本文關鍵詞：PTZ誘導癲癇急性發(fā)作對大鼠大腦神經(jīng)元F-actin、Calponin3和ROCK2表達水平變化的影響

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【摘要】：目的： 探討戊四氮（PTZ）誘發(fā)的大鼠癲癇急性發(fā)作對大腦F-actin、Calponin3、ROCK2表達及其磷酸化水平的影響，闡明癲癇急性發(fā)作期阻斷F-actin異常解聚、觸發(fā)F-actin重構(gòu)的可能機制。 方法： 實驗采用3周齡Wistar幼鼠，設對照組和癲癇組。癲癇組動物經(jīng)腹腔注射PTZ60mg/kg建立癲癇急性發(fā)作模型，觀察動物行為改變，并記錄腦電圖判斷模式是否成功。造模成功的動物根據(jù)發(fā)作后時間隨機分為4組：1d組、2d組、3d組和7d組，分別在癲癇急性發(fā)作后的相應時間點處死動物取材。利用Alexa-488標記的phalloidin進行熒光染色觀察動物大腦神經(jīng)元內(nèi)細胞骨架F-actin；利用免疫熒光染色觀察大腦神經(jīng)元中Calponin3和ROCK2分布；利用Western blot檢測海馬中Calponin3、ROCK2及磷酸化ROCK2的表達水平。 結(jié)果： 1.腹腔注射PTZ60mg/kg后，幼鼠行為變化達到Racine分級4-5級，EEG表現(xiàn)出多種形式的癲癇樣波。 2. phalloidin熒光標記顯示：與對照組相比，癲癇急性發(fā)作1d后，大鼠樹突棘密集的海馬CA1區(qū)、CA3區(qū)中F-actin熒光強度降低（P0.05），點狀聚集結(jié)構(gòu)消失。 3.免疫熒光染色結(jié)果顯示：對照組Calponin3在神經(jīng)元胞質(zhì)彌漫內(nèi)分布，而癲癇急性發(fā)作7d后神經(jīng)元內(nèi)Calponin3則聚集在細胞皮質(zhì)（即細胞膜周邊的薄層細胞質(zhì)）；對照組ROCK2僅在少量神經(jīng)元突起內(nèi)分布，而癲癇急性發(fā)作7d后大量神經(jīng)元內(nèi)胞體和突起內(nèi)均可見ROCK2分布。 4. Western blot結(jié)果顯示：與對照組相比，癲癇組各時間點的Calponin3表達水平顯著降低（P0.05），但是隨著時間延長一周內(nèi)逐漸升高并趨向正常水平。與對照組相比，癲癇組ROCK2的表達水平從癲癇急性發(fā)作后3d開始顯著增加并持續(xù)至造模后7d（P0.05）；磷酸化ROCK2水平則從癲癇急性發(fā)作后1d就開始顯著增加并持續(xù)到7d（P0.05），隨著時間延長逐漸降低。 結(jié)論： 利用腹腔注射PTZ60mg/kg成功建立大鼠癲癇急性發(fā)作模型。 PTZ誘導大鼠癲癇急性發(fā)作導致F-actin異常解聚，同時激活RhoA/ROCK2信號途徑，上調(diào)ROCK2和Calponin3蛋白表達水平。依賴RhoA/ROCK2信號途徑的Calponin3磷酸化可能是防止F-actin進一步異常解聚并觸發(fā)F-actin重構(gòu)的可能機制。
【關鍵詞】：癲癇 戊四氮 絲狀肌動蛋白 Calponin3 ROCK2
【學位授予單位】：吉林大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2015
【分類號】：R742.1
【目錄】：

• 前言4-5
• 中文摘要5-7
• abstract7-12
• 中英文縮略詞對照表12-13
• 第1章 緒論13-14
• 第2章 綜述14-23
• 2.1 癲癇腦組織的病理學改變14-16
• 2.1.1 癲癇腦組織的基本病理學改變14
• 2.1.2 不同類型癲癇的組織病理學特點14-16
• 2.2 F-ACTIN 與癲癇樹突棘缺失和重建的關系16-18
• 2.2.1 F-actin 是重要的細胞骨架成分16
• 2.2.2 F-actin 異常與癲癇病程中樹突棘缺失和重建密切相關16-18
• 2.3 F-ACTIN 結(jié)合蛋白 CALPONIN 3 與癲癇密切相關18-19
• 2.4 CALPONIN 3 的磷酸化依賴 RHOA/ROCK 2 信號途徑19-23
• 第3章 建立 PTZ 誘導的幼鼠癲癇急性發(fā)作模型23-27
• 3.1 材料和方法23-24
• 3.1.1 材料23
• 3.1.2 方法23-24
• 3.2 結(jié)果24-25
• 3.2.1 行為學改變24
• 3.2.2 腦電圖變化24-25
• 3.3 討論25-27
• 第4章 癲癇急性發(fā)作模型大鼠大腦神經(jīng)元 F-ACTIN、CALPONIN3 和ROCK2 表達水平變化27-41
• 4.1 材料27-28
• 4.1.1 動物27
• 4.1.2 試劑27
• 4.1.3 儀器27-28
• 4.2 方法28-32
• 4.2.1 分組及給藥28
• 4.2.2 取材28
• 4.2.3 熒光標記 F-actin28
• 4.2.4 免疫熒光檢測28-29
• 4.2.5 Western Blot 檢測29-32
• 4.2.6 統(tǒng)計學處理32
• 4.3 結(jié)果32-38
• 4.3.1 大腦皮層和海馬神經(jīng)元中細胞骨架成分 F-actin 異常解聚32-34
• 4.3.2 大腦皮層和海馬神經(jīng)元內(nèi) Calponin3 重新分布34-35
• 4.3.3 大腦皮層和海馬神經(jīng)元中 ROCK2 增多35-36
• 4.3.4 海馬Calponin3、ROCK2 和磷酸化ROCK2 蛋白的表達水平改變36-38
• 4.4 討論38-41
• 第5章 結(jié)論41-42
• 參考文獻42-53
• 作者簡介及在學期間所取得的科研成果53-55
• 致謝55

【參考文獻】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前4條

1 張軍;黃曉元;王凌峰;;調(diào)寧蛋白的研究進展與展望[J];中華臨床醫(yī)師雜志(電子版);2013年02期

2 肖保國;;Rho激酶抑制劑的研究現(xiàn)狀及其在神經(jīng)系統(tǒng)疾病中的應用前景[J];重慶醫(yī)科大學學報;2008年S1期

3 劉學伍,于美娟,遲兆富,吳偉;癲癇發(fā)作神經(jīng)組織病理學研究進展[J];山東醫(yī)藥;2002年14期

4 劉學伍,遲兆富,潘姝,吳偉;兒童難治性癲癇引起智力低下的機制及預后干預[J];腦與神經(jīng)疾病雜志;2001年06期

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本文編號：587723