本文關(guān)鍵詞：1、IC53基因促動(dòng)脈粥樣硬化炎癥作用及機(jī)制研究 2、腎小球?yàn)V過率下降與出血性腦卒中復(fù)發(fā)和預(yù)后不良相關(guān)—前瞻性研究

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【摘要】：目的：動(dòng)脈粥樣硬化是心血管疾病的主要病理生理基礎(chǔ),是一種由脂質(zhì)代謝異常、慢性炎癥、免疫紊亂、氧化應(yīng)激、內(nèi)皮損傷、血管新生及遺傳等多種因素作用下發(fā)生的一種慢性代償性炎癥反應(yīng)。遺傳因素和環(huán)境因素共同導(dǎo)致動(dòng)脈粥樣硬化的發(fā)生與進(jìn)展,鑒定動(dòng)脈粥樣硬化相關(guān)基因十分重要。動(dòng)脈粥樣硬化的始動(dòng)環(huán)節(jié)是單核細(xì)胞粘附、遷移到內(nèi)皮層下引發(fā)炎癥反,靶向干預(yù)炎癥反應(yīng)將會(huì)延緩動(dòng)脈粥樣硬化斑塊的形成與破裂。我們前期發(fā)現(xiàn)IC53基因在斑塊中表達(dá)且促進(jìn)血管新生。因而推測IC53基因能促進(jìn)單核細(xì)胞的炎癥反應(yīng),以及單核細(xì)胞與內(nèi)皮細(xì)胞的粘附、趨化,促進(jìn)粥樣硬化。本研究旨在通過體外實(shí)驗(yàn)研究IC53基因促進(jìn)炎癥反應(yīng)及功能改變,最后分析IC53促進(jìn)炎癥的具體通路和機(jī)制。方法：為驗(yàn)證我們的假設(shè),我們首先利用動(dòng)脈粥樣硬化炎癥刺激物ox-LDL刺激內(nèi)皮細(xì)胞后,Western方法檢測IC53表達(dá)量的改變。然后,用siRNA干擾IC53基因后,通過細(xì)胞粘附實(shí)驗(yàn)及transwell實(shí)驗(yàn)分析檢測IC53在單核細(xì)胞與胞外基質(zhì)的粘附作用及侵襲能力的改變。分別siRNA干擾IC53和腺病毒過表達(dá)IC53基因后用qRT-PCR方法檢測相關(guān)炎癥因子MCP-1、趨化因子ICAM、VCAM的表達(dá)變化,并選用Affymetrix HTA2.0芯片進(jìn)行基因表達(dá)差異及可變剪接分析。為進(jìn)一步明確IC53基因?qū)ρ装Y因子MCP-1影響的具體機(jī)制,我們通過免疫共沉淀和質(zhì)譜實(shí)驗(yàn)篩選可能與其相互作用的蛋白。結(jié)果：HUVEC細(xì)胞在不同濃度的ox-LDL刺激48h后,IC53表達(dá)量上升。當(dāng)ox-LDL濃度為100ug/ml,刺激HUVEC細(xì)胞48h后,與對(duì)照組相比,IC53的表達(dá)量升高到2.4倍。粘附實(shí)驗(yàn)表明單核細(xì)胞干擾IC53基因后與HUVEC細(xì)胞的粘附率下降到0.31倍(P=0.007),劃痕實(shí)驗(yàn)表明HUVEC細(xì)胞干擾IC53基因后橫向遷移率下降到0.84倍(P=0.04)。THP-1細(xì)胞干擾IC53基因表達(dá)后,MCP-1(降至0.4倍,P0.001)、ICAM(降至0.75倍,P0.001)以及VCAM(降至0.75倍,P0.001)的mRNA水平均下降。而腺病毒Ad5Max-IC53過表達(dá)基因IC53后,MCP-1的mRNA水平升高到2.8倍(P0.05)。芯片分析結(jié)果表明,差異表達(dá)的基因中與動(dòng)脈粥樣硬化炎癥相關(guān)的基因有MCP-1、TLR8、EFTUD2。芯片分析與候選基因分析均發(fā)現(xiàn)IC53可調(diào)控MCP-1。免疫共沉淀實(shí)驗(yàn)(Co-IP)和質(zhì)譜實(shí)驗(yàn)篩選與IC53相結(jié)合并調(diào)控MCP-1的蛋白,包括熱休克蛋白B1、鈣磷脂結(jié)合蛋白A2、肌球蛋白1E、異硫氰酸鹽。