本文關(guān)鍵詞：促腎上腺皮質(zhì)激素釋放因子通過(guò)對(duì)GSK3β的磷酸化促進(jìn)U87MG細(xì)胞的凋亡

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【摘要】：背景:膠質(zhì)瘤是中樞神經(jīng)系統(tǒng)中最常見(jiàn)的腫瘤,呈浸潤(rùn)性生長(zhǎng),易侵犯重要的神經(jīng)結(jié)構(gòu),預(yù)后差,復(fù)發(fā)率及死亡率高。雖然外科手術(shù)和放化療治療效果都有了極大的提高,但是還遠(yuǎn)未達(dá)到理想的效果。能否通過(guò)生物治療(靶向治療)延長(zhǎng)患者生存期,這給我們提供了一個(gè)全新的思路。研究表明,提高細(xì)胞內(nèi)cAMP水平并激活cAMP依賴的信號(hào)轉(zhuǎn)倒途徑能夠促進(jìn)中樞及外周各種神經(jīng)組織的存活。在CRF作用于小腦顆粒細(xì)胞的研究中發(fā)現(xiàn)CRF-CRFR-cAMP-PKA激活,最終導(dǎo)致GSK-3β的磷酸化在神經(jīng)保護(hù)作用中發(fā)揮重要作用[1]。GSK3β的生物學(xué)功能較復(fù)雜,在腫瘤細(xì)胞侵襲與轉(zhuǎn)移及凋亡、癌細(xì)胞基因轉(zhuǎn)錄、加速細(xì)胞周期過(guò)程中起到調(diào)控作用。GSK3β在不同遺傳背景的細(xì)胞中發(fā)揮不同的作用,所以必須明確特定細(xì)胞中GSK3β激活與失活所發(fā)揮的作用才能進(jìn)一步加以利用。前期實(shí)驗(yàn)研究發(fā)現(xiàn)CRF能促進(jìn)膠質(zhì)瘤U87MG凋亡,且凋亡相關(guān)蛋白capase-3的表達(dá)與細(xì)胞凋亡趨勢(shì)一致,進(jìn)一步研究發(fā)現(xiàn)CRF作用于U87細(xì)胞后細(xì)胞內(nèi)cAMP及PKA水平明顯升高。CRF作用于兩種細(xì)胞后上游信號(hào)分子的表達(dá)趨勢(shì)一致,但是結(jié)果卻完全相反,所以有必要進(jìn)一步研究CRF作用下U87MG內(nèi)GSK3β的活性狀態(tài)及對(duì)細(xì)胞凋亡所起的作用。目的:研究CRF作用于人腦膠質(zhì)瘤U87MG細(xì)胞后pGSK3β在細(xì)胞漿和細(xì)胞核的表達(dá)情況,探討pGSK3β在CRF促進(jìn)U87MG細(xì)胞凋亡中所起作用。方法:1免疫熒光顯微鏡檢測(cè)正常U87細(xì)胞和CRF作用后的細(xì)胞內(nèi)pGSK3β是否有表達(dá)。2培養(yǎng)U87細(xì)胞,用不同濃度CRF(10~(-7),10~(-8),10~(-9) mol/L)進(jìn)行干預(yù),干預(yù)時(shí)間分為12h,24h,36h,每個(gè)濃度和時(shí)間點(diǎn)都設(shè)置相應(yīng)的對(duì)照組。然后應(yīng)用胞漿/胞核蛋白提取試劑盒分開(kāi)提取胞漿和胞核蛋白,用western blot檢測(cè)細(xì)胞漿及細(xì)胞核pGSK3β的表達(dá)情況。結(jié)果:1免疫熒光顯微鏡顯示:對(duì)照組和實(shí)驗(yàn)組都有pGSK-3β的表達(dá)。2 Western blot檢測(cè)細(xì)胞漿與細(xì)胞核pGSK-3β的結(jié)果顯示:CRF 10~(-7)mol/L組:12h,24h實(shí)驗(yàn)組細(xì)胞漿和細(xì)胞核pGSK-3β的表達(dá)量與對(duì)照組無(wú)明顯差別(胞漿Z_(12h)=-1.091,P=0.1375,Z_(24h)=-0.218,P=0.4135,胞核Z_(12h)=-0.655,P=0.2565,Z_(24h)=-0.655,P=0.2565)。36h實(shí)驗(yàn)組細(xì)胞漿和細(xì)胞核pGSK-3β的表達(dá)量明顯高于對(duì)照組(胞漿Z_(36h)=-1.964,P=0.025,胞核Z_(36h)=-1.964,P=0.025)。CRF 10~(-8) mol/L組:12h,24h實(shí)驗(yàn)組細(xì)胞漿和細(xì)胞核pGSK-3β的表達(dá)量與對(duì)照組無(wú)明顯差別(胞漿Z_(12h)=-1.107,P=0.134,Z_(24h)=-1.528,P=0.0635,胞核Z_(12h)=-0.655,P=0.2565,Z_(24h)=-1.091,P=0.1375)。36h實(shí)驗(yàn)組細(xì)胞漿和細(xì)胞核pGSK-3β的表達(dá)量明顯高于對(duì)照組(胞漿Z_(36h)=-1.964,P=0.025,胞核Z_(36h)=-1.964,P=0.025)。CRF 10~(-9) mol/L組:12h,24h,36h實(shí)驗(yàn)組細(xì)胞漿和細(xì)胞核pGSK-3β的表達(dá)量與對(duì)照組無(wú)明顯差別(胞漿Z_(12h)=-0.655,P=0.2565,Z_(24h)=-0.218,P=0.4135,Z_(36h)=-0.218,P=0.4135,胞核Z_(12h)=-0.218,P=0.2135,Z_(24h)=-1.091,P=0.1375,Z_(36h)=-1.091,P=0.1375)。3 36h實(shí)驗(yàn)組胞漿和胞核pGSK-3β/36h對(duì)照組胞漿和胞核pGSK-3β的統(tǒng)計(jì)結(jié)果顯示:CRF 10~(-7) mol/L,CRF 10~(-8) mol/L,CRF 10~(-9) mol/L三組之間存在明顯差別(胞漿Chi-square_(實(shí)驗(yàn)組/對(duì)照組)=7.200,P=0.027,胞核Chi-square_(實(shí)驗(yàn)組/對(duì)照組)=7.200,P=0.027)。結(jié)論:1免疫熒光顯微鏡顯示:U87MG細(xì)胞內(nèi)存在pGSK-3β的表達(dá)。2 Western blot檢測(cè)細(xì)胞漿與細(xì)胞核pGSK-3β的結(jié)果顯示:CRF能夠促進(jìn)GSK3β的磷酸化,且呈濃度依賴性,濃度越高作用越強(qiáng)。
【關(guān)鍵詞】：CRF U87MG細(xì)胞株 GSK-3β 免疫熒光 凋亡
【學(xué)位授予單位】：河北醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類(lèi)號(hào)】：R739.41
【目錄】：

