本文關(guān)鍵詞：縫隙連接Cx43在腦微血管痙攣中作用的體內(nèi)實驗研究

  更多相關(guān)文章： 縫隙鏈接蛋白43 微循環(huán) SAH 腦微血管痙攣 SiRNA

【摘要】：目的縫隙連接(gap junction,GJ)在血管舒縮,尤其是在調(diào)節(jié)平滑肌方面發(fā)揮了重要作用,而縫隙連接蛋白(Cx)是縫隙連接發(fā)揮功能的基礎(chǔ)。我們課題組重點在Cx43參與蛛網(wǎng)膜下腔出血(SAH)后腦血管痙攣(CVS)的研究中,前期研究表明,Cx43主要通過調(diào)節(jié)血管的收縮參與SAH后CVS的進展.但影像學上的CVS和延遲性缺血性神經(jīng)功能障礙(DIND)臨床表現(xiàn)并不完全相符,并且Cx43蛋白還廣泛存在于微血管,故本研究假設(shè)SAH后微血管的痙攣與微血管中Cx43的表達密切相關(guān)。為驗證假設(shè),本實驗通過使用二次注血的SAH大鼠模型,在動物體內(nèi)研究Cx43的表達是否參與SAH微血管痙攣的調(diào)節(jié)及進一步深入了解其作用機制。方法1、二次注血的SAH模型建立:用普通級SD大鼠,行腹腔麻醉,尾靜脈取血大概0.3ml備用,體式顯微鏡下枕大池穿刺,見有清亮腦脊液流出后,將尾靜脈血注入,次日同時間點進行二次注血,從而完成造模過程。2、SD大鼠模型分組:正常組、SAH3天、7天組和腺病毒預(yù)處理的SAH3天、7天組。采用western blot、免疫組化檢測各組大腦中動脈外側(cè)裂向頂葉部延伸段末側(cè)分支血管(直徑20~80um)Cx43的表達水平變化;HE染色光鏡下觀察血管的收縮形態(tài)、內(nèi)徑變化、平滑肌細胞等相關(guān)病理變化。3、活體熒光顯微鏡檢測:模型分組同上,通過尾靜脈注入FITC-Dextran(標記血小板),采用活體熒光顯微鏡檢測大腦中動脈分支微血管的直徑變化,對比分析各組之間微血管的痙攣數(shù)量、痙攣程度。結(jié)果1、成功建立二次注血SAH模型,通過光鏡觀察提示大腦中動脈分支微血管管腔狹窄、增厚程度不同、內(nèi)皮細胞水腫、變形,平滑肌細胞變性壞死,排列紊亂,平滑肌層增厚。2、Cx43的表達存在不同的變化,western blot檢測SAH后Cx43表達量在持續(xù)增加,在7d時達到一個峰值。而加入腺病毒預(yù)處理組Cx43表達量相對于SAH組有下降。免疫組化提示SAH后在內(nèi)皮、平滑肌、外膜層以看到明顯的棕黃染色的Cx43陽性表達,而腺病毒預(yù)處理組同SAH組比較,Cx43陽性表達量有所下降。3、SAH組的血管痙攣數(shù)量和血管痙程度逐漸上升,在7day時達到高峰,腺病毒預(yù)處理組較SAH對照組血管痙攣數(shù)量和程度均有所下降。結(jié)論1、SAH后微動脈上Cx43表達量逐漸升高,在7天達到峰值。2、使用si RNA-Cx43腺病毒特異性下調(diào)Cx43表達能有效的減少微血管痙攣數(shù)量、緩解痙攣程度。3、SAH后直徑越小的微動脈,血管痙攣收縮程度的越嚴重,隨著時間的推移血管的痙攣程度加重,直徑小的血管痙攣較直徑大的血管痙攣加重程度更明顯。
【關(guān)鍵詞】：縫隙鏈接蛋白43 微循環(huán) SAH 腦微血管痙攣 SiRNA
【學位授予單位】：南昌大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2015
【分類號】：R743.35
【目錄】：

