本文關(guān)鍵詞：SAH對(duì)大鼠海馬區(qū)神經(jīng)細(xì)胞自噬的影響及BQ-123的干預(yù)作用

  更多相關(guān)文章： 蛛網(wǎng)膜下腔出血 自噬 神經(jīng)細(xì)胞 LY294002 BQ-123

【摘要】：目的1探討大鼠蛛網(wǎng)膜下腔出血對(duì)海馬區(qū)神經(jīng)細(xì)胞自噬激活的影響。2探討B(tài)Q-123干預(yù)對(duì)蛛網(wǎng)膜下腔出血后海馬區(qū)自噬激活的影響及可能的機(jī)制。方法1將192只清潔健康雄性SD大鼠,隨機(jī)等分為4組:假手術(shù)組(Sham組)、蛛網(wǎng)膜下腔出血模型組(SAH組)、蛛網(wǎng)膜下腔出血結(jié)合應(yīng)用PI3K抑制劑組(LY294002組)、蛛網(wǎng)膜下腔出血結(jié)合應(yīng)用內(nèi)皮素受體拮抗劑組(BQ-123組),每組又分為6h、24h、72h、144h四個(gè)時(shí)間點(diǎn)(每個(gè)時(shí)間點(diǎn)各12只)。2 SAH模型的制備選取經(jīng)典的二次枕大池注血法;Sham組行雙側(cè)股動(dòng)脈剝離,同時(shí)枕大池注射3ml生理鹽水。3 LY294002組和BQ-123組于造模前30min,行側(cè)腦室注射LY294002或BQ-123。4應(yīng)用大鼠抓力測(cè)定實(shí)驗(yàn)評(píng)價(jià)各時(shí)間點(diǎn)大鼠前肢拉力情況;應(yīng)用穿梭箱實(shí)驗(yàn)測(cè)定大鼠主動(dòng)回避反應(yīng)率及被動(dòng)逃避時(shí)間,評(píng)價(jià)大鼠建立條件反射過程中的學(xué)習(xí)、記憶能力;從而評(píng)價(jià)大鼠行為學(xué)改變情況。5光鏡觀察HE染色后海馬區(qū)各時(shí)間點(diǎn)神經(jīng)細(xì)胞形態(tài)及數(shù)量變化;應(yīng)用免疫組織化學(xué)染色法測(cè)定海馬區(qū)PI3K、m TOR、Beclin-1、LC3-II的表達(dá)情況;RT-PCR法檢測(cè)Beclin-1 m RNA、LC3-II m RNA的變化情況。結(jié)果1抓力測(cè)定實(shí)驗(yàn):與Sham組比較,SAH組在各時(shí)間點(diǎn)拉力測(cè)定分值顯著降低,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05);與SAH組比較,LY294002組各時(shí)間點(diǎn)拉力值進(jìn)一步降低;與SAH組比較,BQ-123組各時(shí)間點(diǎn)拉力值有所升高,兩組差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。從蛛網(wǎng)膜下腔出血疾病的發(fā)展趨勢(shì)來看,抓力測(cè)定數(shù)值在SAH組、LY294002組及BQ-123組均呈現(xiàn)時(shí)間依賴性,表現(xiàn)出隨時(shí)間延長(zhǎng)逐漸增高的趨勢(shì),神經(jīng)功能損傷癥狀逐漸恢復(fù)。2穿梭箱實(shí)驗(yàn):與Sham組比較,SAH組在各時(shí)間點(diǎn)主動(dòng)回避反應(yīng)率(Active avoidance reaction rate,AARR)均值顯著降低,被動(dòng)逃避時(shí)間(Passive avoidance latency,PAL)均值顯著延長(zhǎng),呈現(xiàn)明顯的行為學(xué)改變,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05);與SAH組比較,BQ-123組大鼠反應(yīng)較靈敏,能夠有效躲避電擊多次,AARR顯著升高,PAL時(shí)間顯著縮短(P0.05);而LY294002組大鼠較SAH組自發(fā)運(yùn)動(dòng)量進(jìn)一步下降,對(duì)電擊刺激反應(yīng)遲鈍,AARR進(jìn)一步降低,PAL時(shí)間進(jìn)一步延長(zhǎng)(P0.05)。