本文關(guān)鍵詞：一種改良大鼠海馬神經(jīng)元原代培養(yǎng)的方法

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【摘要】：目的為缺血性腦損傷模型的制備及研究建立一種更好的體外培養(yǎng)海馬神經(jīng)元的方法。方法實(shí)驗(yàn)組取出生24h內(nèi)的Wistar新生鼠海馬,用木瓜酶和DNA酶消化,以1×108/L的密度接種于含體積分?jǐn)?shù)0.20胎牛血清的DMEM-F12培養(yǎng)液中,24h后更換無(wú)血清培養(yǎng)液,每隔3d半量換液。對(duì)照組采用傳統(tǒng)的培養(yǎng)方法培養(yǎng)細(xì)胞。培養(yǎng)期間用倒置顯微鏡觀察細(xì)胞形態(tài)及數(shù)量變化。采用免疫熒光法測(cè)定神經(jīng)元特異性烯醇化酶表達(dá),判斷海馬神經(jīng)元培養(yǎng)是否成功。結(jié)果實(shí)驗(yàn)組的海馬神經(jīng)元培養(yǎng)12h,可見(jiàn)大部分細(xì)胞貼壁;培養(yǎng)24h,大部分細(xì)胞可見(jiàn)3~4個(gè)突起,突起長(zhǎng)度為(25.0±2.5)μm;培養(yǎng)3d,神經(jīng)元胞體增大,可見(jiàn)明顯光暈;之后神經(jīng)元分化逐漸成熟,胞體透亮,呈錐形或多極形,光暈明顯,神經(jīng)元之間的突起聯(lián)系更加緊密,形成密集的神經(jīng)細(xì)胞網(wǎng)絡(luò);培養(yǎng)13d后,神經(jīng)元細(xì)胞開(kāi)始退化、變性,胞體萎縮,神經(jīng)細(xì)胞網(wǎng)絡(luò)開(kāi)始老化。隨著培養(yǎng)天數(shù)的增加,神經(jīng)元可出現(xiàn)少量凋亡,但實(shí)驗(yàn)組培養(yǎng)1、3、5、8d時(shí)的神經(jīng)元數(shù)量明顯高于對(duì)照組(t=11.5~49.5,P0.05)。免疫熒光法鑒定顯示,實(shí)驗(yàn)組神經(jīng)元細(xì)胞陽(yáng)性率為(93.53±1.67)%。結(jié)論用上述改良方法培養(yǎng)得到的海馬神經(jīng)元細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)良好,可用于后續(xù)實(shí)驗(yàn)研究。
【作者單位】： 青島大學(xué)附屬醫(yī)院麻醉科;青島大學(xué)附屬醫(yī)院藥劑科;青島大學(xué)附屬醫(yī)院耳鼻咽喉科;
【關(guān)鍵詞】： 海馬 神經(jīng)元 原代細(xì)胞培養(yǎng) 方法 熒光免疫測(cè)定
【基金】：國(guó)家自然科學(xué)基金項(xiàng)目(81371448)
【分類(lèi)號(hào)】：R741
【正文快照】： 原代海馬神經(jīng)元的培養(yǎng)是體外研究神經(jīng)系統(tǒng)疾病及制備相關(guān)模型的重要方法[1]。在中樞神經(jīng)系統(tǒng)中,海馬是一個(gè)重要腦區(qū),它不僅有著復(fù)雜的生理功能,還與多種中樞神經(jīng)系統(tǒng)疾病有關(guān)[2]。同時(shí),海馬是腦組織中對(duì)低氧最為敏感的區(qū)域,因此,原代培養(yǎng)海馬神經(jīng)元細(xì)胞適用于缺血性腦損傷模型

【相似文獻(xiàn)】

中國(guó)期刊全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前10條

1 王旭明,陳堅(jiān),朱吉林,黃瀛,嚴(yán)進(jìn),陳宜張;血漿糖皮質(zhì)激素升高條件下海馬神經(jīng)元的形態(tài)變化[J];解剖學(xué)雜志;1991年04期

2 黃鳳玲;鎂離子對(duì)谷氨酸誘發(fā)的海馬神經(jīng)元損傷的保護(hù)作用[J];中國(guó)應(yīng)用生理學(xué)雜志;2002年04期

3 張建寧,孫紅宇,楊樹(shù)源,張卉,張文治;糖皮質(zhì)激素對(duì)大鼠海馬神經(jīng)元影響的體外研究[J];中國(guó)神經(jīng)精神疾病雜志;2003年03期

4 趙康仁,李學(xué)忠,田野,周旭平;半腦照射后早期海馬神經(jīng)元密度的研究[J];中國(guó)臨床神經(jīng)科學(xué);2003年03期

5 秦海宏,沈慧,王福O，

本文編號(hào)：659609