本文關(guān)鍵詞：C3SP1-PGL3重組質(zhì)粒的構(gòu)建及其在PC12細(xì)胞中的表達(dá)

  更多相關(guān)文章： 啟動(dòng)子C 重組質(zhì)粒 PC 轉(zhuǎn)染

【摘要】：目的:構(gòu)建含有SP1結(jié)合位點(diǎn)的C3啟動(dòng)子的熒光素酶重組質(zhì)粒。通過(guò)瞬時(shí)轉(zhuǎn)染證明導(dǎo)入載體的目的基因具有高效的啟動(dòng)子活性。方法:以SF級(jí)雄性大鼠的大腦總DNA為模板,根據(jù)Genbank中含有SP1結(jié)合位點(diǎn)的C3啟動(dòng)子的核苷酸序列設(shè)計(jì)引物,對(duì)大鼠C3基因的啟動(dòng)子進(jìn)行特異性擴(kuò)增。以原始質(zhì)粒p GL3為載體,利用Gibson Assembly連接目的片段和酶切質(zhì)粒進(jìn)行分子重組,通過(guò)PCR鑒定、酶切鑒定以及測(cè)序鑒定后,將該重組質(zhì)粒通過(guò)脂質(zhì)體介導(dǎo),轉(zhuǎn)染PC12細(xì)胞。活體成像檢測(cè)和雙熒光素酶活性檢測(cè)得重組質(zhì)粒的螢火蟲熒光素酶活性。結(jié)果:PCR鑒定、酶切鑒定表明表達(dá)載體p GL-3中插入了含有SP1結(jié)合位點(diǎn)的C3啟動(dòng)子基因片斷,測(cè)序結(jié)果表明編碼框正確。在PC12細(xì)胞中表達(dá)出高效的啟動(dòng)子活性。結(jié)論:獲得能夠在PC12細(xì)胞內(nèi)高效表達(dá)螢火蟲熒光素酶的重組質(zhì)粒C3SP1-p GL3。
【作者單位】： 福建中醫(yī)藥大學(xué);
【關(guān)鍵詞】： 啟動(dòng)子C 重組質(zhì)粒 PC 轉(zhuǎn)染
【基金】：國(guó)家自然科學(xué)基金項(xiàng)目(81473382) 福建省科技廳重點(diǎn)項(xiàng)目(2014Y4004)
【分類號(hào)】：R743.3
【正文快照】： 腦卒中(stroke)是嚴(yán)重威脅中老年人健康的常見病,因其發(fā)病率高、死亡率高、復(fù)發(fā)率高、致殘率高及并發(fā)癥多“四高一多”的特點(diǎn),已經(jīng)成為嚴(yán)重危害人類健康的疾病之一[1,2]。研究表明,腦缺血可觸發(fā)涉及炎性因子的炎癥反應(yīng)[3,4],炎癥反應(yīng)作為腦卒中發(fā)病機(jī)制的關(guān)鍵因素之一,參與動(dòng)

【相似文獻(xiàn)】

中國(guó)期刊全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前10條

1 徐琛蓉;章錦才;趙川江;張?zhí)N惠;;重組質(zhì)粒PcDNA3.1/sTNFRⅠ在小鼠體內(nèi)表達(dá)的初步研究[J];實(shí)用口腔醫(yī)學(xué)雜志;2006年02期

2 成桂明;楊慧蘭;;pGEX-4T-1/HSV2-gG重組質(zhì)粒的構(gòu)建及表達(dá)[J];中國(guó)現(xiàn)代醫(yī)學(xué)雜志;2009年09期

