本文關鍵詞：慢性不可預見性應激對脂多糖誘導炎性環(huán)境下小膠質細胞活化的影響

  更多相關文章： 皮質酮 小膠質細胞 NLRP3炎癥小體 脂多糖 多巴胺能神經(jīng)元

【摘要】：目的：研究慢性不可預見性應激(Chronic Unpredictable Mide Stress, CUMS)與LPS共同作用導致的皮質酮增多對NLRP3炎癥小體的激活和糖皮質激素受體的表達與功能的影響,觀察小膠質細胞活化介導的DA能神經(jīng)元損傷的情況,并探討其可能的機制。方法：大鼠隨機分成6組,包括假手術組,LPS組,單純CUMS組及CUMS刺激7天,14天,21天三個時間點合并LPS黑質致密部注射組CUMS (7d)+LPS、 CUMS (14d)+LPS、CUMS (21d)+LPS。LPS組和CUMS合并LPS造模組于第22天腦立體定位黑質致密部注射LPS制備大鼠PD模型,其余各組相同位置注射等量生理鹽水。成模后于第29天統(tǒng)一觀察各組的行為學指標變化情況。于第43天腹腔注射阿撲嗎啡觀察各組旋轉情況,隨即處死,取血清和組織待檢。采用酶聯(lián)免疫吸附試驗法(ELISA),檢測待測血清中腫瘤壞死因子-a (Tumor necrosis factor-α, TNF-α)、白細胞介素-1β (Interleukin 1β, L-1β)、白細胞介素-6(Interleukin-6)、皮質酮(Corticosterone, CORT)和促腎上腺皮質激素(Adrenocorticotropichormone, ACTH)的含量水平。采用免疫組織化學法(IHC-P),觀察大腦黑質致密部小膠質細胞的激活和多巴胺能神經(jīng)元的損傷情況。采用免疫蛋白印跡法(Western Blot),檢測大腦黑質致密部半胱氨酸天冬氨酸蛋白水解酶(Cysteinyl aspartate specific proteinase-1, Caspase-1)、凋亡相關斑點樣蛋白(Apoptosis-associated speck-likeprotein containing CARD, ASC)、 Nod樣受體熱蛋白結構域相關蛋白3(Nucleotide binding oligomerization domain-like receptor family pyrin domain containing 3, NLRP3)白介素18(Interleukin-18, IL-18)、白介素-1β (Interleukin-18,IL-1β)以及糖皮質激素受體(Glucocorticoid receptor, GR)和鹽皮質激素受體(Mineralocorticoid receptor,MR)的表達和功能變化。結果：1)行為學實驗觀察結果：和假手術組相比,LPS組,CUMS組,CUMS(14d)+LPS組和CUMS(21d)+LPS組大鼠的自發(fā)活動及探索行為均有不同程度減少。2)旋轉實驗觀察結果：LPS和CUMS (14d)+LPS組大鼠腹腔注射阿撲嗎啡均出現(xiàn)向受損對側旋轉的現(xiàn)象,且CUMS (14d)+LPS組旋轉次數(shù)多于LPS組。3)酶聯(lián)免疫吸附試驗法檢測結果：與假手術組比較,所有CUMS刺激組血清CORT與ACTH含量出現(xiàn)不同程度升高；與假手術組比較,LPS組大鼠血清炎性因子TNF-α、IL-1β和IL-6的含量明顯增多,而與LPS組相比,CUMS(14d)+LPS組血清中炎性因子TNF-α, IL-1β和IL-6的含量繼續(xù)升高。4)免疫組織化學法觀察結果：假手術組與CUMS組大鼠黑質致密部中多巴胺能神經(jīng)元細胞排列整齊,數(shù)量較多且形狀固定,小膠質細胞數(shù)量較少且基本處于靜息狀態(tài)；而LPS組,多巴胺能神經(jīng)元大多變性消失,神經(jīng)元細胞胞體萎縮,形狀模糊,同時小膠質細胞激活明顯增多；與LPS組相比,CUMS (14d)+LPS組加重了多巴胺能神經(jīng)元損傷程度和小膠質細胞激活數(shù)量。5)免疫蛋白印跡法檢測結果：和假手術組相比,LPS組大鼠黑質致密部Caspase-1,ASC和NLRP-3蛋白和炎癥因子IL-18, IL-1β表達水平均有所上升,且CUMS (14d)+LPS組大鼠與LPS組相比均不同程度加大了的這些指標表達水平的升高；而與假手術組相比,CUMS組、CUMS (14d)+LPS組和CUMS (21d)+LPS組大鼠黑質致密部GR和MR表達水平均出現(xiàn)不同程度下降。結論：慢性不可預見性應激引起GR,MR表達降低和功能失調、糖皮質激素水平升高,與LPS協(xié)同作用于小膠質細胞,通過調節(jié)NLRP3炎癥小體的激活,參與小膠質細胞活化,促進促炎因子IL-1β、IL-6、IL-18、TNF-α等的成熟和釋放,促進中樞神經(jīng)系統(tǒng)的炎癥反應,加重DA能神經(jīng)元的損傷和凋亡。
【關鍵詞】：皮質酮 小膠質細胞 NLRP3炎癥小體 脂多糖 多巴胺能神經(jīng)元
【學位授予單位】：安徽醫(yī)科大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2016
【分類號】：R742.5
【目錄】：

• 英文縮略詞5-6
• 中文摘要6-8
• 英文摘要8-11
• 1. 前言11-13
• 2. 實驗材料13-14
• 3. 實驗方法14-21
• 4. 統(tǒng)計學分析21-22
• 5. 結果22-30
• 6. 討論30-33
• 7. 結論33-34
• 參考文獻34-39
• 致謝39-40
• 附錄40-41
• 綜述41-50
• 參考文獻46-50

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本文編號：877305