本文關(guān)鍵詞：微環(huán)境誘導(dǎo)iPSCs和BMSCs向神經(jīng)元樣細(xì)胞分化-Reelin對(duì)細(xì)胞分化和極性化的調(diào)節(jié)作用

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【摘要】：目的:研究小鼠誘導(dǎo)性多能干細(xì)胞(induced pluripotent stem cells,iPSCs)和小鼠骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞(Bone marrow mesenchymal stem cells,BMSCs)在大腦微環(huán)境的誘導(dǎo)下向神經(jīng)元樣細(xì)胞分化的過(guò)程;尤其是探討細(xì)胞極性的關(guān)鍵分子Reelin蛋白對(duì)干細(xì)胞分化的影響。方法:將iPSCs和BMSCs分別與WT和Reelin缺失小鼠(reeler小鼠)的海馬腦片以及兩種小鼠的腦勻漿上清共培養(yǎng),觀察二者在腦片微環(huán)境下的細(xì)胞分化和極性化改變,揭示Reelin蛋白對(duì)細(xì)胞分化和極性化的影響。結(jié)果:與WT和Reeler小鼠腦片共培養(yǎng)的iPSCs和BMSCs均出現(xiàn)神經(jīng)元樣細(xì)胞的分化。二者在WT小鼠海馬腦片呈雙C字型海馬片層化分布,同時(shí)表現(xiàn)出很強(qiáng)的方位性;而與reeler小鼠海馬腦片共培養(yǎng)的細(xì)胞分布則無(wú)明顯規(guī)律性,呈均勻分布。此外,與腦勻漿上清培養(yǎng)基共培養(yǎng)的iPSCs和BMSCs,在共培養(yǎng)72小時(shí)后,部分類神經(jīng)元樣細(xì)胞可以被神經(jīng)干細(xì)胞標(biāo)記物(Nestin)和神經(jīng)元特異標(biāo)記物(NeuN)所標(biāo)記,表明他們可以分化成為功能性神經(jīng)元。且在共培養(yǎng)初期reeler微環(huán)境培養(yǎng)基中神經(jīng)元分化和突起生長(zhǎng)相對(duì)滯后。結(jié)論:在大腦微環(huán)境的誘導(dǎo)下,iPSCs和BMSCs可以向神經(jīng)元樣細(xì)胞,甚至功能性神經(jīng)元分化,Reelin蛋白參與了細(xì)胞極性化過(guò)程,Reelin缺乏可造成神經(jīng)細(xì)胞極性紊亂,并對(duì)神經(jīng)元分化及突起生長(zhǎng)有一定影響。
【關(guān)鍵詞】：誘導(dǎo)多能干細(xì)胞 骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞 Reelin蛋白 大腦微環(huán)境 細(xì)胞分化 細(xì)胞極性化
【學(xué)位授予單位】：河南大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號(hào)】：R741
【目錄】：

• 摘要4-5
• ABSTRACT5-8
• 引言8-10
• 1 儀器材料與實(shí)驗(yàn)方法10-24
• 1.1 儀器與材料10-16
• 1.1.1 實(shí)驗(yàn)儀器10
• 1.1.2 試劑耗材10-12
• 1.1.3 試劑配方12-16
• 1.2 實(shí)驗(yàn)方法16-21
• 1.2.1 BMSCs提取與鑒定16-17
• 1.2.2 iPSCs的培養(yǎng)17-18
• 1.2.3 細(xì)胞腦片共培養(yǎng)18-20
• 1.2.4 細(xì)胞-腦勻漿上清共培養(yǎng)20-21
• 1.2.5 免疫細(xì)胞化學(xué)標(biāo)記神經(jīng)元21
• 1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理21-24
• 2 實(shí)驗(yàn)結(jié)果24-34
• 2.1 腦片微環(huán)境對(duì)iPSCs和BMSCs分化和極性化的作用24-28
• 2.1.1 對(duì)照組24-25
• 2.1.2 與WT小鼠腦片共培養(yǎng)25-27
• 2.1.3 與reeler小鼠腦片共培養(yǎng)27-28
• 2.2 腦勻漿上清對(duì)iPSCs和BMSCs向神經(jīng)元分化的影響28-34
• 2.2.1 對(duì)照組29
• 2.2.2 與WT小鼠腦勻漿上清共培養(yǎng)29-31
• 2.2.3 與reeler小鼠腦勻漿上清共培養(yǎng)31-34
• 3 討論34-38
• 3.1 腦片微環(huán)境對(duì)干細(xì)胞片層化形成和極性發(fā)生的誘導(dǎo)作用34-35
• 3.2 腦勻漿上清可誘導(dǎo)干細(xì)胞向神經(jīng)元分化35
• 3.3 Reelin對(duì)細(xì)胞極性產(chǎn)生及分化具有一定的調(diào)控作用35-38
• 4 結(jié)論38-40
• 參考文獻(xiàn)40-44
• 文獻(xiàn)綜述-Reelin調(diào)控神經(jīng)元遷移和突觸發(fā)育研究進(jìn)展44-58
• 參考文獻(xiàn)52-58
• 附錄58-60
• 附錄A 縮略語(yǔ)表58-59
• 附錄B 攻讀學(xué)位期間發(fā)表學(xué)術(shù)論文目錄59-60
• 致謝60-61

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