本文關(guān)鍵詞：調(diào)節(jié)角質(zhì)形成細(xì)胞中的Notch信號對成纖維維細(xì)胞活性的影響，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：目的： 探討在復(fù)合培養(yǎng)的條件下，通過調(diào)節(jié)角質(zhì)形成細(xì)胞中的Notch信號，，了解其對成纖維細(xì)胞增殖能力、以及分泌細(xì)胞外基質(zhì)和細(xì)胞因子的影響。 方法： 在誘導(dǎo)角質(zhì)形成細(xì)胞終末分化的過程中，用Jagged-1或者γ-分泌酶抑制劑DAPT進(jìn)行預(yù)處理，調(diào)控角質(zhì)形成細(xì)胞中的Notch信號，然后通過血清刺刺激和提升至氣液交界面使其達(dá)到復(fù)層生長和終末分化，后與成纖維細(xì)胞共培養(yǎng)。首先，在復(fù)合培養(yǎng)前，即誘導(dǎo)角質(zhì)形成細(xì)胞分化的過程中,通過real-time PCR檢測Notch信號受體Notc-1、相應(yīng)配體Jagged-1、下游調(diào)控基因p21和p63的表達(dá)，明確Notch信號是否活化。其次，通過將調(diào)節(jié)Notch信號后的角質(zhì)形成細(xì)胞與成纖維細(xì)胞復(fù)合培養(yǎng)，細(xì)胞計數(shù)檢測成纖維細(xì)胞增殖能力、real-time PCR和ELISA分別從mRNA和蛋白質(zhì)水平檢測成纖維細(xì)胞合成和分泌的Collagen-1、Fibronectin、KGF和細(xì)胞因子的表達(dá)。 結(jié)果： 用Fc段和DMSO分別對角質(zhì)形成細(xì)胞進(jìn)行預(yù)處理，檢測其Notch信號下游分子p21和p63的表達(dá)，與Blank組相比，均未見明顯異常（P0.05）。而用Jagged-1對角質(zhì)形成細(xì)胞進(jìn)行預(yù)處理，檢測p21和p63、以及Notch信號受體Notch-1和相應(yīng)配體Jagged-1在角質(zhì)形成細(xì)胞中的表達(dá)，均發(fā)現(xiàn)Notch信號明顯活化。用DAPT對角質(zhì)形成細(xì)胞進(jìn)行預(yù)處理，結(jié)果表明：相對于Blank組，DAPT組角質(zhì)形成細(xì)胞中Notch信號受到抑制。分別對復(fù)合培養(yǎng)后第1天、第3天和第5天的成纖維細(xì)胞進(jìn)行檢測，發(fā)現(xiàn)Notch信號活化的Jagged-1組的角質(zhì)形成細(xì)胞能夠明顯促進(jìn)與其共培養(yǎng)的成纖維細(xì)胞的增殖、分泌Collagen-1、Fibronectin、KGF、以及TGF-β1的合成（P0.05）。而在Notch信號被抑制的DAPT組，成纖維細(xì)胞的增殖能力與Blank組對比雖無明顯差別（P0.05），但其分泌Collagen-1、Fibronectin、KGF和TGF-β1的能力卻明顯受到抑制（P0.05）。 結(jié)論： Notch信號活化可能參與瘢痕的增生過程，阻斷Notch信號后的角質(zhì)形成細(xì)胞與成纖維細(xì)胞共培養(yǎng)，能夠明顯抑制成纖維細(xì)胞合成和分泌Collagen-1、Fibronectin、KGF和TGF-β1的能力，從而抑制瘢痕的增生。成纖維細(xì)胞合成的KGF和TGF-β1可能參與了該過程的調(diào)節(jié)。
【關(guān)鍵詞】：Notch信號 角質(zhì)形成細(xì)胞 成纖維細(xì)胞 復(fù)合培養(yǎng) 細(xì)胞外基質(zhì)
【學(xué)位授予單位】：第四軍醫(yī)大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2013
【分類號】：R329.2
【目錄】：