3 王斌;質(zhì)粒DNA的構(gòu)型變化對(duì)轉(zhuǎn)錄的調(diào)控作用[J];遺傳學(xué)報(bào);1987年01期

4 張秀華;;重組質(zhì)粒的穩(wěn)定性[J];國(guó)外醫(yī)藥(抗生素分冊(cè));1991年03期

5 陳飛,吳紅艷,劉艷玲,李莉;蚯蚓溶栓酶重組質(zhì)粒遺傳穩(wěn)定性的研究[J];中醫(yī)藥學(xué)刊;2002年06期

6 馬大偉;陳桂生;杜彥輝;;pGBKT7-hSOD1cDNA重組質(zhì)粒的構(gòu)建及鑒定[J];寧夏醫(yī)學(xué)雜志;2011年06期

7 齊義鵬,黃永秀;昆蟲病毒重組質(zhì)粒的快速提取[J];病毒學(xué)報(bào);1987年02期

8 徐迎佳,何奔,沈南,王彬堯,鄭道聲;人白介素-1β轉(zhuǎn)換酶的克隆及重組質(zhì)粒構(gòu)建[J];上海第二醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào);1999年01期

9 孫念峰;孟慶義;田愛玲;王瑞華;劉兆軒;李博;;重組質(zhì)粒pDsRed1-C1-TRAIL的構(gòu)建及鑒定[J];中國(guó)現(xiàn)代普通外科進(jìn)展;2010年11期

10 方瀟碧;張春鴻;黃亞;林森;黃振校;吳麗萍;施清圓;李文峰;廖志蘇;;重組質(zhì)粒pENTR-CMV-EGFP-hsa-mir-16-1/15a的構(gòu)建與表達(dá)[J];實(shí)用醫(yī)學(xué)雜志;2011年12期

中國(guó)重要會(huì)議論文全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前10條

1 余勝兵;馮艾榮;周平;胡繼明;;一種新的毛細(xì)管電泳動(dòng)態(tài)涂層介質(zhì)在質(zhì)粒DNA分離中的應(yīng)用[A];中國(guó)化學(xué)會(huì)第十三屆有機(jī)分析與生物分析學(xué)術(shù)會(huì)議論文集[C];2005年

2 李夢(mèng)南;任大明;王磊;肖偉;鄭廣宏;;重組質(zhì)粒DNA在熱處理過(guò)程中的降解/變性規(guī)律研究[A];上海市化學(xué)化工學(xué)會(huì)2007年度學(xué)術(shù)年會(huì)論文摘要集[C];2007年

3 李迪;谷鴻喜;張鳳民;鐘照華;程志;;pQE32-HPV18 L1重組質(zhì)粒的構(gòu)建及鑒定[A];慶祝黑龍江省免疫學(xué)會(huì)成立十周年（1993—2003）論文集[C];2003年

4 劉茂軍;張映;邵國(guó)青;聶向庭;;重組質(zhì)粒的構(gòu)建、表達(dá)及活性鑒定[A];動(dòng)物生理生化學(xué)分會(huì)第八次學(xué)術(shù)會(huì)議暨全國(guó)反芻動(dòng)物營(yíng)養(yǎng)生理生化第三次學(xué)術(shù)研討會(huì)論文摘要匯編[C];2004年

5 寧興旺;謝小兵;朱惠斌;王述湘;葛金文;;α-烯醇化酶重組質(zhì)粒的構(gòu)建及其表達(dá)形式的研究[A];第一次全國(guó)中西醫(yī)結(jié)合檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)學(xué)術(shù)會(huì)議暨中國(guó)中西醫(yī)結(jié)合學(xué)會(huì)檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)專業(yè)委員會(huì)成立大會(huì)論文匯編[C];2014年

6 趙燕;童富淡;;家蠶HMGA(BmHMGA)表達(dá)及功能初步研究[A];華東六省一市生物化學(xué)與分子生物學(xué)會(huì)2009年學(xué)術(shù)交流會(huì)論文摘要匯編[C];2009年

7 徐麗;彭景ii;;重組質(zhì)粒pCR3.1-brZPC'的表達(dá)及其抗生育作用[A];第九次全國(guó)生殖生物學(xué)學(xué)術(shù)研討會(huì)論文摘要集[C];2003年

8 周珊;徐修禮;馬越云;劉家云;孫怡群;郝曉柯;;HBHA蛋白在結(jié)核病診斷中應(yīng)用研究[A];中華醫(yī)學(xué)會(huì)第九次全國(guó)檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)學(xué)術(shù)會(huì)議暨中國(guó)醫(yī)院協(xié)會(huì)臨床檢驗(yàn)管理專業(yè)委員會(huì)第六屆全國(guó)臨床檢驗(yàn)實(shí)驗(yàn)室管理學(xué)術(shù)會(huì)議論文匯編[C];2011年

