本文關(guān)鍵詞：C3SP1-PGL3重組質(zhì)粒的構(gòu)建及其在PC12細胞中的表達

  更多相關(guān)文章： 啟動子C 重組質(zhì)粒 PC 轉(zhuǎn)染

【摘要】：目的:構(gòu)建含有SP1結(jié)合位點的C3啟動子的熒光素酶重組質(zhì)粒。通過瞬時轉(zhuǎn)染證明導(dǎo)入載體的目的基因具有高效的啟動子活性。方法:以SF級雄性大鼠的大腦總DNA為模板,根據(jù)Genbank中含有SP1結(jié)合位點的C3啟動子的核苷酸序列設(shè)計引物,對大鼠C3基因的啟動子進行特異性擴增。以原始質(zhì)粒p GL3為載體,利用Gibson Assembly連接目的片段和酶切質(zhì)粒進行分子重組,通過PCR鑒定、酶切鑒定以及測序鑒定后,將該重組質(zhì)粒通過脂質(zhì)體介導(dǎo),轉(zhuǎn)染PC12細胞�；铙w成像檢測和雙熒光素酶活性檢測得重組質(zhì)粒的螢火蟲熒光素酶活性。結(jié)果:PCR鑒定、酶切鑒定表明表達載體p GL-3中插入了含有SP1結(jié)合位點的C3啟動子基因片斷,測序結(jié)果表明編碼框正確。在PC12細胞中表達出高效的啟動子活性。結(jié)論:獲得能夠在PC12細胞內(nèi)高效表達螢火蟲熒光素酶的重組質(zhì)粒C3SP1-p GL3。
【作者單位】： 福建中醫(yī)藥大學(xué);
【關(guān)鍵詞】： 啟動子C 重組質(zhì)粒 PC 轉(zhuǎn)染
【基金】：國家自然科學(xué)基金項目(81473382) 福建省科技廳重點項目(2014Y4004)
【分類號】：R743.3
【正文快照】： 腦卒中(stroke)是嚴(yán)重威脅中老年人健康的常見病,因其發(fā)病率高、死亡率高、復(fù)發(fā)率高、致殘率高及并發(fā)癥多“四高一多”的特點,已經(jīng)成為嚴(yán)重危害人類健康的疾病之一[1,2]。研究表明,腦缺血可觸發(fā)涉及炎性因子的炎癥反應(yīng)[3,4],炎癥反應(yīng)作為腦卒中發(fā)病機制的關(guān)鍵因素之一,參與動

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本文編號：628088