本文關(guān)鍵詞：胚胎干細(xì)胞定向誘導(dǎo)的多巴胺能神經(jīng)元及其對(duì)食蟹猴的移植研究

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【摘要】：帕金森病是由中腦黑質(zhì)致密部多巴胺神經(jīng)元退化、降解造成的神經(jīng)退行性疾病。它導(dǎo)致肌肉僵硬、震顫、運(yùn)動(dòng)遲緩,損害患者的運(yùn)動(dòng)、語(yǔ)言和其他能力。在帕金森病患者的黑質(zhì)中,多巴胺能神經(jīng)元大量病變降解,使通過(guò)該回路作用于紋狀體的多巴胺明顯缺乏,其低于閾值時(shí)就會(huì)導(dǎo)致多種運(yùn)動(dòng)障礙癥狀的出現(xiàn)。因?yàn)槎喟桶纺苌窠?jīng)元屬于神經(jīng)終末細(xì)胞,幾乎沒(méi)有增殖能力,無(wú)法自我修復(fù)補(bǔ)充,因此,傳統(tǒng)的藥物和手術(shù)療法都對(duì)這類疾病束手無(wú)策。1990年,Lindvall等首次將8-9周齡流產(chǎn)胎兒的中腦組織移植到帕金森病患者的殼核中,得了一定的治療療效,開(kāi)辟了細(xì)胞移植療法的新天地。 在體外將胚胎干細(xì)胞定向誘導(dǎo)為多巴胺能神經(jīng)元,移植替代體內(nèi)退化神經(jīng)元的治療方案被認(rèn)為是最具希望的帕金森病治療方式之一。在本論文中,采用階段誘導(dǎo)法,先將人胚胎干細(xì)胞(hESC)快速轉(zhuǎn)化為均一完全的特定神經(jīng)干細(xì)胞球,然后在不同的時(shí)間點(diǎn)添加誘導(dǎo)因子,例如,FGF8、SHH和Purmorphane。通過(guò)模擬體內(nèi)神經(jīng)發(fā)育,激活相關(guān)信號(hào)通路,促使其進(jìn)入中腦多巴胺能神經(jīng)元細(xì)胞分化命運(yùn),使其自發(fā)成熟,高效誘導(dǎo)為中腦多巴胺能神經(jīng)元。誘導(dǎo)得到的多巴胺能神經(jīng)元前體細(xì)胞,在向食蟹猴體內(nèi)移植一個(gè)月后,可觀察到誘導(dǎo)的細(xì)胞在體內(nèi)分化成熟為多巴胺細(xì)胞。該誘導(dǎo)方法,不但提高了胚胎干細(xì)胞來(lái)源的多巴胺能神經(jīng)元前體細(xì)胞的分化純度,也通過(guò)懸浮培養(yǎng),實(shí)現(xiàn)了神經(jīng)前體細(xì)胞的大量擴(kuò)增,可以提供大量的種子細(xì)胞。因此,該分化體系的建立,為以細(xì)胞移植為基礎(chǔ)的帕金森病的治療提供了重要基礎(chǔ)。
【關(guān)鍵詞】：人胚胎干細(xì)胞 多巴胺分化 中腦多巴胺能神經(jīng)元 食蟹猴 細(xì)胞移植
【學(xué)位授予單位】：云南大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號(hào)】：R742.5
【目錄】：

• 摘要6-7
• Abstract7-9
• 第一章 前言9-22
• 一、帕金森氏病和目前的治療方法9-12
• 1. 帕金森氏病的臨床癥狀和病因9-10
• 2. 帕金森病的治療方法和進(jìn)展10-12
• 二、干細(xì)胞誘導(dǎo)為多巴胺能神經(jīng)元的研究12-22
• 1. 多巴胺能神經(jīng)元的功能和分類12-13
• 2. 中腦多巴胺能神經(jīng)元在體內(nèi)的發(fā)育和各階段轉(zhuǎn)錄因子表達(dá)13-22
• 第二章 材料與方法22-38
• 一、人胚胎干細(xì)胞的培養(yǎng)和鑒定以及細(xì)胞的懸浮培養(yǎng)22-29
• 1. 飼養(yǎng)層細(xì)胞的準(zhǔn)備22-23
• 2. 人胚胎干細(xì)胞的培養(yǎng)23
• 3. 人胚胎干細(xì)胞的懸浮培養(yǎng)23-24
• 4. 人胚胎干細(xì)胞的鑒定24-25
• 5. 試驗(yàn)材料和試劑配制25-29
• 二、神經(jīng)干細(xì)胞的誘導(dǎo)29-32
• 1. 貼壁方法誘導(dǎo)胚胎干細(xì)胞分化為神經(jīng)干細(xì)胞29
• 2. 懸浮方法誘導(dǎo)胚胎干細(xì)胞分化為神經(jīng)球29-30
• 3. 神經(jīng)干細(xì)胞的鑒定和不同培養(yǎng)體系的比較30
• 4. 試驗(yàn)材料和試劑配制30-32
• 三、多巴胺能神經(jīng)細(xì)胞的誘導(dǎo)32-35
• 1. 神經(jīng)干細(xì)胞啟動(dòng)時(shí)間點(diǎn)的選擇和鑒定32
• 2. 貼壁來(lái)源的神經(jīng)干細(xì)胞的分化32
• 3. 神經(jīng)球來(lái)源的神經(jīng)干細(xì)胞的分化32-34
• 4. 多巴胺能神經(jīng)前體細(xì)胞的鑒定34
• 5. 多巴胺能神經(jīng)細(xì)胞的自發(fā)成熟和鑒定34
• 6. 試劑配制34-35
• 四、誘導(dǎo)多巴胺能細(xì)胞的移植35-38
• 1. 移植細(xì)胞的準(zhǔn)備35-36
• 2. 動(dòng)物腦部定位和手術(shù)36
• 3. 組織取材和免疫組化的鑒定36-37
• 4. 試驗(yàn)材料和試劑配制37-38
• 第三章 結(jié)果與討論38-50
• 一、人胚胎干細(xì)胞的培養(yǎng)和鑒定以及細(xì)胞的懸浮培養(yǎng)38-40
• 1. hESCs貼壁生長(zhǎng)形態(tài)觀察38
• 2. 干細(xì)胞球多能性基因檢測(cè)38-40
• 二、神經(jīng)干細(xì)胞的誘導(dǎo)40-41
• 三、多巴胺能神經(jīng)細(xì)胞的誘導(dǎo)41-47
• 1. 神經(jīng)干細(xì)胞啟動(dòng)時(shí)間點(diǎn)的選擇41-43
• 2. 多巴胺能神經(jīng)前體細(xì)胞的分化效率43-44
• 3. 誘導(dǎo)的多巴胺能神經(jīng)細(xì)胞自發(fā)成熟44-47
• 四、誘導(dǎo)多巴胺能細(xì)胞的移植47-48
• 討論48-50
• 第四章 展望50-51
• 致謝51-52
• 參考文獻(xiàn)52-57

【共引文獻(xiàn)】

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