• 摘要3-5
• ABSTRACT5-9
• 中英縮略詞表9-10
• 第1章 前言10-13
• 第2章 材料與儀器13-17
• 2.1 實驗動物13
• 2.2 實驗試劑13-16
• 2.2.1 主要購置試劑13-14
• 2.2.2 主要試劑的配制14-16
• 2.3 實驗儀器16-17
• 第3章 研究大鼠蛛網(wǎng)膜下腔出血后Cx43在大腦中動脈分支中的表達變化實驗方法17-27
• 3.1 大鼠蛛網(wǎng)膜下腔出血模型的構(gòu)建方法17
• 3.2 腺病毒給藥方法、途徑及劑量17
• 3.3 大鼠的大腦中動脈分支微血管標本的灌注固定17-18
• 3.4 HE染色觀察蛛網(wǎng)膜下腔出血模型18-20
• 3.4.1 石蠟切片的制作18-19
• 3.4.2 HE染色法（蘇木素－伊紅染色）19-20
• 3.5 免疫組化觀察大腦中動脈分支微血管Cx43的表達20-21
• 3.6 Western bolt檢測大腦中動脈分支微血管的Cx43表達水平變化21-24
• 3.6.1 Western bolt檢測腺病毒對Cx43的沉默效率21-24
• 3.6.2 Western bolt檢測SAH后大腦中動脈分支微血管Cx43的表達變化24
• 3.6.3 Western bolt檢測腺病毒預(yù)處理后SAH的大腦中動脈分支微血管Cx43的表達變化24
• 3.6.4 圖像分析與數(shù)據(jù)統(tǒng)計分析24
• 3.7 體內(nèi)實驗的分組24-25
• 3.8 活體熒光顯微鏡測定25-26
• 3.8.1 活體熒光顯微鏡前期步驟25-26
• 3.8.2 圖像測定采集方法26
• 3.9 數(shù)據(jù)統(tǒng)計分析26-27
• 第4章 實驗結(jié)果27-35
• 4.1 HE染色觀察大腦中動脈分支微血管的形態(tài)變化27
• 4.2 Western bolt檢測腺病毒對Cx43的沉默效率檢測結(jié)果27-30
• 4.2.1 Western bolt檢測SAH和病毒預(yù)處理組大腦中動脈分支微血管Cx43的表達變化29-30
• 4.4 免疫組化的結(jié)果30-31
• 4.5 活體熒光顯微鏡結(jié)果31-35
• 4.5.1 血管痙攣數(shù)量31-32
• 4.5.2 血管痙攣程度32-33
• 4.5.3 不同直徑的微動脈收縮程度33-35
• 第5章 討論35-41
• 5.1 SAH、DIND與CVS35-36
• 5.2 腦微循環(huán)與DIND36-37
• 5.3 GJ與腦微循環(huán)37-38
• 5.4 縫隙連接蛋白Cx43與微血管收縮機制的探討38-39
• 5.5 本實驗研究結(jié)果的討論39-41
• 第6章 結(jié)論與展望41-42
• 6.1 結(jié)論41
• 6.2 展望41-42
• 致謝42-43
• 參考文獻43-47
• 附圖47-49
• 綜述49-57
• 參考文獻55-57

【參考文獻】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前4條

1 臧小彪;張樹龍;;縫隙連接蛋白40和心房顫動[J];心血管病學進展;2011年04期

2 陳紅偉;洪濤;宋湖平;葉新運;汪陽;;縫隙連接蛋白43磷酸化在兔腦血管痙攣中的表達變化[J];重慶醫(yī)學;2010年09期

3 洪濤,汪陽,蔣麗萍,高子云,辜斌,遲海波;縫隙連接阻斷劑1-庚醇對腦血管痙攣的抑制作用[J];中華神經(jīng)外科雜志;2005年04期

4 洪濤,高子云,蔣麗萍,汪陽;基底動脈縫隙連接蛋白的分布[J];江西醫(yī)學院學報;2003年02期

，

本文編號：616941