本文關(guān)鍵詞：鼠抗人B7-H4單克隆抗體的功能研究及可溶性B7-H4酶聯(lián)檢測(cè)試劑盒的優(yōu)化，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：B7-H4作為一種負(fù)性共刺激分子，它是近年來發(fā)現(xiàn)的B7家族的新成員之一。它可以通過抑制T細(xì)胞的增殖、活化和細(xì)胞因子的分泌來調(diào)節(jié)適應(yīng)性免疫反應(yīng)。人類的B7-H4屬于Ⅰ型跨膜蛋白，與其他B7家族成員相比，其胞外部分有20-30％的氨基酸同源性。B7-H4mRNA普遍表達(dá)于人的淋巴組織和非淋巴組織，但B7-H4蛋白在正常外周組織中僅微弱表達(dá)。而健康者新鮮分離的樹突狀細(xì)胞（DCs）、單核細(xì)胞和T、B淋巴細(xì)胞均無表達(dá)，但在體外經(jīng)活化刺激因子作用后也呈微弱表達(dá)。近年來的研究表明,人的腫瘤細(xì)胞如結(jié)腸，前列腺細(xì)胞以及肺癌和卵巢癌組織等呈現(xiàn)B7-H4的異常表達(dá),提示在腫瘤微環(huán)境中，B7-H4在腫瘤細(xì)胞逃避機(jī)體的免疫監(jiān)視和維持機(jī)體免疫耐受過程中發(fā)揮著重要作用。因此，B7-H4有望成為癌癥患者的診斷、預(yù)后以及治療的靶標(biāo)分子之一。 本研究旨在通過Jurkat細(xì)胞與非小細(xì)胞肺癌細(xì)胞株SPCA-1共培養(yǎng)的方法，利用本室已制備的鼠抗人B7-H4單克隆抗體5G3去封閉SPCA-1細(xì)胞上表達(dá)的B7-H4分子，通過共培養(yǎng)，檢測(cè)共培養(yǎng)后Jurkat細(xì)胞的生物學(xué)特性的改變。 利用本實(shí)驗(yàn)室已制備的可溶性B7-H4（sB7-H4）ELISA試劑盒做進(jìn)一步優(yōu)化，檢測(cè)非小細(xì)胞肺癌患者血清中sB7-H4分子的表達(dá)。 一、鼠抗人B7-H4單克隆抗體的功能研究 【目的】體外模擬體內(nèi)環(huán)境對(duì)共培養(yǎng)后Jurkat細(xì)胞的生物學(xué)特性進(jìn)行研究。 【方法】通過RT-PCR和FCM方法檢測(cè)肺腺癌細(xì)胞株SPCA-1上B7-H4表達(dá)水平，SPCA-1細(xì)胞株與Jurkat細(xì)胞共培養(yǎng)72h，收集共培養(yǎng)后的Jurkat細(xì)胞，通過FCM方法檢測(cè)其細(xì)胞表面CD3和CD69分子表達(dá)變化，Jurkat細(xì)胞的凋亡以及用CCK8方法檢測(cè)其細(xì)胞增殖變化。 【結(jié)果】 SPCA-1表達(dá)B7-H4，分子作用于Jurkat細(xì)胞，致使Jurkat細(xì)胞上CD3、CD69分子表達(dá)下調(diào)；發(fā)生凋亡作用；細(xì)胞增殖下降。 【結(jié)論】在非小細(xì)胞肺癌細(xì)胞株SPCA-1中，B7-H4分子能夠負(fù)性調(diào)節(jié)T細(xì)胞介導(dǎo)的免疫應(yīng)答，為研究B7-H4分子在腫瘤免疫中的作用提供了理論基礎(chǔ)。 二、sB7-H4酶聯(lián)檢測(cè)試劑盒優(yōu)化并檢測(cè)非小細(xì)胞患者血清中的sB7-H4含量 【目的】?jī)?yōu)化人sB7-H4酶聯(lián)檢測(cè)試劑盒并檢測(cè)非小細(xì)胞肺癌患者血清中sB7-H4含量。 【方法】以本室已研制的人sB7-H4酶聯(lián)檢測(cè)試劑盒為基礎(chǔ)，采用鼠抗人單抗1F10作為包埋抗體，以生物素(biotin)標(biāo)記的鼠抗人單抗8F10和5G3作為檢測(cè)抗體，對(duì)本室已建立的雙抗體夾心sB7-H4酶標(biāo)檢測(cè)方法進(jìn)行優(yōu)化，并對(duì)非小細(xì)胞肺癌患者血清中的sB7-H4含量進(jìn)行檢測(cè)。 【結(jié)果】成功優(yōu)化了人sB7-H4酶聯(lián)檢測(cè)試劑盒，檢測(cè)抗體以0.4μg/ml的8F10和0.1μg/ml的5G3的組合靈敏度最高，檢測(cè)下線可達(dá)0.25ng/ml。用該優(yōu)化后的試劑盒檢測(cè)的非小細(xì)胞肺癌患者血清中sB7-H4(10.53±2.96)μg/ml，高于健康者(9.0882.43)μg/ml(p0.05)；TNM分期Ⅲ/Ⅳ期sB7-H4水平為(10.803.45)μg/ml，明顯高于Ⅰ/Ⅱ期(10.33±2.67)μg/ml(p0.05)；男性和女性sB7-H4水平相差不大(p0.05)，分別為(10.612.61)μg/ml和（10.38±2.48）μg/ml；年齡大于50歲和小于等于50歲的sB7-H4水平無顯著差異(p0.05)，分別為(10.262.54)μg/ml、(10.412.65)μg/ml；術(shù)前sB7-H4平(10.752.72)μg/ml明顯高于術(shù)后(9.932.88)μg/ml(p 0.05)。 【結(jié)論】成功優(yōu)化了人sB7-H4酶聯(lián)檢測(cè)試劑盒,用該試劑盒檢測(cè)肺癌患者血清中sB7-H4，其含量高于健康者；且與臨床分期、治療情況有關(guān)，與年齡和性別無關(guān)，sB7-H4有望用于肺癌患者的輔助診斷。 綜上所述，成功研究了Jurkat與SPCA-1細(xì)胞共培養(yǎng)后Jurkat細(xì)胞生物學(xué)特性變化，優(yōu)化人sB7-H4酶聯(lián)檢測(cè)試劑盒并檢測(cè)肺癌患者血清中的含量，為進(jìn)一步研究B7-H4分子臨床上的應(yīng)用奠定了物質(zhì)基礎(chǔ)。
【關(guān)鍵詞】：B7-H4 Jurkat細(xì)胞 SPCA-1 sB7-H4 ELISA
【學(xué)位授予單位】：蘇州大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2014
【分類號(hào)】：R392
【目錄】：

• 中文摘要4-6
• Abstract6-10
• 研究背景10-24
• 參考文獻(xiàn)20-24
• 第一部分 鼠抗人 B7-H4 單克隆抗體的功能研究24-37
• 參考文獻(xiàn)36-37
• 第二部分 可溶性 B7-H4 酶聯(lián)檢測(cè)試劑盒優(yōu)化并用于檢測(cè)非小細(xì)胞患者血清中的含量37-45
• 參考文獻(xiàn)44-45
• 總結(jié)與展望45-46
• 研究生期間完成的論文46-47
• 本研究所獲的基金資助47-48
• 縮略詞表48-50
• 致謝50-51

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本文編號(hào)：272736