本文關(guān)鍵詞：急性缺血腦組織靶向肽的篩選、鑒定及分子成像研究

  更多相關(guān)文章： 缺血性腦卒中 噬菌體展示技術(shù) 靶向肽 分子探針 分子成像

【摘要】：急性缺血性腦卒中能夠引發(fā)大腦神經(jīng)組織的一系列應(yīng)激反應(yīng),包括酸中毒、興奮性氨基酸釋放、細(xì)胞內(nèi)鈣超載、氧自由基釋放、炎癥反應(yīng)及細(xì)胞凋亡,這些應(yīng)激反應(yīng)的進(jìn)展通常反應(yīng)腦卒中的病理進(jìn)程。準(zhǔn)確評(píng)價(jià)腦缺血后某一時(shí)期應(yīng)激反應(yīng)進(jìn)展,實(shí)現(xiàn)其定位、定性、定量及可視化,對(duì)于評(píng)估腦損傷與修復(fù)、指導(dǎo)腦卒中的個(gè)體化治療和預(yù)測(cè)病人預(yù)后具有重要的意義。分子影像技術(shù)能夠通過(guò)特異性的分子探針從活細(xì)胞水平實(shí)現(xiàn)特定分子的可視化和定量研究,可用于腦缺血后病理進(jìn)程的監(jiān)測(cè)。但現(xiàn)有的可用于腦卒中分子成像的特異性分子探針報(bào)道并不多見(jiàn),限制了分子影像技術(shù)的應(yīng)用。本研究通過(guò)噬菌體展示肽庫(kù)體內(nèi)篩選技術(shù),以期獲得能夠靶向缺血腦組織的多肽,并構(gòu)建分子探針,初步實(shí)現(xiàn)缺血腦卒中的分子成像,主要實(shí)驗(yàn)結(jié)果如下：1、急性缺血腦組織靶向分子的體內(nèi)篩選通過(guò)線(xiàn)栓法構(gòu)建小鼠右側(cè)大腦中動(dòng)脈阻塞(MCAO)模型,模擬人類(lèi)急性缺血性腦卒中。通過(guò)噬菌體展示七肽庫(kù)對(duì)MCAO小鼠進(jìn)行體內(nèi)篩選,經(jīng)四輪篩選后噬菌體克隆在MCAO小鼠缺血側(cè)腦組織的密度較第一輪篩選時(shí)富集了10.4倍。從第四輪篩選所回收噬菌體克隆中隨機(jī)挑選120個(gè)分隔良好的藍(lán)色噬菌斑進(jìn)行擴(kuò)增培養(yǎng)后,提取DNA測(cè)序,最終成功測(cè)序106個(gè)噬菌體克隆,共得到17種序列,其中多肽序列HGGVRLY出現(xiàn)頻次最高,占有絕對(duì)優(yōu)勢(shì),將其命名為HGG肽,展示有該肽的噬菌體克隆命名為HGG-M13噬菌體,作為候選噬菌體用于后續(xù)實(shí)驗(yàn)。2、HGG-M13噬菌體肽及HGG肽靶向缺血腦組織的特異性鑒定本研究首先從HGG-M13噬菌體的角度,通過(guò)噬菌體體內(nèi)回輸實(shí)驗(yàn)和免疫熒光實(shí)驗(yàn)鑒定HGG-M13噬菌體能夠靶向缺血腦組織,而且這種靶向性依賴(lài)于噬菌體表面展示的HGG肽而不是噬菌體自身的骨架蛋白；免疫熒光雙標(biāo)實(shí)驗(yàn)結(jié)果提示HGG-M13噬菌體與缺血腦組織中部分神經(jīng)元共定位。隨后,分別采用5-TAMRA和FITC兩種熒光基團(tuán)修飾HGG肽,并注射至MCAO小鼠體內(nèi),HGG熒光肽主要集中在缺血側(cè)腦組織,與HGG-M13噬菌體結(jié)果相一致,再次提示HGG肽能夠靶向缺血腦組織。此外,通過(guò)體外培養(yǎng)神經(jīng)元,構(gòu)建氧糖剝奪模型,并用HGG熒光肽與之孵育,結(jié)果提示HGG熒光肽能夠與氧糖剝奪后的神經(jīng)元結(jié)合。3、基于HGG肽構(gòu)建急性腦缺血靶向分子探針及初步分子成像在EDC/Sulfa-NHS活化下,HGG肽上的氨基與錳鋅鐵氧體納米顆粒表面所攜帶的羧基發(fā)生縮合反應(yīng),使得錳鋅鐵氧體納米顆粒表面修飾HGG肽,從而構(gòu)建得到分子探針,并對(duì)其表征：電鏡尺寸大小為15.17 nm,水合粒徑為53.98 nm,r2弛豫率為382.45mM-1S-1。將該分子探針注射至MCAO小鼠體內(nèi),通過(guò)磁共振成像檢測(cè)到該分子探針的信號(hào)主要聚集在大腦缺血側(cè),而未經(jīng)HGG肽修飾的錳鋅鐵氧體對(duì)照探針則無(wú)信號(hào)。綜上所述,本研究通過(guò)噬菌體展示肽庫(kù)篩選技術(shù)對(duì)MCAO小鼠進(jìn)行體內(nèi)篩選,得到能夠靶向缺血腦組織的HGG肽,并初步鑒定了該肽的靶細(xì)胞為缺血狀態(tài)下的神經(jīng)元�；谠撾臉�(gòu)建了磁共振成像分子探針,磁共振成像顯示該分子探針能夠在MCAO小鼠的缺血側(cè)腦組織內(nèi)分布,但是否可用于腦卒中的分子成像需要進(jìn)一步深入研究。
【關(guān)鍵詞】：缺血性腦卒中 噬菌體展示技術(shù) 靶向肽 分子探針 分子成像
【學(xué)位授予單位】：東南大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類(lèi)號(hào)】：R743.3
【目錄】：

• 摘要4-6
• Abstract6-9
• 主要英文縮略詞表9-11
• 前言11-13
• 第一章 文獻(xiàn)綜述急性腦缺血的炎癥反應(yīng)與抗炎治療研究進(jìn)展13-25
• 一、參與缺血性腦卒中炎癥反應(yīng)的細(xì)胞13-20
• 二、腦卒中的抗炎治療20-22
• 三、抗炎治療的挑戰(zhàn)22-25
• 第二章 急性缺血腦組織靶向分子的體內(nèi)篩選25-39
• 引言25
• 一、材料25-27
• 二、方法27-30
• 三、結(jié)果30-35
• 四、討論35-39
• 第三章 HGG噬菌體肽及熒光肽靶向缺血腦組織的特異性鑒定39-55
• 引言39
• 一、材料39-41
• 二、方法41-45
• 三、結(jié)果45-51
• 四、討論51-55
• 第四章 急性腦缺血靶向分子探針的構(gòu)建及初步分子成像55-65
• 引言55
• 一、材料55-57
• 二、方法57-59
• 三、結(jié)果59-62
• 四、討論62-65
• 小結(jié)65-67
• 致謝67-69
• 參考文獻(xiàn)69-77
• 作者簡(jiǎn)介77

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本文編號(hào)：820954