本文關(guān)鍵詞：瘦素抑制星形膠質(zhì)細(xì)胞縫隙連接蛋白-43表達(dá)改善腦缺血再灌注損傷的機(jī)制研究

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【摘要】：瘦素是一種分泌性多肽類(lèi)激素,主要通過(guò)中樞神經(jīng)系統(tǒng)的受體發(fā)揮其生理作用。我們前期的研究已經(jīng)證明瘦素與腦梗病灶好轉(zhuǎn)密切相關(guān),但是其具體的機(jī)制仍不清楚。眾所周知,腦梗的主要機(jī)制是缺血、缺氧以及再灌注過(guò)程中產(chǎn)生的大量氧自由基、興奮性神經(jīng)遞質(zhì)、鈣離子等神經(jīng)毒性因子引起的神經(jīng)元不可逆性損傷甚至壞死,這也是導(dǎo)致腦梗后遺癥的主要原因。由于神經(jīng)元損傷的不可逆性,那么我們推測(cè),瘦素可能是通過(guò)調(diào)節(jié)中樞神經(jīng)系統(tǒng)中其他類(lèi)型的神經(jīng)細(xì)胞來(lái)發(fā)揮對(duì)腦梗的保護(hù)作用。組織的細(xì)胞與細(xì)胞之間存在著信息交流,這種信息交流的方式主要是通過(guò)細(xì)胞間縫隙連接介導(dǎo)細(xì)胞之間的營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)、代謝產(chǎn)物、離子、小分子物質(zhì)的交換,從而調(diào)控細(xì)胞的病理生理過(guò)程。Connexin43 (Cx43)是中樞神經(jīng)系統(tǒng)中分布最廣泛的一種縫隙連接蛋白,它被認(rèn)為在對(duì)中樞神經(jīng)系統(tǒng)損傷做出反應(yīng)的過(guò)程中發(fā)揮著重要的作用。Cx43主要在星形膠質(zhì)細(xì)胞上表達(dá),并且星形膠質(zhì)細(xì)胞是對(duì)神經(jīng)元起保護(hù)和支持作用的一類(lèi)神經(jīng)細(xì)胞。因此,我們推測(cè)瘦素有可能通過(guò)調(diào)節(jié)星形膠質(zhì)細(xì)胞Cx43的表達(dá)發(fā)揮對(duì)腦缺血再灌注損傷的保護(hù)作用。本研究擬在小鼠、器官型腦片、細(xì)胞三個(gè)層次上建立腦缺血再灌注損傷模型,探討瘦素的保護(hù)作用及其可能的機(jī)制。主要包括以下3個(gè)部分的內(nèi)容：第一部分,研究瘦素對(duì)腦缺血再灌注損傷的保護(hù)作用,并觀察瘦素對(duì)腦組織中Cx43表達(dá)的影響；第二部分,在器官型腦片水平上驗(yàn)證瘦素的神經(jīng)保護(hù)作用并探討其可能的機(jī)制；第三部分,進(jìn)一步在細(xì)胞水平上驗(yàn)證瘦素調(diào)控Cx43發(fā)揮神經(jīng)保護(hù)作用的機(jī)制。結(jié)果如下：1瘦素能夠顯著改善小鼠腦缺血再灌注損傷,同時(shí)抑制腦組織中Cx43高表達(dá)(1)線栓法制備小鼠局灶性腦缺血再灌注損傷模型,外源性給與瘦素能夠顯著減小腦梗死灶體積、改善神經(jīng)功能損傷評(píng)分；(2)免疫組化可見(jiàn),瘦素能顯著上調(diào)Bcl-2的表達(dá),并抑制Caspase-3的表達(dá);(3)腦缺血再灌注損傷能夠顯著誘導(dǎo)Cx43在缺血半影區(qū)高表達(dá)。瘦素能夠顯著抑制Cx43高表達(dá)。同時(shí),瘦素基因缺陷鼠腦組織中Cx43表達(dá)水平顯著高于野生型。2在器官型腦片水平上驗(yàn)證瘦素的神經(jīng)保護(hù)作用并探討其可能的機(jī)制(1)器官型腦片缺氧復(fù)氧損傷后瘦素基因缺陷型腦片中Cx43的表達(dá)水平顯著高于野生型,瘦素受體封閉劑能夠逆轉(zhuǎn)瘦素對(duì)Cx43表達(dá)的抑制作用；(2)瘦素能夠減少缺氧復(fù)氧損傷誘導(dǎo)的神經(jīng)細(xì)胞死亡,并能夠顯著降低鈣離子超載以及抑制鈣調(diào)蛋白的過(guò)度活化；(3)免疫熒光雙標(biāo)表明Cx43主要定位在星形膠質(zhì)細(xì)胞。3進(jìn)一步在細(xì)胞水平上驗(yàn)證瘦素調(diào)控Cx43發(fā)揮神經(jīng)保護(hù)作用的機(jī)制(1) siRNA干擾掉原代星形膠質(zhì)細(xì)胞Cx43表達(dá)后,缺氧復(fù)氧損傷誘導(dǎo)的細(xì)胞死亡顯著降低；(2)瘦素能夠抑制正常及缺氧復(fù)氧損傷的原代星形膠質(zhì)細(xì)胞中Cx43表達(dá),并有一定的濃度梯度效應(yīng),同時(shí)瘦素能夠抑制缺氧復(fù)氧損傷誘導(dǎo)的原代星形膠質(zhì)細(xì)胞中鈣超載及鈣調(diào)蛋白過(guò)度活化,Cx43抑制劑具有相似的作用；(3)瘦素主要是通過(guò)ERK1/2信號(hào)通路抑制Cx43的表達(dá),進(jìn)而減少細(xì)胞內(nèi)鈣離子超載以及細(xì)胞死亡,發(fā)揮神經(jīng)保護(hù)作用。以上研究結(jié)果表明：(1)瘦素能夠減輕腦缺血再灌注損傷,發(fā)揮重要的神經(jīng)保護(hù)作用；(2)瘦素發(fā)揮神經(jīng)保護(hù)作用可能是通過(guò)抑制缺血再灌注損傷誘導(dǎo)的星形膠質(zhì)細(xì)胞Cx43過(guò)度表達(dá)；(3)瘦素抑制星形膠質(zhì)細(xì)胞Cx43過(guò)度表達(dá),降低細(xì)胞內(nèi)鈣超載,發(fā)揮神經(jīng)保護(hù)作用；(4)瘦素抑制腦缺血再灌注損傷后Cx43的高表達(dá)主要是通過(guò)ERK1/2信號(hào)通路。
【關(guān)鍵詞】：瘦素 腦缺血再灌注 細(xì)胞通訊 縫隙連接 信號(hào)通路
【學(xué)位授予單位】：中國(guó)人民解放軍醫(yī)學(xué)院
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類(lèi)號(hào)】：R743
【目錄】：

