本文關(guān)鍵詞：三維灌注系統(tǒng)富集人腦膠質(zhì)瘤干細(xì)胞培養(yǎng)方法的探索

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【摘要】：背景與目的:自2003年加拿大學(xué)者singh首先從人腦膠質(zhì)瘤手術(shù)標(biāo)本中克隆、并鑒定了人腦膠質(zhì)瘤干細(xì)胞(GSC)以來,人們對GSC的認(rèn)識在爭論中往前推進(jìn),經(jīng)過10多年的努力,對GSC功能的認(rèn)識仍然不夠深入,特別是GSC在腫瘤細(xì)胞群中與其它分化細(xì)胞的關(guān)系不很明確,就GSC定義而言,它是少數(shù)具有自我更新能力并能夠產(chǎn)生異質(zhì)性腫瘤細(xì)胞的細(xì)胞,并且隨著GSC數(shù)量的增加而惡性程度增高,預(yù)后變差。但就體外培養(yǎng)的GSC而言,數(shù)量的多少除了與培養(yǎng)基成份有關(guān),還與其生長的空間結(jié)構(gòu)不無關(guān)系。本文旨在探索三維培養(yǎng)的GSC與傳統(tǒng)二維培養(yǎng)的GSC相比,能否達(dá)到富集GSC生長的目的。材料與方法:人腦膠質(zhì)瘤干細(xì)胞GSC23由美國德克薩斯州大學(xué)M.D.Anderson腫瘤中心贈送。3D聚已內(nèi)酯支架(3D Cell Scaffold PCL)購于天津衛(wèi)凱生物工程有限公司。三維灌流培養(yǎng)系統(tǒng)Tissueflex?由英國Zyoxel公司提供。干細(xì)胞培養(yǎng)基購自美國Gibco公司。干細(xì)胞標(biāo)志蛋白CD133購于英國Abcam公司。將GSC23(1×10~5)分別接種于普通平板、PCL支架和帶有PCL支架的三維灌流培養(yǎng)體系中。在三種不同培養(yǎng)條件下,分別進(jìn)行熒光倒置顯微鏡下觀察細(xì)胞生長狀況以及細(xì)胞形態(tài)空間結(jié)構(gòu)變化,用Alamar Blue方法測定細(xì)胞生長曲線,用免疫細(xì)胞化學(xué)熒光染色方法檢測CD133~+細(xì)胞的比例。用SPSS 18.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。結(jié)果與分析:相比于普通平板培養(yǎng)條件,在PCL支架和灌流條件下細(xì)胞形態(tài)能維持在懸浮培養(yǎng)條件時的成球狀態(tài),且它們的增殖速度更快。普通平板組CD133~+細(xì)胞比例低(17.56±2.39%),PCL支架組CD133~+細(xì)胞比例高(33.50±6.62%),灌流組CD133~+細(xì)胞比例更高(51.77±6.07%)。經(jīng)SPSS 18.0軟件統(tǒng)計(jì)結(jié)果2D組和PCL支架組差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義;PCL支架組和三維灌流培養(yǎng)組差異也有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。表明PCL支架創(chuàng)造的網(wǎng)格樣空間結(jié)構(gòu),讓定居在上面的GSC23細(xì)胞獲得了一個有利于擴(kuò)增、類似于實(shí)體瘤的三維空間,如果在這個空間環(huán)境里再有類似于血液,即流動著的干細(xì)胞培養(yǎng)液,滋養(yǎng)著GSC23細(xì)胞生長,則就能達(dá)到最大程度富集膠質(zhì)瘤干細(xì)胞的目的,三維灌流培養(yǎng)系統(tǒng)能做到這一點(diǎn)。結(jié)論:用傳統(tǒng)方法在普通培養(yǎng)皿中培養(yǎng),分化細(xì)胞都貼壁生長(二維),唯有為數(shù)極少的漂浮在培養(yǎng)液中(三維)、折光性很強(qiáng)的小圓細(xì)胞,實(shí)際上其中不乏干細(xì)胞,說明只有三維空間才有利于干細(xì)胞生長;當(dāng)提供的是三維的PCL支架而不是二維的普通培養(yǎng)皿時,能夠富集GSC23細(xì)胞生長的根本原就在于提供的是三維空間。一旦既在三維空間里,又能獲得及時更新的培養(yǎng)液,更加符合GSC23擴(kuò)增所需的“吐故納新”條件時,GSC23細(xì)胞便會大量富集。
【關(guān)鍵詞】：膠質(zhì)瘤干細(xì)胞 三維培養(yǎng) PCL支架 灌流培養(yǎng)裝置
【學(xué)位授予單位】：蘇州大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號】：R739.41
【目錄】：

• 中文摘要4-6
• Abstract6-9
• 序言9-12
• 參考文獻(xiàn)10-12
• 材料和方法12-17
• 結(jié)果17-21
• 討論21-24
• 參考文獻(xiàn)24-28
• 綜述28-37
• 參考文獻(xiàn)33-37
• 中英文縮寫詞表37-38
• 攻讀碩士學(xué)位期間公開發(fā)表的論文38-39
• 致謝39-40

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本文編號：676781