結(jié)論：綜上所述,我們研究發(fā)現(xiàn)IC53基因能通過調(diào)控MCP-1促進(jìn)動(dòng)脈粥樣硬化的炎癥反應(yīng)。我們的研究結(jié)果為進(jìn)一步理解動(dòng)脈粥樣硬化的機(jī)制,尋找防治靶點(diǎn)提供了線索。目的：研究表明慢性腎臟疾病可以獨(dú)立預(yù)測腦卒中的不良預(yù)后和復(fù)發(fā),然而它與腦卒中各個(gè)亞型結(jié)局的關(guān)系仍然不明確,本研究的目的是分析估計(jì)的腎小球?yàn)V過率下降與不同類型腦卒中的復(fù)發(fā)和預(yù)后的相關(guān)性。方法：我們于2000年至2001年共納入2000例腦卒中患者并平均隨訪4.5年。根據(jù)MDRD公式計(jì)算eGFR,再根據(jù)eGFR將腦卒中患者(n=1506)分為腎小球?yàn)V過率正常組(n=493,eGFR90ml/min/1.73m2),腎小球?yàn)V過率輕度下降組(n=867,60eGFR≤90 ml/min/1.73m2),腎小球?yàn)V過率中重度下降組(n=146, eGFR≤ 60ml/min/1.73m2),比較三組間卒中復(fù)發(fā)與預(yù)后的差異性。以Kaplan-Meier分析法和Cox回歸模型分析eGFR和卒中復(fù)發(fā)及預(yù)后的關(guān)系。結(jié)果：在全部腦卒中患者人群中,與腎小球?yàn)V過率正常組相比,濾過率中重度下降組卒中復(fù)合終點(diǎn)事件(復(fù)發(fā)、心梗、全因死亡率)發(fā)生率更高(P0.001),卒中復(fù)發(fā)與死亡(死因?yàn)樾难懿』蜃渲?也得到類似的結(jié)論(P=0.009,P=0.001)。在控制了年齡、性別及其它心血管危險(xiǎn)因素后,濾過率中重度下降是復(fù)合終點(diǎn)事件(校正相對(duì)危險(xiǎn)度RR=1.93,95%CI=1.39-2.69,P0.001).卒中復(fù)發(fā)(校正相對(duì)危險(xiǎn)度RR=1.62.95%CI=1.07-2.47,P=0.024).心血管病或卒中死亡(校正相對(duì)危險(xiǎn)度RR=1.96,95%CI=1.10-3.49,P=0.022)的獨(dú)立預(yù)測因子。在腦出血人群中,與腎小球?yàn)V過率正常組相比,濾過率中重度下降組卒中復(fù)合終點(diǎn)事件(復(fù)發(fā)、心梗、全因死亡率)發(fā)生率更高(P=0.012),卒中復(fù)發(fā)與死亡(死因?yàn)樾难懿』蜃渲?也得到類似的結(jié)論(P=0.013,P=0.001)。在控制了年齡、性別及其它心血管危險(xiǎn)因素后,濾過率中重度下降是復(fù)合終點(diǎn)事件(校正相對(duì)危險(xiǎn)度RR=2.93.95% CI=1.58-5.43,P=0.001).卒中復(fù)發(fā)(校正相對(duì)危險(xiǎn)度RR=3.06,95%CI=1.46-6.40, P=0.003).心血管病或卒中死亡(校正相對(duì)危險(xiǎn)度RR=3.57,95%CI=1.46-8.70, P=0.005)的獨(dú)立預(yù)測因子。結(jié)論：低eGFR曾加腦卒中及出血性腦卒中復(fù)發(fā)和不良預(yù)后的風(fēng)險(xiǎn)。
【關(guān)鍵詞】：IC53 動(dòng)脈粥樣硬化 炎癥反應(yīng) MCP-1 粘附 腎小球?yàn)V過率 卒中 腦出血 死亡率 危險(xiǎn)因素 預(yù)后
【學(xué)位授予單位】：北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號(hào)】：R743.3;R543.5
【目錄】：

