本文選題：熱休克蛋白70　切入點：腺病毒載體　出處：《青島大學(xué)》2009年碩士論文

【摘要】： 目的初步探討不同缺氧時間刺激對神經(jīng)細(xì)胞中外源性HSP70基因表達(dá)的影響及觀察HSP70表達(dá)對神經(jīng)元和膠質(zhì)細(xì)胞缺氧再復(fù)氧損傷的保護(hù)作用。 方法①采用重組腺病毒vAd-HSP70感染體外原代培養(yǎng)的神經(jīng)細(xì)胞,檢測靶細(xì)胞中外源性HSP70的表達(dá)。48h后給予感染細(xì)胞不同缺氧時間(缺氧Oh,0.5h,1h,2h,3h,4h)刺激,再復(fù)氧處理后,用RT-PCR和Western blotting檢測重組腺病毒介導(dǎo)的HSP70基因在神經(jīng)元和膠質(zhì)細(xì)胞中的轉(zhuǎn)錄表達(dá)。②重組腺病毒vAd-HSP70感染體外培養(yǎng)的神經(jīng)元和膠質(zhì)細(xì)胞,vAd-HSP70感染組24h、48h、72h和vAd-GFP感染組的細(xì)胞經(jīng)缺氧再復(fù)氧處理后,分別對細(xì)胞活力、細(xì)胞培養(yǎng)上清中乳酸脫氫酶(LDH)活力及線粒體和胞漿內(nèi)細(xì)胞色素C進(jìn)行檢測分析。 結(jié)果①重組腺病毒vAd-HSP70感染的神經(jīng)細(xì)胞可檢測到外源性HSP70基因的轉(zhuǎn)錄表達(dá)。②經(jīng)缺氧再復(fù)氧處理后,隨著缺氧時間延長,HSP70轉(zhuǎn)錄水平和蛋白表達(dá)都增加,缺氧1h時最高(1.1539±0.0315,0.9699±0.0023),其次是缺氧2h時(1.0398±0.0723,0.9622±0.0026),隨后依次降低,缺氧4h組(0.7477±0.0328,0.9335±0.0034)HSP70表達(dá)最低,與其他各組比較有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05)。③經(jīng)缺氧再復(fù)氧處理后,vAd-HSP70感染組細(xì)胞活力較對照組明顯增強(qiáng)(P0.01);細(xì)胞培養(yǎng)上清中乳酸脫氫酶活力vAd-HSP70感染24h、48h和72h分別為1480±121,1023±106,1132±197,明顯低于vAd-GFP感染組(1976±190,P0.01)。實驗各組線粒體中細(xì)胞色素C含量(0.9856±0.0121,1.0277±0.0073,1.0136±0.0078)高于對照組(0.9695±0.0031,P0.05),而胞漿中的含量(0.9868±0.0076,0.9600±0.0049,0.9645±0.0028)低于對照組(1.0109±0.0049,P0.01),以作用48h最為理想。 結(jié)論①缺氧2h內(nèi)給予神經(jīng)細(xì)胞再復(fù)氧處理外源性HSP70表達(dá)水平較高,有利于神經(jīng)細(xì)胞功能的恢復(fù)。②腺病毒介導(dǎo)的外源性HSP70表達(dá)可保護(hù)神經(jīng)元和膠質(zhì)細(xì)胞抵抗缺氧再復(fù)氧損傷,具有明確的細(xì)胞保護(hù)作用。
[Abstract]:Objective to investigate the effects of hypoxia time stimulation on exogenous HSP70 gene expression in neurons and to observe the protective effect of HSP70 expression on hypoxia reoxygenation injury of neurons and glial cells. Methods 1Recombinant adenovirus vAd-HSP70 was used to infect the primary cultured neurons in vitro. The expression of exogenous HSP70 in target cells was detected for 48 h. The cells were stimulated with different hypoxia time (1 h ~ 2 h ~ 2 h ~ 3 h ~ 4 h) after reoxygenation. Transcriptional expression of HSP70 Gene mediated by Recombinant adenovirus in neurons and glial cells by RT-PCR and Western blotting. 2 Recombinant adenovirus vAd-HSP70 infection of cultured neurons and glial cells in vitro. After oxygen reoxygenation, Cell viability, lactate dehydrogenase (LDH) activity and cytochrome C in mitochondria and cytoplasm were determined. Results 1Transcriptional expression of exogenous HSP70 gene was detected in neurons infected with recombinant adenovirus vAd-HSP70. 2. After hypoxia and reoxygenation, the transcription level and protein expression of HSP70 increased with the prolongation of hypoxia. The highest level was 1.1539 鹵0.0315U 0.9699 鹵0.0023C at 1 h, followed by 1.0398 鹵0.0723U 0.9622 鹵0.0026m at 2h hypoxia, and then decreased in turn. The lowest expression of 0.7477 鹵0.03280.335 鹵0.0034)HSP70 was observed in the hypoxia group for 4 h. Compared with other groups, the activity of vAd-HSP70 in the cell culture supernatant was significantly higher than that in the control group after anoxic reoxygenation, and the activity of lactate dehydrogenase in the supernatant of cell culture was 1480 鹵121 鹵1023 鹵106 1132 鹵197, which was significantly lower than that in the control group, which was significantly lower than that in the control group, which was significantly lower than that in the control group at 24 h and 72 h after hypoxia reoxygenation and hypoxia reoxygenation, respectively. The content of cytochrome C in mitochondria of the experimental group was 0.9856 鹵0.0121 鹵1.0277 鹵0.0073 鹵1.0136 鹵0.0078), which was higher than that of the control group (0.9695 鹵0.0031), while the content of cytoplasm was 0.9868 鹵0.0070.9600 鹵0.0049-0.9645 鹵0.0028), which was better than that of the control group for 48h. Conclusion (1) the expression of exogenous HSP70 after reoxygenation is higher within 2 h after hypoxia, which is beneficial to the recovery of nerve cell function. 2 Adenovirus-mediated exogenous HSP70 expression can protect neurons and glial cells from hypoxia and reoxygenation injury. It has definite cell protective effect.
【學(xué)位授予單位】：青島大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2009
【分類號】：R363

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本文編號：1662676