本文關(guān)鍵詞：β-arrestin1與STAT3的相互作用及對(duì)神經(jīng)膠質(zhì)瘤細(xì)胞增殖影響的研究

  更多相關(guān)文章： 神經(jīng)膠質(zhì)瘤 谷氨酰胺 β-arrestin1 STAT3

【摘要】：目的：根據(jù)前期試驗(yàn)結(jié)果及以往研究,我們假設(shè)：β-arrestinl可促進(jìn)STAT3的修飾,這種修飾的增強(qiáng)對(duì)神經(jīng)膠質(zhì)瘤的增殖起到重要影響。本研究確認(rèn)了β-arrestinl對(duì)STAT3修飾的影響,探討了β-arrestinl與STAT3的相互作用及其對(duì)神經(jīng)膠質(zhì)瘤增殖的影響。方法：1.驗(yàn)證β-arrestinl與STAT3之間的相互結(jié)合：①將6myc-βarrestinl與flag-STAT3質(zhì)粒共同轉(zhuǎn)染入293T細(xì)胞中,用免疫共沉淀(Co-Immunoprecipitation,COIP)法檢測(cè)6myc-βarrestin1與flag-STAT3之見(jiàn)的相互作用②轉(zhuǎn)染pds-red-STAT3質(zhì)粒與YFP-N1-parrestinl質(zhì)粒：將pds-red-STAT3與β-arrestinl-GFP質(zhì)粒共同轉(zhuǎn)染入293T細(xì)胞中,熒光顯微鏡下觀察二者的結(jié)合2.過(guò)表達(dá)β-arrestin1,觀察C6細(xì)胞內(nèi)STAT3蛋白修飾及表達(dá)的影響：按梯度(0.5,1,2μg)將β-arrestinl質(zhì)粒轉(zhuǎn)染入C6細(xì)胞,免疫沉淀法(Immunoprecipitation, IP)純化內(nèi)源性STAT3蛋白,免疫印跡技術(shù)檢測(cè)STAT3磷酸化修飾及STAT3表達(dá)量的變化3.過(guò)表達(dá)β-arrestin1,觀察C6細(xì)胞生長(zhǎng)狀況：①C6細(xì)胞轉(zhuǎn)染：實(shí)驗(yàn)組轉(zhuǎn)染β-arrestin1質(zhì)粒,對(duì)照組轉(zhuǎn)染PCDNA3.0質(zhì)粒②MTT法檢測(cè)細(xì)胞增殖：96孔板每孔中加入20ulMTT溶液,培養(yǎng)4h后,終止反應(yīng)。隨后每孔加入150ul二甲基亞砜,在搖床上低速振蕩10min,使用酶聯(lián)免疫檢測(cè)儀,在吸光度(OD490nm)處測(cè)量各孔的吸光值。4.谷氨酰胺對(duì)神經(jīng)膠質(zhì)瘤細(xì)胞生長(zhǎng)的影響：分別用不含谷氨酰胺的DMEM培養(yǎng)基,正常DMEM培養(yǎng)基培養(yǎng)大鼠神經(jīng)膠質(zhì)瘤細(xì)胞(C6細(xì)胞)24小時(shí),倒置顯微鏡下觀察細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)。5.谷氨酰胺對(duì)神經(jīng)膠質(zhì)瘤細(xì)胞內(nèi)源性STAT3表達(dá)及修飾的影響：谷氨酰胺按時(shí)間梯度(0,1,5,10,15,30,60,90分鐘)刺激大鼠神經(jīng)膠質(zhì)瘤細(xì)胞(C6細(xì)胞),用免疫沉淀法(Immunoprecipitation, IP)純化內(nèi)源性STAT3蛋白。免疫印跡技術(shù)檢測(cè)STAT3磷酸化修飾及STAT3表達(dá)量的變化6.谷氨酰胺對(duì)STAT3和(3-arrestin1結(jié)合的影響：將6myc-β-arrestin1質(zhì)粒轉(zhuǎn)入C6細(xì)胞中,實(shí)驗(yàn)組用1mM谷氨酰胺刺激,通過(guò)CO-IP法觀察內(nèi)源性STAT3與6myc-(3-arrestin1的結(jié)合結(jié)果：1. Western blotting結(jié)果表明6myc-βarrestin1與flag-STAT3之間可以相互結(jié)合,熒光顯微鏡顯示pds-red-STAT3與β-arrestin1-GFP質(zhì)�？上嗷ソY(jié)合2. Western blotting結(jié)果表明,過(guò)表達(dá)β-arrestin1增強(qiáng)了C6細(xì)胞內(nèi)STAT3的磷酸化修飾,但對(duì)STAT3蛋白的表達(dá)量無(wú)顯著影響3.酶聯(lián)免疫檢測(cè)儀的吸光值表示,過(guò)表達(dá)β-arrestin1的C6細(xì)胞比正常狀態(tài)下增殖比例升高4.倒置顯微鏡下顯示,使用不含谷氨酰胺DMEM培養(yǎng)基培養(yǎng)后的C6細(xì)胞與使用含有谷氨酰胺的DMEM培養(yǎng)基相比,細(xì)胞數(shù)目明顯減少,并且細(xì)胞形態(tài)有所改變5. Western blotting結(jié)果表明,在谷氨酰胺刺激下,C6細(xì)胞內(nèi)STAT3的磷酸化修飾在60分鐘左右有顯著變化,而STAT3蛋白的表達(dá)量無(wú)明顯改變6. Western blotting結(jié)果表明,谷氨酰胺刺激下STAT3和(3-arrestin1結(jié)合增強(qiáng)結(jié)論：1. p-arrestin1與STAT3之間可以相互結(jié)合2.過(guò)表達(dá)P-arrestin1可促進(jìn)C6細(xì)胞內(nèi)STAT3磷酸化修飾,但對(duì)STAT3蛋白的表達(dá)量無(wú)影響。3.過(guò)表達(dá)β-arrestinl可促進(jìn)神經(jīng)膠質(zhì)瘤細(xì)胞的生長(zhǎng)。4.谷氨酰胺可促進(jìn)神經(jīng)膠質(zhì)瘤細(xì)胞的增殖5.谷氨酰胺可增強(qiáng)神經(jīng)膠質(zhì)瘤細(xì)胞內(nèi)源性STAT3磷酸化修飾,但對(duì)STAT3蛋白的表達(dá)量無(wú)影響。6.在谷氨酰胺刺激下,STAT3和β-arrestinl結(jié)合增強(qiáng)創(chuàng)新及意義：神經(jīng)膠質(zhì)瘤簡(jiǎn)稱膠質(zhì)瘤,是目前最常見(jiàn)的原發(fā)性中樞神經(jīng)系統(tǒng)腫瘤,約占所有顱內(nèi)原發(fā)腫瘤的一半,具有極大的危害性。在腫瘤的發(fā)生發(fā)展過(guò)程中,信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)子和轉(zhuǎn)錄激活子3(Signal Transducer and Activator of Transcription 3, STAT3)作為因子和生長(zhǎng)因子受體的細(xì)胞質(zhì)轉(zhuǎn)錄因子,發(fā)揮著重要作用。其激活過(guò)程目前已被證明為以下過(guò)程：(1)首先,細(xì)胞外因子與細(xì)胞膜受體結(jié)合(2)JAK信號(hào)通路活化,并發(fā)生自身磷酸化(3)激活后,JAK可以磷酸化一個(gè)或多個(gè)位點(diǎn),繼而激活下游STAT3 (4) STAT3發(fā)生Tyr705和Ser727位點(diǎn)的磷酸化(5)STAT3從受體上解離,轉(zhuǎn)移至細(xì)胞核中,從而發(fā)揮調(diào)控相關(guān)基因表達(dá)等生理學(xué)作用。研究表明,在多種腫瘤細(xì)胞及組織中,STAT3的表達(dá)常發(fā)生異常升高。STAT3的過(guò)度激活,會(huì)導(dǎo)致正常細(xì)胞發(fā)生增殖異常,且細(xì)胞的自身凋亡受阻,從而誘導(dǎo)腫瘤的發(fā)生。因此,STAT3信號(hào)通道被認(rèn)為可能成為腫瘤基因治療的全新靶點(diǎn),目前針對(duì)STAT3的阻斷治療研究也已成為近年研究的熱點(diǎn)。而我們的結(jié)果表明,β-arrestinl可以增強(qiáng)STAT3的修飾,并對(duì)神經(jīng)膠質(zhì)瘤的增殖起到一定影響。而谷氨酰胺(Gln)對(duì)細(xì)胞增殖的影響可能與其增強(qiáng)了P-arrestinl與STAT3的結(jié)合有關(guān)。這可能為神經(jīng)膠質(zhì)瘤的治療提供一種潛在的治療方式。
【關(guān)鍵詞】：神經(jīng)膠質(zhì)瘤 谷氨酰胺 β-arrestin1 STAT3
【學(xué)位授予單位】：山東大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號(hào)】：R739.4
【目錄】：

