本文關(guān)鍵詞：重組脂聯(lián)素對(duì)氧化損傷下內(nèi)皮細(xì)胞內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激相關(guān)信號(hào)分子的影響　出處：《福建醫(yī)科大學(xué)》2010年碩士論文　論文類型：學(xué)位論文

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【摘要】： 目的:探討重組脂聯(lián)素對(duì)第三丁基過氧化氫(t-BHP)誘導(dǎo)的人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞(HUVECs)凋亡是否存在影響,同時(shí)觀察重組脂聯(lián)素對(duì)內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激相關(guān)信號(hào)通路IRE1α-JNK的影響。 方法:應(yīng)用不同濃度t-BHP(25、50、100、200、400μmol/L)誘導(dǎo)HUVECs 1～24 h,MTT法觀察t-BHP作用后細(xì)胞的存活率;Hochest/PI染色熒光顯微鏡觀測(cè)細(xì)胞凋亡形態(tài);Western blot檢測(cè)t-BHP誘導(dǎo)HUVECs凋亡過程中細(xì)胞內(nèi)內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激相關(guān)分子IRE1α、p-JNK及Caspase-3蛋白表達(dá)水平的變化。在此基礎(chǔ)上,用攜帶人脂聯(lián)素基因的重組腺病毒感染HUVECs處理,觀察重組脂聯(lián)素對(duì)t-BHP誘導(dǎo)的HUVECs凋亡是否有保護(hù)作用,以及細(xì)胞內(nèi)內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激相關(guān)信號(hào)分子IRE1α、p-JNK及Caspase-3蛋白表達(dá)水平的變化。 結(jié)果:MTT顯示,不同濃度t-BHP(25、50、100、200、400μmol/L)誘導(dǎo)HUVECs 1～24 h后,發(fā)現(xiàn)隨著t-BHP作用濃度的增加和時(shí)間的延長(zhǎng),可明顯抑制HUVECs的生長(zhǎng),并呈現(xiàn)一定的量效和時(shí)效關(guān)系。不同濃度t-BHP處理8 h后, Hochest/PI染色熒光顯微鏡下顯示,隨著t-BHP濃度的增加,HUVECs的損傷更明顯,細(xì)胞凋亡率隨之升高;ER應(yīng)激相關(guān)信號(hào)蛋白IRE1α、p-JNK及凋亡蛋白Caspase-3表達(dá)增加。采用攜帶人脂聯(lián)素基因的重組腺病毒感染HUVECs預(yù)處理,可以明顯減輕t-BHP誘導(dǎo)的HUVECs凋亡,IRE1α蛋白表達(dá)無明顯改變,p-JNK、Caspase-3蛋白表達(dá)均明顯降低。 結(jié)論:(1)t-BHP可明顯誘導(dǎo)HUVECs發(fā)生凋亡性損傷;(2)內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激相關(guān)信號(hào)分子IRE1α、JNK參與了t-BHP誘導(dǎo)HUVECs產(chǎn)生凋亡效應(yīng)的過程;(3)重組脂聯(lián)素可以有效抑制t-BHP誘導(dǎo)HUVECs產(chǎn)生的氧化損傷;(4)重組脂聯(lián)素能夠減輕t-BHP誘導(dǎo)的HUVECs凋亡,但不是通過IRE1α發(fā)揮作用的。
[Abstract]:Objective: to investigate the effect of recombinant adiponectin on apoptosis of human umbilical vein endothelial cells (HUVECs) induced by third Ding Ji. The effects of recombinant adiponectin on endoplasmic reticulum stress-related signaling pathway (IRE1 偽 -JNK) were also observed. Methods: the HUVECs was induced for 24 h with different concentrations of t-BHP2550U (200渭 mol / L). MTT assay was used to observe the survival rate of the cells treated with t-BHP. The morphology of apoptosis was observed by fluorescence microscope with Hochest/PI staining. Western blot was used to detect the intracellular endoplasmic reticulum stress-related molecule IRE1 偽 during t-BHP induced HUVECs apoptosis. On the basis of p-JNK and Caspase-3 protein expression, HUVECs was infected with recombinant adenovirus carrying human adiponectin gene. To observe the protective effect of recombinant adiponectin on HUVECs apoptosis induced by t-BHP and the intracellular endoplasmic reticulum stress-related signaling molecule IRE1 偽. Changes of p-JNK and Caspase-3 protein expression levels. Results HUVECs was induced by different concentrations of t-BHP1 2550m ~ (100 渭 mol / L) at 400 渭 mol 路L ~ (-1) for 24 h. It was found that with the increase of t-BHP concentration and the prolongation of time, the growth of HUVECs could be inhibited obviously, and there was a dose-effect and time-dependent relationship. Hochest/PI staining fluorescence microscope showed that with the increase of t-BHP concentration, the damage of HUVECs was more obvious, and the apoptosis rate increased with the increase of t-BHP concentration. The expression of ER stress-related signal protein IRE1 偽 p-JNK and apoptotic protein Caspase-3 was increased. HUVECs was pretreated with recombinant adenovirus carrying human adiponectin gene. The expression of IRE1 偽 protein in HUVECs apoptosis induced by t-BHP was significantly alleviated, and the expression of p-JNKK Caspase-3 protein was significantly decreased. Conclusion T- BHP can induce apoptotic injury in HUVECs. 2) endoplasmic reticulum stress-related signaling molecule IRE1 偽 -JNK is involved in the process of HUVECs apoptosis induced by t-BHP. 3) Recombinant adiponectin can effectively inhibit the oxidative damage induced by t-BHP induced HUVECs. 4) Recombinant adiponectin could attenuate the apoptosis of HUVECs induced by t-BHP, but not through IRE1 偽.
【學(xué)位授予單位】：福建醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2010
【分類號(hào)】：R363

【共引文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：1393223