3 HE染色結(jié)果:與Sham組相比,SAH組各時(shí)間點(diǎn)大鼠海馬區(qū)神經(jīng)細(xì)胞數(shù)量減少,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05),主要可見到神經(jīng)細(xì)胞胞核邊界不完整,核固縮、碎裂,或出現(xiàn)神經(jīng)核完全消失,形成空泡狀結(jié)構(gòu);LY294002組各時(shí)間點(diǎn)神經(jīng)細(xì)胞數(shù)量較SAH組明顯減少,可見較多變性壞死的神經(jīng)細(xì)胞,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05);BQ-123組較SAH組各時(shí)間點(diǎn)神經(jīng)細(xì)胞數(shù)量增多,神經(jīng)細(xì)胞形態(tài)較SAH組或LY294002組相對(duì)正常,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。4 Beclin-1、LC3-Ⅱ免疫組化與RTPCR結(jié)果:免疫組化:Beclin-1、LC3-Ⅱ在Sham組中有胞漿弱表達(dá),而在SAH組各時(shí)間點(diǎn)的細(xì)胞核中有強(qiáng)陽(yáng)性表達(dá),染色呈棕黃色。與Sham組比較,SAH組在6h、24h、72h、144h時(shí)間點(diǎn)Beclin-1、LC3-Ⅱ的表達(dá)水平明顯增加,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。與SAH組比較,BQ-123組Beclin-1、LC3-Ⅱ在6h、24h、72h、144h時(shí)間點(diǎn)呈較高水平表達(dá),差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05);而LY294002組Beclin-1、LC3-Ⅱ的表達(dá)水平顯著降低,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。RTPCR:與Sham組比較,SAH組在6h出現(xiàn)Beclin-1 m RNA、LC3-Ⅱm RNA的表達(dá)增加,在24h表達(dá)最高,72h開始降低,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。與SAH組比較,BQ-123組Beclin-1 m RNA、LC3-Ⅱm RNA在6h、24h、72h、144h時(shí)間點(diǎn)呈較高水平表達(dá),差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05);而LY294002組各時(shí)間點(diǎn)Beclin-1 m RNA、LC3-Ⅱm RNA的表達(dá)水平顯著降低(P0.05)。5 PI3K免疫組化結(jié)果:PI3K在Sham組中有胞漿弱表達(dá),而在SAH各組各時(shí)間點(diǎn)的細(xì)胞核中有強(qiáng)陽(yáng)性表達(dá),染色呈棕黃色。與Sham組比較,SAH組在6h出現(xiàn)PI3K的表達(dá)增加,在24h表達(dá)最高,72h開始降低(P0.05)。與SAH組比較,LY294002組在6h、24h、72h、144h時(shí)間點(diǎn)PI3K表達(dá)均降低(P0.05);而BQ-123組各時(shí)間點(diǎn)PI3K表達(dá)水平均增高(P0.05)。6 m TOR免疫組化結(jié)果:m TOR在Sham組可見胞漿有強(qiáng)陽(yáng)性表達(dá),陽(yáng)性細(xì)胞可見被染成棕黃色。而在SAH各組各時(shí)間點(diǎn)的可見一定量陽(yáng)性細(xì)胞。與Sham組比較,SAH組各時(shí)間點(diǎn)m TOR陽(yáng)性細(xì)胞減少(P0.05);與SAH組比較,LY294002組在各時(shí)間點(diǎn)m TOR表達(dá)增多(P0.05);與SAH組比較,BQ-123組中各時(shí)間點(diǎn)m TOR陽(yáng)性細(xì)胞減少,差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。結(jié)論1大鼠蛛網(wǎng)膜下腔出血后海馬區(qū)自噬激活可以加速神經(jīng)功能恢復(fù),減輕海馬區(qū)神經(jīng)細(xì)胞損傷,可能與PI3K/Akt/m TOR信號(hào)通路有關(guān)。2 BQ-123可調(diào)節(jié)PI3K/Akt/m TOR信號(hào)激活,增強(qiáng)自噬激活的程度,對(duì)蛛網(wǎng)膜下腔出血后海馬區(qū)神經(jīng)細(xì)胞有保護(hù)作用。
【關(guān)鍵詞】：蛛網(wǎng)膜下腔出血 自噬 神經(jīng)細(xì)胞 LY294002 BQ-123
【學(xué)位授予單位】：華北理工大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號(hào)】：R743.35
【目錄】：

