本文關(guān)鍵詞：HER2基因?qū)盒阅X膜瘤IOMM-Lee細(xì)胞株增殖和侵襲的影響

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【摘要】：目的:觀察HER2基因是否影響惡性腦膜瘤細(xì)胞的增殖、侵襲,探討HER2是否通過(guò)MAPK信號(hào)通路發(fā)揮作用。方法:1、通過(guò)病毒感染分別將沉默和過(guò)表達(dá)HER2基因質(zhì)粒轉(zhuǎn)染至惡性腦膜瘤IOMM-Lee細(xì)胞株中。實(shí)驗(yàn)分組:第一組:空白組(Blank);第二組:沉默陰性對(duì)照組(NC-sh);第三組:沉默HER2基因組(HER2-sh);第四組:過(guò)表達(dá)陰性對(duì)照組(NC-ox);第五組:過(guò)表達(dá)HER2基因組(HER2-ox)。使用q-PCR和Werstern blot檢測(cè)各組細(xì)胞HER2 m RNA和蛋白表達(dá)水平。2、MTT、EdU法檢測(cè)各組細(xì)胞的生長(zhǎng)增殖情況;Transwell小室侵襲法、細(xì)胞劃痕實(shí)驗(yàn)法檢測(cè)各組細(xì)胞侵襲、遷移能力;流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)各組細(xì)胞的細(xì)胞周期、凋亡變化。3、Western blot檢測(cè)各組細(xì)胞ERK1/2、P-ERK1/2、JNK、P-JNK、ERK5、P-ERK5、P38、P-P38、ras蛋白的表達(dá)。4、體內(nèi)裸鼠成瘤實(shí)驗(yàn)檢測(cè)各組細(xì)胞增殖、侵襲的變化。結(jié)果:1、慢病毒轉(zhuǎn)染成功,HER2在mRNA和蛋白水平達(dá)到分組要求。2、沉默HER2組細(xì)胞增殖能力減弱,侵襲、遷移能力降低;過(guò)表達(dá)HER2組細(xì)胞增殖能力增強(qiáng),侵襲、遷移能力提高。HER2基因通過(guò)影響細(xì)胞周期中的G0/G1-S的變化而起作用;沉默HER2組腦膜瘤細(xì)胞凋亡率增加,過(guò)表達(dá)HER2組腦膜瘤細(xì)胞凋亡率降低。3、沉默和過(guò)表達(dá)HER2基因可影響惡性腦膜瘤細(xì)胞中MAPK信號(hào)通路ERK1/2、P-ERK1/2、JNK、P-JNK、ERK5、P-ERK5、ras蛋白的表達(dá),差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義,但對(duì)P38、P-P38蛋白的表達(dá)影響不大,差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。4、裸鼠成瘤實(shí)驗(yàn),沉默HER2組,裸鼠成瘤能力減弱,瘤體增殖速度減慢;過(guò)表達(dá)HER2組,裸鼠成瘤能力增強(qiáng),瘤體增殖速度加快,細(xì)胞侵襲、遷移能力增強(qiáng)。結(jié)論:1、HER2可促進(jìn)惡性腦膜瘤細(xì)胞的增殖和侵襲;2、HER2基因可能通過(guò)MAPK信號(hào)通路影響惡性腦膜瘤細(xì)胞的生長(zhǎng)、侵襲功能。
【關(guān)鍵詞】：惡性腦膜瘤 HER2 MAPK 增殖 侵襲
【學(xué)位授予單位】：南昌大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號(hào)】：R739.45
【目錄】：