• 第一部分 IC53基因促動(dòng)脈粥樣硬化炎癥作用及機(jī)制研究5-35
• 中文摘要5-7
• Abstract7-9
• 前言9-11
• 研究對(duì)象和方法11-19
• 一、研究對(duì)象11
• 二、實(shí)驗(yàn)材料11-13
• 1. 實(shí)驗(yàn)試劑11-12
• 2. 實(shí)驗(yàn)儀器12-13
• 三、實(shí)驗(yàn)方法13-19
• 1. 細(xì)胞培養(yǎng)和用相應(yīng)刺激物處理13
• 2. THP-1細(xì)胞經(jīng)過處理后的后續(xù)各項(xiàng)指標(biāo)檢測方法13-18
• 3. 免疫共沉淀實(shí)驗(yàn)18
• 4. 數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)18-19
• 研究結(jié)果19-30
• 一、IC53參與動(dòng)脈粥樣硬化炎癥反應(yīng)19-25
• 1. 氧化低密度脂蛋白(ox-LDL)刺激HUVEC,IC53蛋白表達(dá)水平升高19-21
• 2. 敲低IC53基因后THP-1細(xì)胞粘附能力及HUVEC細(xì)胞遷移能力被抑制21-25
• 二、IC53調(diào)節(jié)炎癥反應(yīng)的具體機(jī)制25-30
• 1. 敲低IC53基因后MCP-1、ICAM、VCAM表達(dá)下降25-27
• 2. IC53基因過表達(dá)后MCP-1表達(dá)升高27-28
• 3. 芯片篩選差異表達(dá)基因28-29
• 4. 質(zhì)譜實(shí)驗(yàn)分析IC53調(diào)控炎癥因子的具體機(jī)制29-30
• 討論30-32
• 參考文獻(xiàn)32-35
• 第二部分 腎小球?yàn)V過率下降與腦卒中復(fù)發(fā)和預(yù)后不良相關(guān)-前瞻性研究35-62
• 中文摘要35-36
• Abstract36-37
• 前言37-39
• 研究對(duì)象和方法39-41
• 一、研究對(duì)象的臨床入選標(biāo)準(zhǔn)及排除標(biāo)準(zhǔn)39
• 二、生化指標(biāo)檢測及臨床數(shù)據(jù)收集39-40
• 三、隨訪工作及腦卒中結(jié)局的判定40
• 四、統(tǒng)計(jì)分析40-41
• 結(jié)果41-55
• 一、臨床基本資料41
• 二、低腎小球?yàn)V過率與出血性腦卒中復(fù)發(fā)與預(yù)后的關(guān)系41-47
• 1. 腎小球?yàn)V過率中重度下降增加出血性卒中患者復(fù)合終點(diǎn)事件發(fā)生的風(fēng)險(xiǎn)41-43
• 2. 腎小球?yàn)V過率中重度下降增加出血性卒中患者卒中復(fù)發(fā)的風(fēng)險(xiǎn)43-45
• 3. 腎小球?yàn)V過率中重度下降增加出血性卒中患者心血管病或卒中死亡的風(fēng)險(xiǎn)45-47
• 三、低腎小球?yàn)V過率與全部腦卒中復(fù)發(fā)與預(yù)后的關(guān)系47-50
• 1. 腎小球?yàn)V過率中重度下降增加卒中患者復(fù)合終點(diǎn)事件發(fā)生的風(fēng)險(xiǎn)47
• 2. 腎小球?yàn)V過率中重度下降增加卒中患者卒中復(fù)發(fā)的風(fēng)險(xiǎn)47
• 3. 腎小球?yàn)V過率中重度下降增加卒中患者心血管病或卒中死亡的風(fēng)險(xiǎn)47-50
• 四、低腎小球?yàn)V過率與腦血栓復(fù)發(fā)與預(yù)后的關(guān)系50-53
• 1. 腎小球?yàn)V過率中重度下降增加腦血栓患者復(fù)合終點(diǎn)事件發(fā)生的風(fēng)險(xiǎn)50
• 2. 腎小球?yàn)V過率中重度下降與腦血栓患者卒中復(fù)發(fā)風(fēng)險(xiǎn)無關(guān)50
• 3. 腎小球?yàn)V過率中重度下降增加腦血栓患者心血管病或卒中死亡的風(fēng)險(xiǎn)50-53
• 五、低腎小球?yàn)V過率與腔隙性腦梗復(fù)發(fā)與預(yù)后的關(guān)系53-55
• 討論55-57
• 參考文獻(xiàn)57-62
• 綜述 趨化因子與動(dòng)脈粥樣硬化的研究進(jìn)展62-71
• 摘要62
• 一、趨化因子作用的細(xì)胞特異性62-63
• 二、趨化因子作用的階段特異性63-64
• 三、MCP-1、CCL3、CCR7、MIF的致粥樣硬化作用64
• 四、趨化因子抗凋亡、促增殖作用64-65
• 五、病毒編碼趨化因子及抗趨化因子藥物65
• 結(jié)論65-66
• 參考文獻(xiàn)66-71
• 附錄71-80
• 縮略詞表80-82
• 致謝82-83
• 個(gè)人簡歷83-84

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中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前2條

1 宋莉,秦寶明,葉玨,韓玉,張震,王偉,石毅,汪一波,尚尉,孫凱,張紅葉,惠汝太;IC53基因多態(tài)性與腦卒中的關(guān)系[J];中國分子心臟病學(xué)雜志;2002年04期

2 陳敬洲,韓玉,張銀輝,石毅,汪一波,張禪那,鄭翼,惠汝太;IC53基因超表達(dá)改變系列心衰相關(guān)基因表達(dá)水平[J];中國分子心臟病學(xué)雜志;2005年01期

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本文編號(hào)：669665