• 中文摘要6-9
• 英文摘要9-13
• 符號(hào)說(shuō)明13-15
• 前言15-19
• 材料與方法19-31
• 實(shí)驗(yàn)結(jié)果31-37
• 討論37-40
• 參考文獻(xiàn)40-47
• 致謝47-48
• 學(xué)位論文評(píng)閱及答辯情況表48

【相似文獻(xiàn)】

中國(guó)期刊全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前10條

1 陳贊,楊立莊,葉偉,王伊龍,趙鵬,李永利,康軍,鄭永日,曹陽(yáng);神經(jīng)膠質(zhì)瘤細(xì)胞熱休克蛋白抗原肽復(fù)合物的研究[J];中華實(shí)驗(yàn)外科雜志;2003年05期

2 陳贊 ,楊立莊 ,葉偉;神經(jīng)膠質(zhì)瘤細(xì)胞熱休克蛋白抗原肽復(fù)合物的研究[J];哈爾濱醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào);2003年05期

3 張玲華;;神經(jīng)膠質(zhì)瘤的診斷與治療現(xiàn)狀[J];實(shí)用醫(yī)技雜志;2007年24期

4 周文光;李南華;王廷芳;;鼻內(nèi)型神經(jīng)膠質(zhì)瘤一例[J];臨床耳鼻咽喉頭頸外科雜志;1990年02期

5 ;顱面神經(jīng)膠質(zhì)瘤[J];國(guó)外醫(yī)學(xué).耳鼻咽喉科學(xué)分冊(cè);1997年02期

6 薛德麟,雷霆;要重視神經(jīng)膠質(zhì)瘤的治療[J];中國(guó)臨床神經(jīng)外科雜志;2002年01期

7 肖敏 ,吳淼 ,曾冬竹 ,饒蕓;樹(shù)突狀細(xì)胞瘤苗誘導(dǎo)的抗神經(jīng)膠質(zhì)瘤作用體外實(shí)驗(yàn)研究[J];現(xiàn)代醫(yī)藥衛(wèi)生;2003年01期

8 戴捷,于\，

本文編號(hào)：613614