白色念珠菌(Candida albicans)是人類口腔內(nèi)常見的條件致病真菌,生物膜是口腔白色念珠菌最常見的生存方式,在臨床感染中有重要意義。近年來許多學(xué)者發(fā)現(xiàn)群體感應(yīng)與白色念珠菌生物膜形成及其穩(wěn)定的維持密切相關(guān)。farnesol(法呢醇)和tyrosol(對(duì)羥基苯乙醇)是目前已知的白色念珠菌特有的兩種群體感應(yīng)分子,對(duì)前者的研究較為深入,而對(duì)后者的作用研究較少。本研究應(yīng)用倒置顯微鏡和RT-PCR技術(shù)觀察了兩種群體感應(yīng)分子對(duì)白色念珠菌早期生物膜(90 min)細(xì)胞形態(tài)以及HTA1和EFG1基因表達(dá)的調(diào)控,同時(shí)通過MTT實(shí)驗(yàn)對(duì)群體感應(yīng)分子對(duì)白色念珠菌早期生物膜細(xì)胞增殖的作用進(jìn)行了定量分析,以期為深入研究tyrosol和farnesol的作用機(jī)制提供一定的理論依據(jù)。 第一部分群體感應(yīng)分子對(duì)白色念珠菌早期生物膜細(xì)胞形態(tài)的作用 【材料和方法】采用含漱法獲取白色念珠菌臨床株,用RPMI 1640培養(yǎng)液制備濃度為1.0×10~6/mL的白色念珠菌標(biāo)準(zhǔn)株和臨床株標(biāo)準(zhǔn)菌懸液,5%CO_2,37℃條件下以50 mL培養(yǎng)瓶作為載體構(gòu)建白色念珠菌早期生物膜模型。每株白色念珠菌在生物膜生長(zhǎng)過程中,根據(jù)作用的群體感應(yīng)分子不同設(shè)置三組處理組和一組對(duì)照組:(1):100μM tyrosol(tyrosol組);(2):50μM famesol(farnesol組);(3):50μM farnesol+500μM tyrosol(混合處理組);(4):無群體感應(yīng)分子(對(duì)照組)。對(duì)培養(yǎng)90 min后形成的白色念珠菌早期生物膜在倒置顯微鏡下進(jìn)行形態(tài)學(xué)觀察,同時(shí)觀察無群體感應(yīng)分子作用時(shí)生長(zhǎng)48小時(shí)的成熟生物膜。 【結(jié)果】tyrosol組和對(duì)照組早期生物膜內(nèi)均以菌絲相細(xì)胞為主;farnesol組和混合處理組早期生物膜中白色念珠菌細(xì)胞主要表現(xiàn)為孢子相。培養(yǎng)48 h后白色念珠菌成熟生物膜內(nèi)包含了菌絲相、孢子相和假菌絲等多種形態(tài)的細(xì)胞,以菌絲相為主,同時(shí)夾雜有細(xì)胞外多聚物基質(zhì)。 【結(jié)論】Tyrosol對(duì)白色念珠菌早期生物膜內(nèi)細(xì)胞的菌絲形成無明顯促進(jìn)作用,而farnesol則對(duì)早期生物膜內(nèi)細(xì)胞的菌絲形成表現(xiàn)出明顯的抑制作用;當(dāng)環(huán)境中有farnesol存在時(shí),即使高濃度的tyrosol也無法改變其對(duì)菌絲形成的抑制作用。 第二部分群體感應(yīng)分子對(duì)早期生物膜內(nèi)白色念珠菌HTA1和EFG1基因表達(dá)的調(diào)控 【材料和方法】將保種的白色念珠菌標(biāo)準(zhǔn)株和臨床株復(fù)蘇,用RPMI1640培養(yǎng)液制備濃度為1.0×10~6/mL的標(biāo)準(zhǔn)菌懸液,5%CO_2,37℃條件下以50 mL培養(yǎng)瓶作為載體構(gòu)建白色念珠菌早期生物膜模型。