• 中文摘要4-6
• 英文摘要6-9
• 英文縮寫(xiě)9-10
• 前言10-11
• 材料與方法11-19
• 結(jié)果19-20
• 附圖20-27
• 討論27-33
• 結(jié)論33-34
• 參考文獻(xiàn)34-38
• 綜述 促腎上腺皮質(zhì)激素釋放因子（CRF）、糖原合成酶激酶-3（GSK3）、磷酸腺苷反應(yīng)元件結(jié)合蛋白（CREB）間相互關(guān)系的研究進(jìn)展38-50
• 參考文獻(xiàn)46-50
• 致謝50-51
• 個(gè)人簡(jiǎn)歷51

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1 彭岳;趙鐵建;謝海源;韋燕飛;;細(xì)胞培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)中一些細(xì)節(jié)問(wèn)題的探討[J];中華中醫(yī)藥學(xué)刊;2009年06期

2 鄭麗君;夏文美;童村;;HeLa細(xì)胞的培養(yǎng)與使用[J];醫(yī)藥工業(yè);1983年10期

3 李少英;李月秋;朱金玲;;三種細(xì)胞生長(zhǎng)狀況的觀察[J];佳木斯醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào);1995年06期

4 嚴(yán)國(guó)俊;裴燕芳;朱貞宏;吳潔穎;潘金火;;實(shí)時(shí)細(xì)胞電子分析技術(shù)的應(yīng)用研究進(jìn)展[J];中國(guó)藥學(xué)雜志;2014年03期

5 陳必良,穆潤(rùn)華,馬向東,王德堂,辛?xí)匝?鄭維國(guó),嚴(yán)瑞蘭;特異性反義寡核苷酸對(duì)含HPV16的SiHa細(xì)胞的作用[J];第四軍醫(yī)大學(xué)學(xué)報(bào);2000年03期

6 孟洪弟,戚豫,潘虹,吳希如;無(wú)線粒體DNA的ρ°206細(xì)胞的培養(yǎng)及其呼吸鏈功能損害[J];中國(guó)優(yōu)生與遺傳雜志;2000年03期

7 何秉燕;鄧長(zhǎng)生;鄒典定;劉湘芬;易有榮;;G-CSF對(duì)洛伐他汀誘導(dǎo)的K562細(xì)胞內(nèi)酸堿度及凋亡的影響[J];中華血液學(xué)雜志;2006年07期

