【摘要】： 目的： 兔骨髓間充質干細胞(BMSCs)誘導分化的軟骨細胞和同種異體BMSCs共培養(yǎng)作為種子細胞復合到動物源性骨-軟骨復合支架上所構建的細胞-支架復合體,植入異體兔膝關節(jié)骨-軟骨復合缺損處,觀察其修復兔膝關節(jié)軟骨及軟骨下骨缺損的結果,探討通過這一方法修復動物體內骨軟骨復合缺損的可行性并初步評價這一新方法的價值。 方法： 1.全骨髓貼壁法分離培養(yǎng)4w齡兔的BMSCs; 2.BMSCs的鑒定：形態(tài)學觀察、流式細胞法觀察BMSCs的表面抗原、細胞周期和細胞活力； 3.用特定誘導液將BMSCs向成軟骨細胞定向誘導分化,通過形態(tài)學觀察、甲苯胺藍染色、Ⅱ型膠原染色等進行鑒定； 4.取誘導分化的軟骨細胞和BMSCs按1：2的比例共培養(yǎng),所得的共培養(yǎng)細胞作為種子細胞； 5.動物實驗取得兔膝關節(jié)圓柱形骨-軟骨復合體,通過深低溫冷凍去抗原后再對復合體脫脂、脫鈣、真空冷凍干燥、輻照消毒等步驟制備骨-軟骨復合支架,并行掃描電鏡的觀察； 6.將共培養(yǎng)的種子細胞復合到骨-軟骨支架上制成細胞-支架復合體,并行掃描電鏡觀察； 7.將細胞-支架復合體植入異體兔膝關節(jié)骨軟骨缺損中,分別于術后第4w、8w、12w取材,通過大體觀察和組織學評分等評價缺損修復情況。 結果： 1.全骨髓貼壁法能獲得兔BMSCs并在體外分離擴增。 2.光鏡下觀察BMSCs形態(tài)為長梭形,流式細胞儀分析,BMSCs的細胞表面抗原高表達CD29、CD44,低表達CD34、CD45,細胞活力為95.27%,G0-G1細胞占96.48%。 3.經成軟骨誘導后BMSCs的細胞形態(tài)發(fā)生變化,由梭形向橢圓形及三角形分化,甲苯胺藍染色和Ⅱ型膠原染色為陽性。 4.誘導分化的軟骨細胞和BMSCs能較好共存并保持原有形態(tài)生長。 5.掃描電鏡觀察動物源性骨軟骨復合支架具有多孔結構,其成骨區(qū)孔隙率為88%,孔徑150-550 u m,平均300μm；成軟骨區(qū)孔隙率為92%,孔徑為25～55μm,平均40μm,并可見共培養(yǎng)細胞能在復合支架上較好的粘附生長和膠原粘附。 6.經術后4w、8w、12w取材進行大體觀察和組織學評分,實驗組有骨組織和軟骨組織形成,成骨區(qū)和成軟骨區(qū)界面耦合情況明顯優(yōu)于對照組和空白組。 結論： 1.全骨髓貼壁法所獲得的兔BMSCs可在體外長期、穩(wěn)定培養(yǎng),擴增,在特定誘導下可向軟骨細胞定向分化。 2.誘導分化的軟骨細胞和BMSCs能按1：2的比例共培養(yǎng)并相互促進增殖和分化。 3.動物源性骨軟骨復合支架具有較好的細胞相容性,是一種理想的支架材料。 4.共培養(yǎng)細胞復合到動物源性骨軟骨復合支架材料上所構建的細胞-支架復合體能成功修復兔膝關節(jié)軟骨及軟骨下骨缺損。
[Abstract]:Aim: to co-culture chondrocytes induced by (BMSCs) from rabbit bone marrow mesenchymal stem cells (BMSCs) and allogeneic BMSCs (BMSCs) as a cell-scaffold complex constructed by composite seeding cells onto animal-derived osteochondral scaffolds. To observe the results of repairing the defects of articular cartilage and subchondral bone of rabbits with allograft bone and cartilage composite defect of knee joint. To explore the feasibility of repairing osteochondral composite defects in animals by this method and to evaluate the value of this new method. Methods: 1. BMSCs, 2.BMSCs: morphological observation, flow cytometry, BMSCs surface antigen, cell cycle and cell viability were observed by whole bone marrow adherent method. 3. BMSCs was induced to differentiate into chondroblast by specific inducer, and identified by morphological observation, toluidine blue staining and type 鈪，

本文編號：2145129