每株白色念珠菌在生物膜生長(zhǎng)過程中,根據(jù)作用的群體感應(yīng)分子不同設(shè)置三組處理組和一組對(duì)照組:(1):100μM tyrosol(tyrosol組);(2):50μM farnesol(farnesol組);(3):50μM farnesol+500μM tyrosol(混合處理組);(4):無群體感應(yīng)分子(對(duì)照組)。用無菌細(xì)胞刮刀刮取生長(zhǎng)90 min的早期生物膜,用Trizol試劑盒提取白色念珠菌RNA后進(jìn)行RT-PCR測(cè)試,觀察各組組蛋白編碼基因HTA1和菌絲形成相關(guān)基因EFG1的表達(dá)是否有差異。 【結(jié)果】與對(duì)照組相比,tyrosol組白色念珠菌HTA1的表達(dá)有所增強(qiáng)(P＜0.05),EFG1的表達(dá)并無明顯改變(P＞0.05);farnesol組HTA1和EFG1的表達(dá)均受明顯抑制(P＜0.05);混合處理組HTA1和EFG1的表達(dá)的亦受到明顯的抑制(P＜0.05)。 【結(jié)論】tyrosol能提高白色念珠菌早期生物膜內(nèi)細(xì)胞HTA1的轉(zhuǎn)錄水平,但對(duì)EFG1的表達(dá)無明顯促進(jìn)作用,farnesol對(duì)白色念珠菌早期生物膜內(nèi)細(xì)胞HTA1及EFG1均有明顯抑制作用;當(dāng)tyrosol和farnesol同時(shí)作用時(shí),前者無法改變farnesol對(duì)基因表達(dá)的下調(diào)作用,后者的作用更占優(yōu)勢(shì)。 第三部分群體感應(yīng)分子對(duì)白色念珠菌早期生物膜細(xì)胞增殖的作用 【材料和方法】將保種的白色念珠菌標(biāo)準(zhǔn)株和臨床株復(fù)蘇,用RPMI1640培養(yǎng)液制備濃度為1.0×10~6/mL的標(biāo)準(zhǔn)菌懸液,5%CO_2,37℃條件下構(gòu)建白色念珠菌早期生物膜模型。MTT實(shí)驗(yàn)采用的生物膜構(gòu)建載體為96孔細(xì)胞培養(yǎng)板,根據(jù)作用的群體感應(yīng)分子不同設(shè)置三組處理組和一組對(duì)照組:(1):100μM tyrosol(tyrosol組);(2):50μM farnesol(farnesol組);(3):50μM farnesol+500μM tyrosol(混合處理組);(4):無群體感應(yīng)分子(對(duì)照組)。早期生物膜形成后加入MTT溶液,繼續(xù)孵育4 h,翻轉(zhuǎn)培養(yǎng)板棄去孔內(nèi)液體,加入DMSO,振蕩10 min,用酶標(biāo)儀測(cè)定490nm處吸光度值(OD_(490)),比較不同群體感應(yīng)分子處理對(duì)白色念珠菌早期生物膜細(xì)胞增殖生長(zhǎng)的影響。 【結(jié)果】與對(duì)照組相比,tyrosol組白色念珠菌早期生物膜內(nèi)細(xì)胞數(shù)量無明顯差異(P＞0.05),而farnesol組和混合處理組生物膜內(nèi)細(xì)胞增殖卻受到明顯抑制(P＜0.05)。 【結(jié)論】tyrosol對(duì)白色念珠菌早期生物膜細(xì)胞增殖無顯著促進(jìn)作用;farnesol能夠抑制白色念珠菌早期生物膜的細(xì)胞增殖,并且這種抑制作用不受環(huán)境中高濃度tyrosol的影響。
【學(xué)位授予單位】：南京醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2008
【分類號(hào)】：R379

【參考文獻(xiàn)】

中國(guó)期刊全文數(shù)據(jù)庫 前3條

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本文編號(hào)：2118943