本文關(guān)鍵詞：sFRP5抑制Wnt3a對黑素細胞黑素形成作用的研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：黑素細胞來源于神經(jīng)嵴，在發(fā)育過程中逐漸遷移至表皮后形成毛囊中的黑素干細胞，其主要功能是合成黑色素維持皮膚的正常著色。目前的研究發(fā)現(xiàn)Wnt信號通路對黑素細胞的發(fā)育和分化具有重要的調(diào)控作用，分泌型卷曲相關(guān)蛋白（sFRPs）是Wnt信號通路的拮抗因子，因其結(jié)構(gòu)上與Wnt受體極為相似而發(fā)揮調(diào)節(jié)Wnt信號通路的作用。本課題著重于研究sFRP5抑制Wnt3a對黑素細胞的作用，首先在體檢測sFRP5在毛囊黑素中的表達情況，并以永生化的黑素細胞為體外模型,利用腺病毒表達載體，通過檢測黑素分化標志物的表達來明確sFRP5抑制Wnt3a對黑素母細胞分化和黑素形成的作用以及對Wnt/β-catenin經(jīng)典通路的影響，最后以DCT-LacZ轉(zhuǎn)基因小鼠為模型，在體觀察sFRP5對黑素細胞的影響。主要結(jié)果如下： 1. sFRP5在毛囊黑素中表達情況的研究 采用免疫組化法檢測sFRP5在小鼠毛囊黑素譜系中的表達，結(jié)果發(fā)現(xiàn)：在生長期sFRP5蛋白在Bulge的外根鞘以及外根鞘和毛基質(zhì)之間的部位表達，在退化期sFRP5蛋白的表達減少，在靜止期幾乎未檢測出sFRP5的表達。sFRP5mRNA的表達情況與免疫組化結(jié)果一致。 2.sFRP5抑制Wnt3a對黑素細胞作用的體外研究 以永生化的黑素細胞為模型，利用腺病毒表達載體，設(shè)置Control組、Wnt3a處理組、 Wnt3a+sFRP5處理組進行實驗，檢測黑素細胞黑素形成能力和分化標志物的表達。結(jié)果發(fā)現(xiàn)：L-DOPA測定酪氨酸酶活性結(jié)果顯示W(wǎng)nt3a+sFRP5處理組酪氨酸酶活性低于Wnt3a處理組，Masson-Fontanas銀染色法和NaOH裂解法定量檢測黑素含量顯示W(wǎng)nt3a+sFRP5處理組形成的黑素明顯降低，RT-PCR和Western blot檢測結(jié)果顯示W(wǎng)nt3a+sFRP5處理組能下調(diào)TRP-1、TYR、MITF基因和蛋白的表達。 3.sFRP5對Wnt/β-catenin信號通路的影響 運用RT-PCR、Western blot和Top-luc熒光素酶報告基因分析β-catenin的表達情況，，結(jié)果如下:Wnt3a+sFRP5處理組β-catenin的基因和蛋白表達水平明顯下調(diào)，熒光素酶報告基因分析結(jié)果一致。 4. sFRP5抑制Wnt3a對黑素細胞作用的體內(nèi)研究 運用DCT-LacZ轉(zhuǎn)基因小鼠模型在毛囊靜止期皮內(nèi)注射腺病毒，結(jié)果發(fā)現(xiàn)：注射后8天可以見到Ad-Wnt3a處理部位皮膚顏色明顯變黑，Ad-GFP和Ad-Wnt3a+Ad-sFRP5注射部位皮膚為粉色；組織學切片HE染色顯示Ad-Wnt3a處理組小鼠皮膚毛囊中的成熟黑素細胞明顯增多，Ad-Wnt3a+Ad-sFRP5聯(lián)合處理組未觀察到成熟的黑素細胞。 本課題首次證明了sFRP5在小鼠毛囊周期黑素細胞譜系中的表達情況，并且從體內(nèi)和體外兩個方面證明sFRP5抑制了Wnt3a促進黑素形成的作用，該實驗為研究黑素干細胞分化調(diào)節(jié)的機制提供了另一途徑，對臨床上色素脫失性疾病如白癜風的治療也有很好的提示作用。
【關(guān)鍵詞】：sFRP5 Wnt3a 黑素細胞
【學位授予單位】：重慶醫(yī)科大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2014
【分類號】：R329.2
【目錄】：

• 英漢縮略語名詞對照5-6
• 中文摘要6-8
• ABSTRACT8-12
• 前言12-15
• 第一部分 sFRP5 調(diào)節(jié) Wnt3a 對黑素細胞作用的體外研究15-38
• 引言15
• 1 材料與方法15-28
• 2 結(jié)果28-34
• 3 討論34-36
• 小結(jié)36-38
• 第二部分 sFRP5 調(diào)節(jié) Wnt3a 對黑素細胞作用的體內(nèi)研究38-47
• 引言38
• 1 材料與方法38-42
• 2 結(jié)果42-45
• 3 討論45-46
• 小結(jié)46-47
• 全文總結(jié)47-48
• 參考文獻48-51
• 文獻綜述51-58
• 參考文獻55-58
• 致謝58-59
• 碩士期間發(fā)表論文59-60

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本文編號：275981