜述8-16
• 1 豬支原體肺炎(MPS)的研究進(jìn)展8-11
• 1.1 病原學(xué)8-9
• 1.2 臨床癥狀9
• 1.3 病理變化9-10
• 1.4 致病機(jī)理10
• 1.5 經(jīng)濟(jì)損失10
• 1.6 防治措施10-11
• 2 豬支原體肺炎滅活疫苗的研究進(jìn)展11-13
• 3 佐劑概述13-15
• 3.1 佐劑的作用機(jī)理13-14
• 3.2 滅活疫苗佐劑分類14-15
• 4 研究意義15-16
• 第二部分 研究內(nèi)容16-47
• 試驗(yàn)一 利用小鼠模型評價不同水性及水包油佐劑對豬支原體肺炎滅活疫苗的免疫增強(qiáng)作用16-32
• 1 引言16-18
• 1.1 豬支原體肺炎疫苗免疫特點(diǎn)及對佐劑的需求16
• 1.2 豬支原體肺炎滅活疫苗佐劑的初步篩選16-18
• 2 材料與方法18-24
• 2.1 試驗(yàn)材料18-19
• 2.2 試驗(yàn)方法19-24
• 3 結(jié)果與分析24-30
• 3.1 免疫刺激復(fù)合物基質(zhì)(ISCOM-matrix)佐劑的電鏡觀察24
• 3.2 小鼠淋巴細(xì)胞增殖反應(yīng)測定24-26
• 3.3 小鼠血清IgG抗體的ELISA測定26-28
• 3.4 第一、二批次小鼠淋巴細(xì)胞增殖反應(yīng)測定28
• 3.5 第一、二批次小鼠血清IgG抗體的ELISA測定28-30
• 4 討論30-32
• 試驗(yàn)二 水性及水包油型佐劑豬支原體肺炎滅活疫苗對本動物的免疫及攻毒保護(hù)效果評價32-42
• 1 引言32
• 2 材料與方法32-36
• 2.1 試驗(yàn)材料32-33
• 2.2 試驗(yàn)方法33-36
• 3 結(jié)果36-39
• 3.1 豬支原體肺炎佐劑滅活疫苗(NJ株)肌肉注射免疫效力研究36-38
• 3.2 豬支原體肺炎滅活疫苗(NJ株)肌肉注射免疫攻毒保護(hù)研究38-39
• 4 討論39-42
• 4.1 血清抗體水平與保護(hù)力39-40
• 4.2 細(xì)胞免疫與保護(hù)力40-41
• 4.3 小鼠模型試驗(yàn)與本動物試驗(yàn)檢測結(jié)果的差異41
• 4.4 佐劑的作用41-42
• 試驗(yàn)三 佐劑的安全性評價42-47
• 1 引言42
• 2 材料與方法42-43
• 2.1 試驗(yàn)材料42
• 2.2 試驗(yàn)方法42-43
• 3 結(jié)果43-45
• 3.1 幾種不同佐劑滅活苗皮下注射小鼠后的臨床反應(yīng)43
• 3.2 皮下注射幾種不同佐劑滅活疫苗后對小鼠體重的影響43-44
• 3.3 皮下注射幾種不同佐劑滅活疫苗后對小鼠平均日增重的影響44-45
• 4 討論45-47
• 第三部分 結(jié)論47-48
• 參考文獻(xiàn)48-52
• Abstract52-56
• 致謝56

【參考文獻(xiàn)】

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  本文關(guān)鍵詞：豬支原體肺炎滅活疫苗水性及水包油型佐劑研制及初步免疫效果評價，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

本文編號：276270