8 黃靜紅;李德如;閻國(guó)富;;蘿卜硫素對(duì)HaCaT細(xì)胞的影響研究[J];中國(guó)美容醫(yī)學(xué);2010年11期

9 章靜波,葉祝三;保護(hù)正常組織和細(xì)胞——腫瘤化療研究中的一個(gè)動(dòng)向[J];國(guó)外醫(yī)學(xué)參考資料(腫瘤學(xué)分冊(cè));1978年01期

10 章靜波;薛新華;;細(xì)胞松弛菌素D對(duì)EC_a-109細(xì)胞的作用[J];解剖學(xué)報(bào);1979年01期

中國(guó)重要會(huì)議論文全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前10條

1 劉令九;趙小琳;岳立廣;徐艷玲;李淑焱;侯麗娟;隋紅;姜崴;謝寶生;李勇;劉兵;李海濱;;細(xì)胞工廠培養(yǎng)人胚肺二倍體細(xì)胞制備凍干甲型肝炎減毒活疫苗[A];2011中國(guó)生物制品年會(huì)暨第十一次全國(guó)生物制品學(xué)術(shù)研討會(huì)論文集[C];2011年

2 宋征;;應(yīng)用Bhas42細(xì)胞試驗(yàn)檢測(cè)22個(gè)腫瘤促長(zhǎng)基因標(biāo)志物[A];2013年（第三屆）中國(guó)藥物毒理學(xué)年會(huì)暨藥物非臨床安全性評(píng)價(jià)研究論壇論文摘要[C];2013年

3 谷彬;張輝;喻澤蘭;;依地福新對(duì)Jurkat細(xì)胞生長(zhǎng)抑制機(jī)制的研究[A];2009醫(yī)學(xué)前沿論壇暨第十一屆全國(guó)腫瘤藥理與化療學(xué)術(shù)會(huì)議論文集[C];2009年

4 武冬梅;李秀娥;葛莉亞;袁星;;雙酚-A對(duì)MCF-7細(xì)胞伏安行為的影響[A];第五屆全國(guó)環(huán)境化學(xué)大會(huì)摘要集[C];2009年

5 李曉飛;呂超;吳小榮;韓慶玲;王杰;易宗春;;鉛和鋁離子對(duì)K562細(xì)胞紅系分化的影響[A];全國(guó)生化/工業(yè)與衛(wèi)生毒理學(xué)學(xué)術(shù)會(huì)議論文集[C];2010年

6 宋為民;郭波;;復(fù)方甘草酸苷對(duì)HaCaT細(xì)胞表達(dá)AQP3的影響[A];2011全國(guó)中西醫(yī)結(jié)合皮膚性病學(xué)術(shù)會(huì)議論文匯編[C];2011年

7 劉魯明;錢(qián)華;陳震;林勝友;黃挺;;參麥注射液對(duì)腫瘤細(xì)胞環(huán)核甘酸的影響[A];全國(guó)中醫(yī)藥科研與教學(xué)改革研討會(huì)論文集[C];2000年

8 張雪玲;糜漫天;李等松;韋娜;張乾勇;楊志祥;;Lovastatin對(duì)HL-60細(xì)胞HMG-CoA還原酶mRNA表達(dá)及細(xì)胞增殖功能的影響[A];中國(guó)營(yíng)養(yǎng)學(xué)會(huì)特殊營(yíng)養(yǎng)第五屆學(xué)術(shù)會(huì)議論文摘要匯編[C];2002年

9 房佰俊;廖聯(lián)明;楊少光;史明霞;趙春華;;胎兒骨髓源原始干細(xì)胞分離純化及其生物學(xué)特性的初步研究[A];第九屆全國(guó)實(shí)驗(yàn)血液學(xué)會(huì)議論文摘要匯編[C];2003年

10 李曉軍;朱傳東;汪萍;賈麗;陳芳芳;夏欣一;陳龍邦;;人Id3基因在A549細(xì)胞中的表達(dá)及對(duì)細(xì)胞生長(zhǎng)功能的研究[A];第六屆全國(guó)免疫學(xué)學(xué)術(shù)大會(huì)論文集[C];2008年