• 摘要4-6
• abstract6-11
• 引言11-13
• 第1章 實(shí)驗(yàn)研究13-40
• 1.1 材料與方法13-20
• 1.1.1 主要儀器與器材13
• 1.1.2 主要藥品和試劑13-14
• 1.1.3 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物及分組14
• 1.1.4 動(dòng)物模型制備及給藥14-16
• 1.1.5 實(shí)驗(yàn)檢測(cè)指標(biāo)方法16-20
• 1.1.6 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析20
• 1.2 結(jié)果20-27
• 1.2.1 各組大鼠抓力實(shí)驗(yàn)結(jié)果20-21
• 1.2.2 各組大鼠學(xué)習(xí)能力改變的實(shí)驗(yàn)結(jié)果21-22
• 1.2.3 各組大鼠海馬區(qū)HE染色結(jié)果22-23
• 1.2.4 各組大鼠海馬區(qū)免疫組化結(jié)果23-25
• 1.2.5 實(shí)時(shí)熒光定量PCR各組Beclin-1、LC3-Ⅱ基因表達(dá)情況25-27
• 1.3 討論27-35
• 1.3.1 自噬在蛛網(wǎng)膜下腔出血中的作用28-33
• 1.3.2 BQ-123對(duì)蛛網(wǎng)膜下腔出血后自噬激活的影響33-35
• 1.4 小結(jié)35-36
• 參考文獻(xiàn)36-40
• 第2章 綜述 自噬在蛛網(wǎng)膜下腔出血中作用的研究進(jìn)展40-47
• 2.1 自噬的激活40-42
• 2.1.1 自噬的發(fā)生40-41
• 2.1.2 自噬與凋亡41-42
• 2.2 自噬在蛛網(wǎng)膜下腔出血中的作用42-44
• 2.2.1 自噬在神經(jīng)系統(tǒng)疾病中的作用42-43
• 2.2.2 自噬在蛛網(wǎng)膜下腔出血中的作用43-44
• 2.3 展望44
• 參考文獻(xiàn)44-47
• 結(jié)論47-48
• 附錄48-53
• 致謝53-54
• 導(dǎo)師簡(jiǎn)介54-55
• 作者簡(jiǎn)介55-56
• 學(xué)位論文數(shù)據(jù)集56

【參考文獻(xiàn)】

中國(guó)期刊全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前7條

1 張?jiān)茤|,鄒詠文,許民輝;內(nèi)皮素及其A受體在兔顱腦創(chuàng)傷后腦血流量變化中的作用及意義[J];第三軍醫(yī)大學(xué)學(xué)報(bào);1999年05期

2 曾蓉;陳燕;崔國(guó)惠;;抑制自噬促進(jìn)冬凌草甲素誘導(dǎo)的多發(fā)性骨髓瘤細(xì)胞凋亡涉及胞內(nèi)ROS產(chǎn)生[J];中國(guó)組織化學(xué)與細(xì)胞化學(xué)雜志;2011年04期

3 張靜;馬翠麗;王志國(guó);;黃芪甲苷對(duì)大鼠心肌局部缺血再灌注損傷的改善作用及其對(duì)PI3K/Akt/mTOR信號(hào)通路的影響[J];吉林大學(xué)學(xué)報(bào)(醫(yī)學(xué)版);2014年05期

4 孫亮;劉萬(wàn)林;;自噬分子機(jī)制與疾病研究進(jìn)展[J];內(nèi)蒙古醫(yī)學(xué)雜志;2014年07期

5 吳葩;許彩民;;Ⅲ型磷脂酰肌醇3-激酶復(fù)合物與自噬的研究進(jìn)展[J];生物化學(xué)與生物物理進(jìn)展;2012年03期

6 鄒麗萍;蔣濤;車祺;李慧;瞿俊杰;陳琦;張農(nóng);;醛糖還原酶抑制劑影響PDGF-BB促系膜細(xì)胞增殖作用的機(jī)制研究[J];復(fù)旦學(xué)報(bào)(醫(yī)學(xué)版);2007年04期

7 陳盛;顧碩;徐敏;顧松;;雷帕霉素抑制人神經(jīng)母細(xì)胞瘤細(xì)胞株生長(zhǎng)及誘導(dǎo)凋亡的機(jī)制研究[J];上海交通大學(xué)學(xué)報(bào)(醫(yī)學(xué)版);2014年04期

，

本文編號(hào)：656769