本文關(guān)鍵詞：熱休克蛋白70對缺血誘導(dǎo)嗜鉻細胞瘤細胞膜鈣通道影響的研究

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【摘要】：目的探討慢病毒介導(dǎo)的熱休克蛋白70(HSP70)對缺血/缺氧嗜鉻細胞瘤細胞(PC12)膜鈣離子通道的影響及機制。方法構(gòu)建表達外源性HSP70的重組慢病毒,感染對數(shù)生長期的PC12細胞,用嘌呤霉素篩選穩(wěn)定表達HSP70的PC12細胞作為實驗組,即重組慢病毒感染組[感染含HSP70及綠色熒光蛋白(GFP)基因的慢病毒]。同時設(shè)置慢病毒對照組[感染含GFP基因但不含HSP70基因的慢病毒]和未感染組(正常對照組)。以缺血/缺氧8h、復(fù)氧12h刺激PC12細胞模擬體內(nèi)神經(jīng)細胞遭受缺血/再灌注時的病理過程,采用實時熒光定量反轉(zhuǎn)錄-聚合酶鏈反應(yīng)(RT-PCR)及蛋白質(zhì)免疫印跡試驗(Western Blot)檢測L型鈣離子通道cav1.2、cav1.3亞基,受體門控通道基因NR1、NR2,以及Na+/Ca~(2+)交換體(NCX)的m RNA和蛋白表達。結(jié)果(1)經(jīng)缺血缺氧再復(fù)氧處理后,重組慢病毒感染組細胞cav1.2、NR1、NR2的m RNA及蛋白表達均明顯低于慢病毒對照組和未感染組[cav1.2 m RNA(A值):3.13±0.46比5.12±0.52、5.13±0.66,NR1 m RNA(A值):1.61±0.44比3.23±0.82、3.31±0.78,NR2 m RNA(A值):2.09±0.41比3.91±0.64、3.88±0.62,cav1.2蛋白(灰度值):2.82±0.39比3.98±0.23、3.96±0.24,NR1蛋白(灰度值):1.84±0.35比2.79±0.21、2.86±0.23,NR2蛋白(灰度值):0.87±0.24比1.57±0.31、1.33±0.44,均P0.01];而慢病毒對照組與未感染組之間細胞cav1.2、NR1、NR2的m RNA及蛋白表達差異均無統(tǒng)計學(xué)意義(均P0.01)。(2)未感染組、慢病毒對照組和重組慢病毒感染組之間細胞cav1.3、NCX的m RNA和蛋白表達差異均無統(tǒng)計學(xué)意義[cav1.3m RNA(A值):4.82±0.32、4.72±0.36、4.82±0.29,NCX m RNA(A值):3.49±0.78、3.47±0.71、3.56±0.65,cav1.3蛋白(灰度值):2.63±0.40、2.64±0.39、2.68±0.39,NCX蛋白(灰度值):3.27±0.48、3.34±0.48、3.31±0.42,均P0.01]。結(jié)論外源性HSP70對PC12細胞膜L型鈣離子通道亞基cav1.2及受體門控通道基因的表達有顯著影響,可能對缺血/缺氧引起的PC12細胞損傷具有保護作用。
【關(guān)鍵詞】：熱休克蛋白70 慢病毒 缺血缺氧 受體門控通道 L型鈣離子通道
【學(xué)位授予單位】：青島大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號】：R743.3
【目錄】：

• 中文摘要2-3
• Abstract3-7
• 引言7-9
• 第一章 材料與方法9-19
• 1 儀器、試劑和耗材9-11
• 1.1 主要設(shè)備和儀器9-10
• 1.2 試劑和耗材10
• 1.3 主要試劑配制10-11
• 2 實驗方法11-18
• 2.1 PC12細胞的培養(yǎng)11-12
• 2.2 篩選細胞及分組12
• 2.3 缺血缺氧模型的建立12
• 2.4 PC12細胞中提取RNA12-13
• 2.5 PC12細胞蛋白質(zhì)的提取13
• 2.6 PC12細胞外源性HSP70及其目的基因表達的檢測13-18
• 2.6.1 RT-PCR檢測HSP70及其目的基因的轉(zhuǎn)錄13-15
• 2.6.2 瓊脂糖凝膠電泳15
• 2.6.3 三組m RNA表達量的比較15-16
• 2.6.4 Western Blot檢測HSP70及其目的基因蛋白的表達16-17
• 2.6.5 三組蛋白表達量的比較17-18
• 3 統(tǒng)計學(xué)分析18-19
• 第二章 結(jié)果19-23
• 1 PC12細胞形態(tài)及慢病毒綠色熒光的觀察19
• 2 PC12細胞中HSP70的表達19-20
• 3 PC12細胞中CAV1.2、CAV1.3、NCX、NR1、NR2的表達20-23
• 3.1 PC12細胞中cav1.2、cav1.3、NCX、NR1、NR2的轉(zhuǎn)錄20-21
• 3.2 PC12細胞中cav1.2、cav1.3、NCX、NR1、NR2的蛋白表達21-23
• 第三章 討論23-28
• 1 熱休克蛋白70的表達23
• 2 神經(jīng)元缺血缺氧與熱休克蛋白的表達23-24
• 3 PC12細胞和慢病毒載體的選擇24-25
• 4 HSP70與鈣超載25-26
• 5 研究展望26-28
• 結(jié)論28-29
• 參考文獻29-33
• 綜述33-45
• 參考文獻41-45
• 攻讀學(xué)位期間的研究成果45-46
• 致謝46-47

【參考文獻】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 馬麗華;呂昕瞳;劉雅靜;徐曉雪;閔冬雨;程曉茜;楊春宇;蔡際群;郭鳳;;Ca_V1.2和鈣調(diào)蛋白在自發(fā)性遺傳性癲癇大鼠小腦中的異常表達[J];解剖科學(xué)進展;2013年01期

2 李國青;孟然;;腦缺血過程中神經(jīng)細胞凋亡的可能機制及治療方法[J];神經(jīng)疾病與精神衛(wèi)生;2011年02期

3 張蕊;龔道清;;慢病毒載體的研究進展及應(yīng)用[J];中國畜牧獸醫(yī);2010年06期

4 吳濤;王忱;;NMDA受體亞基的研究進展[J];醫(yī)學(xué)綜述;2009年06期

5 孫亞峰;裴冬生;張光毅;;NMDA受體NR2A,NR2B亞基對大鼠腦缺血再灌注海馬CA1區(qū)神經(jīng)細胞損傷的作用[J];江蘇醫(yī)藥;2009年01期

6 楊宇;吳江;楊欣;孫欣;吳昊;王全穎;楊廣笑;;攜強綠色熒光蛋白重組慢病毒的構(gòu)建及其在原代培養(yǎng)SD大鼠皮層神經(jīng)細胞中的表達[J];吉林大學(xué)學(xué)報(醫(yī)學(xué)版);2007年02期

7 王桂斌;劉運海;;銀杏葉提取物對大鼠腦缺血再灌注損傷熱休克蛋白70表達的影響[J];中華老年心腦血管病雜志;2007年02期

8 丁新生;馮美江;;缺血性卒中的病理生理學(xué)機制與細胞凋亡[J];國際腦血管病雜志;2006年01期

9 余曉慧;電針對局灶性腦缺血大鼠熱休克蛋白70表達的影響[J];現(xiàn)代中西醫(yī)結(jié)合雜志;2005年14期

10 張愛林,張家瑋,孫建寧,徐秋萍;銀杏葉提取物抗腦缺血作用機制研究進展[J];中國藥房;2005年08期

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本文編號：648668