9 章軍;秦燕;徐虹;陳天圣;樓士林;;利用穿梭表達(dá)重組質(zhì)粒在藍(lán)藻Synechococcus sp.PCC7942中表達(dá)胸腺素α_1[A];中國(guó)藻類學(xué)會(huì)第十一次學(xué)術(shù)討論會(huì)論文摘要集[C];2001年

10 高方友;楊輝;張治元;何家全;劉仕勇;邱克軍;;重組質(zhì)粒pEGFP-mD1x5的構(gòu)建及其在室管膜前下區(qū)神經(jīng)干細(xì)胞中的表達(dá)研究[A];貴州省醫(yī)學(xué)會(huì)神經(jīng)外科學(xué)分會(huì)第七屆學(xué)術(shù)交流會(huì)暨神經(jīng)外科學(xué)新進(jìn)展學(xué)習(xí)班論文集[C];2006年

中國(guó)重要報(bào)紙全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前1條

1 記者　耿建擴(kuò) 藺玉堂;“表達(dá)凝血八因子新的重組質(zhì)�！背晒ρ兄芠N];光明日?qǐng)?bào);2006年

中國(guó)博士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前5條

1 胡春生;重組質(zhì)粒pUDK-HGF鎮(zhèn)痛作用及其機(jī)制研究[D];北京工業(yè)大學(xué);2016年

2 張泉;重組質(zhì)粒DNA的規(guī)�；a(chǎn)工藝及質(zhì)量鑒定研究[D];揚(yáng)州大學(xué);2006年

3 朱鴻飛;重組質(zhì)粒pcDNAKCpG生物安全性研究[D];中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院;2005年

4 崔福愛;BMP-6和VEGF表達(dá)載體的構(gòu)建及其促進(jìn)成骨作用的實(shí)驗(yàn)研究[D];山東大學(xué);2010年

5 王席娟;SP-B-C/A(-18)基因多態(tài)性與高氧肺損傷易感性關(guān)系研究[D];華中科技大學(xué);2013年

中國(guó)碩士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前10條

1 汪小五;肺炎支原體P1-C末端特異性抗原蛋白的制備及其基因分型的研究[D];安徽醫(yī)科大學(xué);2015年

2 劉加美;組蛋白去乙�；敢种苿㏕SA調(diào)控Keap1-Nrf2信號(hào)通路的相關(guān)機(jī)制研究[D];南京大學(xué);2014年

3 王穎慧;表達(dá)HBsAg基因的重組質(zhì)粒與重組腺病毒的免疫學(xué)初步研究[D];中國(guó)疾病預(yù)防控制中心;2014年

4 劉原;弓形蟲ROP16的表達(dá)及其調(diào)控宿主細(xì)胞凋亡的研究[D];江蘇大學(xué);2016年

5 李夢(mèng)南;熱處理廢棄重組質(zhì)粒DNA的有效性與安全性分析[D];同濟(jì)大學(xué);2008年

6 李茜;pcDNA3.1-preS1-GFP重組質(zhì)粒的構(gòu)建及其在小鼠精子內(nèi)的表達(dá)[D];青島大學(xué);2010年

7 張戰(zhàn)鋒;細(xì)胞周期依賴性蛋白激酶2重組質(zhì)粒的構(gòu)建與表達(dá)[D];廣州中醫(yī)藥大學(xué);2011年

8 黃麗春;酵母代謝木糖產(chǎn)乙醇重組質(zhì)粒的構(gòu)建[D];廈門大學(xué);2009年

9 劉陽(yáng);剛地弓形蟲HSP70基因重組質(zhì)粒的構(gòu)建及其誘導(dǎo)小鼠的細(xì)胞免疫應(yīng)答[D];山西醫(yī)科大學(xué);2011年

10 楊媚娜;β轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子受體Ⅱ啟動(dòng)子熒光素酶報(bào)告基因重組質(zhì)粒的構(gòu)建[D];吉林大學(xué);2012年

，

本文編號(hào)：628088