本文關(guān)鍵詞：腦膠質(zhì)瘤中MGMT基因啟動(dòng)子甲基化與表達(dá)的關(guān)聯(lián)分析及與SNP的相關(guān)探究

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【摘要】：腦膠質(zhì)瘤(Glioma)是成年人中最常見的原發(fā)性腦腫瘤。臨床研究表明06-甲基鳥嘌呤-DNA甲基轉(zhuǎn)移酶(06-methylguanine-DNA methyltransferese,MGMT)表達(dá)水平和基因甲基化與術(shù)后接受替莫唑胺(Temozolomid,TMZ)治療的腦膠質(zhì)瘤病人存活時(shí)間的長(zhǎng)短存在著密切的關(guān)系。MGMT基因啟動(dòng)子區(qū)域中SNP的基因型、CpG位點(diǎn)的甲基化程度與基因的表達(dá)存在著緊密的關(guān)聯(lián).MGMT基因啟動(dòng)子區(qū)域甲基化程度已經(jīng)成為TMZ治療的腦膠質(zhì)瘤患者的一個(gè)獨(dú)立的預(yù)測(cè)因素.MGMT基因啟動(dòng)子區(qū)域98個(gè)CpG位點(diǎn)的甲基化程度存在著很大的異質(zhì)性,目前臨床上對(duì)MGMT基因的檢測(cè)僅僅集中在9個(gè)CpG位點(diǎn)之內(nèi),這些位點(diǎn)能否準(zhǔn)確反應(yīng)基因甲基化水平仍然存在爭(zhēng)議。本研究收集了60多例中國(guó)腦膠質(zhì)瘤患者的新鮮腦組織樣本,用直接測(cè)序法檢測(cè)了MGMT基因啟動(dòng)子區(qū)域的7個(gè)SNP位點(diǎn)的基因型,焦磷酸測(cè)序法對(duì)MGMT基因啟動(dòng)子區(qū)域98個(gè)CpG位點(diǎn)進(jìn)行了全部掃描,并用qRT-PCR法檢測(cè)了樣本的mRNA表達(dá)水平。試圖尋找與MGMT基因表達(dá)最密切相關(guān)的SNP位點(diǎn),以及CpG位點(diǎn)與CpG區(qū)域。結(jié)果發(fā)現(xiàn)：SNP位點(diǎn)rs11016798的TT基因型與MGMT的低表達(dá)具有顯著的相關(guān)性(p0.05)；在不同腦膠質(zhì)瘤患者中,MGMT基因甲基化存在著顯著差異；高甲基化組包括14例樣本,平均甲基化水平為37.4%,低甲基化組包含28例樣本,平均甲基化水平為12.9%,樣本內(nèi)MGMT基因表達(dá)水平與甲基化程度存在著密切的相關(guān)性(p0.001)；位于啟動(dòng)子-436到-374,-342到-249,-228到-172,95到153這四個(gè)區(qū)域中的共38個(gè)CpG位點(diǎn)的高甲基化顯著抑制了MGMT基因的表達(dá)(p0.0001)；腦膠質(zhì)瘤預(yù)后相關(guān)基因IDH1的突變與MGMT基因的高甲基化存在著顯著的相關(guān)性(p0.05).總之,在腦膠質(zhì)瘤患者M(jìn)GMT基因的相關(guān)性探究中,我們分析得到了一些與基因表達(dá)密切相關(guān)的SNP位點(diǎn)和CpG位點(diǎn),為將來中國(guó)腦膠質(zhì)瘤患者個(gè)體化化療用藥提供依據(jù)。
【關(guān)鍵詞】：腦膠質(zhì)瘤 MGMT基因 SNP 甲基化 焦磷酸測(cè)序
【學(xué)位授予單位】：西北大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號(hào)】：R739.4
【目錄】：

• 摘要3-4
• Abstract4-7
• 前言7-9
• 第一章 緒論9-20
• 1.1 腦膠質(zhì)瘤概述9-10
• 1.2 MGMT基因檢測(cè)與腦膠質(zhì)瘤病人的個(gè)體化用藥10-14
• 1.2.1 替莫唑胺介紹10-11
• 1.2.2 MGMT基因結(jié)構(gòu)11-12
• 1.2.3 MGMT基因檢測(cè)與TMZ用藥與腦膠質(zhì)瘤的相關(guān)性12-14
• 1.3 MGMT基因的檢測(cè)方法與研究進(jìn)展14-18
• 1.3.1 MGMT基因啟動(dòng)子區(qū)域甲基化檢測(cè)方法及研究進(jìn)展14-18
• 1.3.2 MGMT基因啟動(dòng)子區(qū)域SNP檢測(cè)方法及研究進(jìn)展18
• 1.4 立題背景與意義18-20
• 第二章 實(shí)驗(yàn)方法的建立20-28
• 2.1 實(shí)驗(yàn)整體設(shè)計(jì)思路20
• 2.2 實(shí)驗(yàn)材料20-21
• 2.2.1 實(shí)驗(yàn)儀器和軟件20
• 2.2.2 實(shí)驗(yàn)試劑和材料20-21
• 2.3 實(shí)驗(yàn)方法的建立21-27
• 2.3.1 引物的設(shè)計(jì)與制備21-24
• 2.3.2 新鮮組織中總DNA的提取24-25
• 2.3.3 DNA樣本的重亞硫酸鹽轉(zhuǎn)化25-26
• 2.3.4 新鮮組織中總RNA的提取26-27
• 2.3.5 實(shí)驗(yàn)結(jié)果與分析27
• 2.4 本章小結(jié)27-28
• 第三章 MGMT基因啟動(dòng)子區(qū)域SNP與甲基化的檢測(cè)28-44
• 3.1 MGMT啟動(dòng)子區(qū)域SNP檢測(cè)28-33
• 3.1.1 SNP檢測(cè)方法與原理28
• 3.1.2 實(shí)驗(yàn)儀器和試劑28
• 3.1.3 實(shí)驗(yàn)具體過程28-30
• 3.1.4 實(shí)驗(yàn)結(jié)果與分析30-33
• 3.2 MGMT基因啟動(dòng)子區(qū)域甲基化的檢測(cè)33-42
• 3.2.1 甲基化檢測(cè)方法與原理33-34
• 3.2.2 實(shí)驗(yàn)儀器和試劑34
• 3.2.3 實(shí)驗(yàn)具體過程34-36
• 3.2.4 實(shí)驗(yàn)結(jié)果與分析36-42
• 3.3 本章小結(jié)42-44
• 第四章 MGMT基因表達(dá)的檢測(cè)及結(jié)果的相關(guān)性分析44-56
• 4.1 檢測(cè)方法與原理44-45
• 4.2 實(shí)驗(yàn)儀器和試劑45
• 4.3 實(shí)驗(yàn)具體過程45-46
• 4.4 實(shí)驗(yàn)結(jié)果46-49
• 4.5 數(shù)據(jù)分析49-54
• 4.5.1 與表達(dá)相關(guān)的MGMT基因甲基化位點(diǎn)分析49-52
• 4.5.2 SNP位點(diǎn)基因型與基因甲基化、表達(dá)的相關(guān)性分析52-53
• 4.5.3 IDH1突變與MGMT基因表達(dá)的相關(guān)性分析53-54
• 4.6 本章小結(jié)54-56
• 全文總結(jié)56-57
• 參考文獻(xiàn)57-64
• 攻讀碩士學(xué)位期間參加的主要科研項(xiàng)目64-65
• 致謝65-66

【參考文獻(xiàn)】

中國(guó)期刊全文數(shù)據(jù)庫 前6條

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本文編號(hào)：865827