本文關(guān)鍵詞：促腎上腺皮質(zhì)激素釋放因子通過對GSK3β的磷酸化促進U87MG細胞的凋亡

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【摘要】：背景:膠質(zhì)瘤是中樞神經(jīng)系統(tǒng)中最常見的腫瘤,呈浸潤性生長,易侵犯重要的神經(jīng)結(jié)構(gòu),預后差,復發(fā)率及死亡率高。雖然外科手術(shù)和放化療治療效果都有了極大的提高,但是還遠未達到理想的效果。能否通過生物治療(靶向治療)延長患者生存期,這給我們提供了一個全新的思路。研究表明,提高細胞內(nèi)cAMP水平并激活cAMP依賴的信號轉(zhuǎn)倒途徑能夠促進中樞及外周各種神經(jīng)組織的存活。在CRF作用于小腦顆粒細胞的研究中發(fā)現(xiàn)CRF-CRFR-cAMP-PKA激活,最終導致GSK-3β的磷酸化在神經(jīng)保護作用中發(fā)揮重要作用[1]。GSK3β的生物學功能較復雜,在腫瘤細胞侵襲與轉(zhuǎn)移及凋亡、癌細胞基因轉(zhuǎn)錄、加速細胞周期過程中起到調(diào)控作用。GSK3β在不同遺傳背景的細胞中發(fā)揮不同的作用,所以必須明確特定細胞中GSK3β激活與失活所發(fā)揮的作用才能進一步加以利用。前期實驗研究發(fā)現(xiàn)CRF能促進膠質(zhì)瘤U87MG凋亡,且凋亡相關(guān)蛋白capase-3的表達與細胞凋亡趨勢一致,進一步研究發(fā)現(xiàn)CRF作用于U87細胞后細胞內(nèi)cAMP及PKA水平明顯升高。CRF作用于兩種細胞后上游信號分子的表達趨勢一致,但是結(jié)果卻完全相反,所以有必要進一步研究CRF作用下U87MG內(nèi)GSK3β的活性狀態(tài)及對細胞凋亡所起的作用。目的:研究CRF作用于人腦膠質(zhì)瘤U87MG細胞后pGSK3β在細胞漿和細胞核的表達情況,探討pGSK3β在CRF促進U87MG細胞凋亡中所起作用。方法:1免疫熒光顯微鏡檢測正常U87細胞和CRF作用后的細胞內(nèi)pGSK3β是否有表達。2培養(yǎng)U87細胞,用不同濃度CRF(10~(-7),10~(-8),10~(-9) mol/L)進行干預,干預時間分為12h,24h,36h,每個濃度和時間點都設置相應的對照組。然后應用胞漿/胞核蛋白提取試劑盒分開提取胞漿和胞核蛋白,用western blot檢測細胞漿及細胞核pGSK3β的表達情況。結(jié)果:1免疫熒光顯微鏡顯示:對照組和實驗組都有pGSK-3β的表達。2 Western blot檢測細胞漿與細胞核pGSK-3β的結(jié)果顯示:CRF 10~(-7)mol/L組:12h,24h實驗組細胞漿和細胞核pGSK-3β的表達量與對照組無明顯差別(胞漿Z_(12h)=-1.091,P=0.1375,Z_(24h)=-0.218,P=0.4135,胞核Z_(12h)=-0.655,P=0.2565,Z_(24h)=-0.655,P=0.2565)。36h實驗組細胞漿和細胞核pGSK-3β的表達量明顯高于對照組(胞漿Z_(36h)=-1.964,P=0.025,胞核Z_(36h)=-1.964,P=0.025)。CRF 10~(-8) mol/L組:12h,24h實驗組細胞漿和細胞核pGSK-3β的表達量與對照組無明顯差別(胞漿Z_(12h)=-1.107,P=0.134,Z_(24h)=-1.528,P=0.0635,胞核Z_(12h)=-0.655,P=0.2565,Z_(24h)=-1.091,P=0.1375)。36h實驗組細胞漿和細胞核pGSK-3β的表達量明顯高于對照組(胞漿Z_(36h)=-1.964,P=0.025,胞核Z_(36h)=-1.964,P=0.025)。CRF 10~(-9) mol/L組:12h,24h,36h實驗組細胞漿和細胞核pGSK-3β的表達量與對照組無明顯差別(胞漿Z_(12h)=-0.655,P=0.2565,Z_(24h)=-0.218,P=0.4135,Z_(36h)=-0.218,P=0.4135,胞核Z_(12h)=-0.218,P=0.2135,Z_(24h)=-1.091,P=0.1375,Z_(36h)=-1.091,P=0.1375)。3 36h實驗組胞漿和胞核pGSK-3β/36h對照組胞漿和胞核pGSK-3β的統(tǒng)計結(jié)果顯示:CRF 10~(-7) mol/L,CRF 10~(-8) mol/L,CRF 10~(-9) mol/L三組之間存在明顯差別(胞漿Chi-square_(實驗組/對照組)=7.200,P=0.027,胞核Chi-square_(實驗組/對照組)=7.200,P=0.027)。結(jié)論:1免疫熒光顯微鏡顯示:U87MG細胞內(nèi)存在pGSK-3β的表達。2 Western blot檢測細胞漿與細胞核pGSK-3β的結(jié)果顯示:CRF能夠促進GSK3β的磷酸化,且呈濃度依賴性,濃度越高作用越強。
【關(guān)鍵詞】：CRF U87MG細胞株 GSK-3β 免疫熒光 凋亡
【學位授予單位】：河北醫(yī)科大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2016
【分類號】：R739.41
【目錄】：

• 中文摘要4-6
• 英文摘要6-9
• 英文縮寫9-10
• 前言10-11
• 材料與方法11-19
• 結(jié)果19-20
• 附圖20-27
• 討論27-33
• 結(jié)論33-34
• 參考文獻34-38
• 綜述 促腎上腺皮質(zhì)激素釋放因子（CRF）、糖原合成酶激酶-3（GSK3）、磷酸腺苷反應元件結(jié)合蛋白（CREB）間相互關(guān)系的研究進展38-50
• 參考文獻46-50
• 致謝50-51
• 個人簡歷51

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