• 英文縮略詞表5-6
• 中文摘要6-9
• 英文摘要9-12
• 前言12-14
• 第一部分：瘦素對(duì)小鼠腦缺血再灌注損傷的保護(hù)作用及Cx43表達(dá)的影響14-28
• 1 實(shí)驗(yàn)材料14-18
• 2 方法18-22
• 3 結(jié)果22-26
• 4 討論26-28
• 5 小結(jié)28
• 第二部分：器官型腦片缺氧復(fù)氧損傷模型驗(yàn)證瘦素的神經(jīng)保護(hù)作用及其可能的機(jī)制28-37
• 1 實(shí)驗(yàn)材料28-29
• 2 方法29-30
• 3 結(jié)果30-35
• 4 討論35-37
• 5 小結(jié)37
• 第三部分：細(xì)胞水平檢測(cè)瘦素對(duì)Cx43表達(dá)的影響及主要的信號(hào)機(jī)制37-52
• 1 實(shí)驗(yàn)材料37-38
• 2 方法38-41
• 3 結(jié)果41-49
• 4 討論49-51
• 5 小結(jié)51-52
• 機(jī)制模式圖52-53
• 參考文獻(xiàn)53-58
• 綜述58-67
• 參考文獻(xiàn)63-67
• 攻讀學(xué)位期間發(fā)表文章情況67-68
• 致謝68

【參考文獻(xiàn)】

中國(guó)期刊全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前2條

1 顏光濤;;瘦素有望成為診治腫瘤的一個(gè)關(guān)鍵點(diǎn)[J];軍醫(yī)進(jìn)修學(xué)院學(xué)報(bào);2010年01期

2 楊曉帆;郭艷芹;陳培;張春軍;;阿爾茨海默病的分子發(fā)生機(jī)制及治療進(jìn)展[J];牡丹江醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào);2010年04期

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本文編號(hào)：853412