• 縮略語表5-6
• 中文摘要6-8
• Abstract8-10
• 前言10-11
• 文獻(xiàn)回顧11-17
• 實驗一 角質(zhì)形成細(xì)胞誘導(dǎo)分化對 Notch 信號的影響17-29
• 1 材料17-18
• 1.1 主要試劑17
• 1.2 主要耗材17-18
• 1.3 主要儀器設(shè)備18
• 2 方法18-20
• 2.1 新生兒包皮角質(zhì)形成細(xì)胞的培養(yǎng)18
• 2.2 角質(zhì)形成細(xì)胞各種刺激物的配置18
• 2.3 角質(zhì)形成細(xì)胞的復(fù)層培養(yǎng)18-19
• 2.4 qRT-PCR 檢測19-20
• 2.5 統(tǒng)計學(xué)處理20
• 3 結(jié)果20-26
• 3.1 通過復(fù)合培養(yǎng)的方法，對角質(zhì)形成細(xì)吧進(jìn)行誘導(dǎo)分化，檢測 Notch 信號的表達(dá)情況20-23
• 3.2 Fc 段、DMSO（DAPT 溶劑）對調(diào)節(jié) Notch 信號的影響23-26
• 4 討論26-29
• 實驗二 調(diào)節(jié)角質(zhì)形成細(xì)胞中的 Notch 信號對成纖維細(xì)胞活性的影響29-42
• 1 材料29-30
• 1.1 主要試劑29
• 1.2 主要耗材29-30
• 1.3 主要儀器設(shè)備30
• 2 方法30-33
• 2.1 新生兒包皮角質(zhì)形成細(xì)胞的培養(yǎng)30
• 2.2 角質(zhì)形成細(xì)胞各種刺激物的配置30-31
• 2.3 人正常皮膚成纖維細(xì)胞的原代培養(yǎng)31
• 2.4 角質(zhì)形成細(xì)胞-成纖維細(xì)胞復(fù)合培養(yǎng)模型的建立31
• 2.5 成纖維細(xì)胞細(xì)胞計數(shù)31-32
• 2.6 ELISA 試劑盒檢測細(xì)胞培養(yǎng)上清中的 Collagen-132
• 2.7 ELISA 試劑盒檢測細(xì)胞培養(yǎng)上清中的 Fibronectin32
• 2.8 ELISA 試劑盒檢測細(xì)胞培養(yǎng)上清中的 KGF32
• 2.9 qRT-PCR 檢測32
• 2.10 統(tǒng)計學(xué)處理32-33
• 3 結(jié)果33-40
• 3.1 對成纖維細(xì)胞增殖能力的影響33-34
• 3.2 對成纖維細(xì)胞合成和分泌細(xì)胞外基質(zhì)的影響34-37
• 3.3 對成纖維細(xì)胞合成和分泌 KGF 的影響37-38
• 3.4 對成纖維細(xì)胞合成促纖維化相關(guān)因子的影響38-40
• 4 討論40-42
• 小結(jié)42-44
• 參考文獻(xiàn)44-50
• 個人簡歷和研究成果50-51
• 致謝51

【參考文獻(xiàn)】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前4條

1 李冰;刁建升;楚菲菲;王大雷;郭樹忠;夏煒;;阻斷Notch信號抑制角質(zhì)形成細(xì)胞的分泌功能的研究[J];中國美容醫(yī)學(xué);2012年04期

2 趙志力,付小兵,孫同柱,陳偉,孫曉慶;成人正常皮膚和瘢痕組織表皮干細(xì)胞定位與表達(dá)特征的研究[J];中華燒傷雜志;2003年01期

3 賀肖潔,韓春茂,彭佳萍;瘢痕疙瘩和增生性瘢痕表皮異常的實驗研究[J];中華外科雜志;2004年14期

4 沈丹蓓,夏隆慶;角質(zhì)形成細(xì)胞與皮膚創(chuàng)面愈合瘢痕形成[J];中華整形外科雜志;2005年01期

  本文關(guān)鍵詞：調(diào)節(jié)角質(zhì)形成細(xì)胞中的Notch信號對成纖維維細(xì)胞活性的影響，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

本文編號：274849