中國(guó)重要報(bào)紙全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前10條

1 記者 吳春燕 通訊員 寧習(xí)源 吳劍鵬;人類(lèi)情緒可影響干細(xì)胞生長(zhǎng)[N];光明日?qǐng)?bào);2014年

2 馮衛(wèi)東;老化干細(xì)胞可轉(zhuǎn)變成年輕干細(xì)胞[N];科技日?qǐng)?bào);2012年

3 常麗君;科學(xué)家闡明核內(nèi)周期運(yùn)作機(jī)制[N];科技日?qǐng)?bào);2011年

4 本版編輯邋杜華斌 邰舉 毛文波 顧鋼 陳超 何屹 毛黎;2007年世界科技發(fā)展回顧(六)[N];科技日?qǐng)?bào);2008年

5 通訊員 李靜;廈大教授發(fā)現(xiàn)細(xì)胞防癌“玄機(jī)”[N];廈門(mén)日?qǐng)?bào);2009年

6 永誠(chéng);美發(fā)現(xiàn)控制細(xì)胞生長(zhǎng)的蛋白質(zhì)[N];中國(guó)醫(yī)藥報(bào);2000年

7 記者 張孟軍;加找到刺激干細(xì)胞生長(zhǎng)分子[N];科技日?qǐng)?bào);2001年

8 張?zhí)锟?干細(xì)胞研究精彩紛呈[N];中國(guó)醫(yī)藥報(bào);2011年

9 邵薇/編譯;T細(xì)胞的非凡能力[N];北京科技報(bào);2003年

10 經(jīng)天;控制細(xì)胞生長(zhǎng)的蛋白質(zhì)[N];中藥事業(yè)報(bào);2000年

中國(guó)博士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前10條

1 蔣淵;缺氧肝癌細(xì)胞中HIF-1和NF-κB的相互作用及其分子機(jī)制的研究[D];第三軍醫(yī)大學(xué);2015年

2 張廣;肝星狀細(xì)胞在肝癌細(xì)胞惡性行為中的作用及機(jī)制研究[D];南京醫(yī)科大學(xué);2015年

3 付托;活性氧族在CHO細(xì)胞補(bǔ)料批次培養(yǎng)中的作用、機(jī)制及調(diào)控研究[D];第二軍醫(yī)大學(xué);2016年

4 彭林;重組凝血因子VII在CHO細(xì)胞中的高效表達(dá)[D];江南大學(xué);2017年

5 楊小超;陽(yáng)離子配體修飾的納米金用于細(xì)胞轉(zhuǎn)運(yùn)和微囊自組裝研究[D];重慶大學(xué);2010年

6 葉玲玲;基于生物素誘導(dǎo)表達(dá)系統(tǒng)的HEK293細(xì)胞多基因代謝工程改造[D];中國(guó)人民解放軍軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院;2011年

7 梁國(guó)斌;產(chǎn)朊假絲酵母生產(chǎn)谷胱甘肽過(guò)程控制與優(yōu)化[D];江南大學(xué);2008年

8 楊海虹;鈣池操縱性鈣內(nèi)流在人肺腺癌A549細(xì)胞中的研究[D];南方醫(yī)科大學(xué);2012年

9 常玉娟;基于Nrf2/ARE通路辛開(kāi)苦降方胃康寧對(duì)人胃粘膜上皮細(xì)胞SOD2、GSTP1相關(guān)調(diào)控機(jī)制的研究[D];北京中醫(yī)藥大學(xué);2015年

10 楊麗君;人Fcα/μR的表達(dá)與功能的初步研究[D];中國(guó)協(xié)和醫(yī)科大學(xué);2008年

中國(guó)碩士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前10條

1 柯自立;硫酸鎂對(duì)6-羥基多巴胺損傷的SH-SY5Y細(xì)胞的保護(hù)作用[D];福建醫(yī)科大學(xué);2015年

2 李婷婷;細(xì)胞穿透肽VP22對(duì)抑癌蛋白PTEN體外抗腫瘤作用影響的研究[D];川北醫(yī)學(xué)院;2015年

3 王靜;環(huán)氧化物酶抑制劑NS-398聯(lián)合奧沙利鉑對(duì)宮頸癌Hela細(xì)胞增殖和凋亡的影響[D];河北醫(yī)科大學(xué);2015年

4 鄭祿祿;番茄紅素對(duì)轉(zhuǎn)染SOD1-G93A的PC12細(xì)胞線粒體的保護(hù)作用[D];河北醫(yī)科大學(xué);2015年

5 宋晨源;氯化銨對(duì)人正常肝細(xì)胞系changliver中二氫乳清酸脫氫酶表達(dá)的影響[D];鄭州大學(xué);2015年

6 張莉;白藜蘆醇體外抑制腸道病毒71型的作用機(jī)制研究[D];蘇州大學(xué);2015年

7 高華武;富硒芪云抗腫瘤作用及其機(jī)制的實(shí)驗(yàn)研究[D];安徽中醫(yī)藥大學(xué);2015年

8 宋加奎;丹參對(duì)人胃癌SGC-7901細(xì)胞化療敏感性的影響[D];安徽中醫(yī)藥大學(xué);2015年

9 許雅鑫;尼古丁對(duì)NCI-H1975和NCI-H460細(xì)胞促進(jìn)增殖作用及對(duì)PI3K/Akt通路的影響研究[D];山西醫(yī)科大學(xué);2015年

10 高娜;加減駐景方含藥血清對(duì)二氯化鈷誘導(dǎo)后ARPE-19細(xì)胞表達(dá)VEGF及HIF-1α的影響[D];青海大學(xué);2015年

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本文編號(hào)：590698