• 摘要3-5
• ABSTRACT5-10
• 中英文縮略詞表10-13
• 第1章 引言13-15
• 第2章 體外實(shí)驗(yàn)觀察HER2基因?qū)盒阅X膜瘤IOMM-Lee細(xì)胞株增殖和侵襲的影響15-53
• 2.1 材料與方法15-38
• 2.1.1 惡性腦膜瘤細(xì)胞培養(yǎng)15-16
• 2.1.2 沉默和過(guò)表達(dá)HER2基因質(zhì)粒構(gòu)建16-22
• 2.1.3 慢病毒包裝22-24
• 2.1.4 慢病毒感染24-25
• 2.1.5 流式細(xì)胞儀檢測(cè)細(xì)胞轉(zhuǎn)染效率25-26
• 2.1.6 q-PCR檢測(cè)各組腦膜瘤細(xì)胞HER2 mRNA的表達(dá)情況26-29
• 2.1.7 Western blot檢測(cè)各組腦膜瘤細(xì)胞HER2、ERK1/2、P-ERK1/2、JNK、P-JNK、ERK5、P-ERK5、P38、P38蛋白表達(dá)情況29-34
• 2.1.8 MTT、EdU標(biāo)記法、細(xì)胞周期和凋亡實(shí)驗(yàn)檢測(cè)各組細(xì)胞生長(zhǎng)增殖、周期、凋亡情況34-36
• 2.1.9 Tanswell小室侵襲和細(xì)胞劃痕實(shí)驗(yàn)檢測(cè)細(xì)胞侵襲、遷移情況36-37
• 2.1.10 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理與分析37-38
• 2.2 結(jié)果38-53
• 2.2.1 沉默HER2基因質(zhì)粒測(cè)序38-40
• 2.2.2 過(guò)表達(dá)HER2基因質(zhì)粒測(cè)序40-42
• 2.2.3 慢病毒轉(zhuǎn)染惡性腦膜瘤細(xì)胞MOI值的確定及轉(zhuǎn)染率的測(cè)定42-44
• 2.2.4 q-PCR檢測(cè)各組細(xì)胞HER2 mRNA的表達(dá)情況44-45
• 2.2.5 Western blot檢測(cè)各組細(xì)胞HER2蛋白的表達(dá)情況45-46
• 2.2.6 MTT檢測(cè)各組細(xì)胞生長(zhǎng)曲線46
• 2.2.7 EdU標(biāo)記法檢測(cè)細(xì)胞DNA增殖情況46-47
• 2.2.8 Transwell小室侵襲法檢測(cè)各組細(xì)胞侵襲能力47-48
• 2.2.9 細(xì)胞劃痕實(shí)驗(yàn)檢測(cè)各組細(xì)胞遷移能力48-49
• 2.2.10 流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)細(xì)胞周期和凋亡變化49-51
• 2.2.11 Western blot檢測(cè)各組細(xì)胞MAPK信號(hào)通路中主要蛋白表達(dá)水平51-53
• 第3章 體內(nèi)實(shí)驗(yàn)觀察HER2基因?qū)盒阅X膜瘤IOMM-Lee細(xì)胞株增殖和侵襲的影響53-60
• 3.1 材料與方法53-56
• 3.1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物53
• 3.1.2 主要實(shí)驗(yàn)試劑53-54
• 3.1.3 主要實(shí)驗(yàn)儀器54
• 3.1.4 裸鼠飼養(yǎng)準(zhǔn)備54-55
• 3.1.5 惡性腦膜瘤細(xì)胞裸鼠接種55
• 3.1.6 免疫組織化學(xué)法檢測(cè)各組鼠瘤HER2表達(dá)情況55-56
• 3.1.7 結(jié)果判定56
• 3.1.8 數(shù)據(jù)處理、統(tǒng)計(jì)學(xué)分析56
• 3.2 結(jié)果56-60
• 3.2.1 荷瘤裸鼠生長(zhǎng)情況56-57
• 3.2.2 荷瘤裸鼠的腫瘤生長(zhǎng)曲線57-58
• 3.2.3 荷瘤裸鼠的瘤重和抑瘤率58-59
• 3.2.4 免疫組織化學(xué)法檢測(cè)各組腫瘤HER2蛋白表達(dá)水平59-60
• 第4章 討論60-67
• 4.1 尋找新途徑治療惡性腦膜瘤的必要性60
• 4.2 HER2在腦膜瘤中的研究現(xiàn)狀60-61
• 4.3 沉默HER2基因和過(guò)表達(dá)HER2基因惡性腦膜瘤穩(wěn)定細(xì)胞株模型的建立61-62
• 4.4 HER2基因?qū)盒阅X膜瘤增殖的影響62-63
• 4.5 HER2基因?qū)盒阅X膜瘤侵襲的影響63-64
• 4.6 HER2在惡性腦膜瘤中發(fā)揮作用的可能機(jī)制64-65
• 4.7 存在的問(wèn)題與展望65-67
• 第5章 結(jié)論67-68
• 致謝68-69
• 參考文獻(xiàn)69-73
• 攻讀學(xué)位期間的研究成果73-74
• 綜述74-81
• 參考文獻(xiàn)79-81

【參考文獻(xiàn)】

中國(guó)期刊全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前4條

1 王淳良;梅金紅;王珊珊;徐姍;徐林林;熊一峰;;HER2狀態(tài)與腦膜瘤分級(jí)及復(fù)發(fā)的相關(guān)性[J];中華病理學(xué)雜志;2010年03期

2 楊玄勇;王淳良;梅金紅;徐姍;王珊珊;;熒光原位雜交檢測(cè)腦膜瘤中HER2基因狀態(tài)[J];中華實(shí)驗(yàn)外科雜志;2009年11期

3 雷宇華;廖崢嶸;趙娟;王忠海;;認(rèn)識(shí)小干擾RNA、微RNA和RNA干擾[J];生物學(xué)教學(xué);2009年08期

4 王珊珊;梅金紅;王淳良;徐姍;徐林林;熊一峰;張寶紅;;HER2、Ki-67、TK1蛋白在腦膜瘤中的表達(dá)[J];江西醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào);2009年04期

中國(guó)碩士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前1條

1 胡雪梅;HER-2/neu小分子干擾RNA對(duì)腦膜瘤細(xì)胞增殖活性的影響[D];南昌大學(xué)醫(yī)學(xué)院;2013年

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本文編號(hào)：564018