本文關(guān)鍵詞：靶向RWDD3基因shRNA慢病毒載體的構(gòu)建及功能鑒定

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【摘要】：目的構(gòu)建RWD結(jié)構(gòu)小泛素化增強(qiáng)子(RWDD3)shRNA慢病毒表達(dá)載體,為探討RNA干擾技術(shù)抑制人腦膠質(zhì)瘤細(xì)胞RWDD3基因的相關(guān)研究奠定基礎(chǔ)。方法設(shè)計(jì)RWDD3的3條siRNA的靶點(diǎn)序列,合成含干擾序列的雙鏈DNA發(fā)卡結(jié)構(gòu)shRNA,分別與雙酶切后的載體連接,構(gòu)建3種重組質(zhì)粒pGC-LV-shRNA1、pGC-LV-shRNA2和pGC-LV-shRNA3,并轉(zhuǎn)化于DH5α感受態(tài)細(xì)胞,提取陽性克隆質(zhì)粒測(cè)序,轉(zhuǎn)染293T細(xì)胞,生產(chǎn)慢病毒顆粒,并檢測(cè)病毒滴度。將3種重組慢病毒及陰性對(duì)照病毒分別感染人腦膠質(zhì)瘤細(xì)胞U251,實(shí)時(shí)定量PCR和Western blot分別檢測(cè)RWDD3mRNA和蛋白的沉默效果。結(jié)果測(cè)序結(jié)果證實(shí)3種慢病毒載體均包裝成功,滴度分別為5×10~(11) TU/L、4×10~(11) TU/L、5×10~(11) TU/L。感染U251后,RWDD3mRNA及蛋白的表達(dá)量均較陰性對(duì)照組和未感染組明顯降低(P0.05);其中以LV-RWDD3-shRNA-1作用顯著,mRNA表達(dá)下調(diào)79.2%,蛋白表達(dá)下調(diào)68.2%(P0.05);而陰性感染對(duì)照組和未感染組相比差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。結(jié)論成功構(gòu)建3種RWDD3shRNA慢病毒表達(dá),可有效下調(diào)U251細(xì)胞RWDD3mRNA和蛋白的表達(dá),其為進(jìn)一步研究以RWDD3為靶點(diǎn)的腦膠質(zhì)瘤基因治療提供穩(wěn)定轉(zhuǎn)染細(xì)胞的載體奠定基礎(chǔ)。
【作者單位】： 南昌大學(xué)第二附屬醫(yī)院神經(jīng)外科;
【關(guān)鍵詞】： 腦膠質(zhì)瘤 RWDD 慢病毒 shRNA
【基金】：江西省自然科學(xué)基金計(jì)劃項(xiàng)目(No.20132BAB205043) 江西省教育廳科學(xué)技術(shù)研究項(xiàng)目(No.GJJ14066)~~
【分類號(hào)】：R739.41;R3416
【正文快照】： 腦膠質(zhì)瘤是中樞神經(jīng)系統(tǒng)最常見的原發(fā)性腫瘤,系統(tǒng)Lentivector　Packaging　Kit購自上海吉?jiǎng)P基因具有無控性增殖、侵襲性生長(zhǎng)、易復(fù)發(fā)、預(yù)后極差的特化學(xué)公司;限制性內(nèi)切酶AgeⅠ、EcoRⅠ和連接試劑點(diǎn)[1-2]。其本質(zhì)上是一種多基因異常疾病,由于原癌盒購自NEB公司;質(zhì)粒提取試劑盒

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中國(guó)期刊全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 李振宇;慢病毒載體構(gòu)建及結(jié)構(gòu)優(yōu)化[J];國(guó)外醫(yī)學(xué)(分子生物學(xué)分冊(cè));2002年05期

2 主鴻鵠;慢病毒載體及其對(duì)低分裂潛能細(xì)胞的基因轉(zhuǎn)移[J];白血病.淋巴瘤;2003年01期

3 楊宇娟,裴冬生,徐開林,潘秀英,何徐彭,張成靜;survivin反義RNA的克隆及慢病毒載體的構(gòu)建[J];徐州醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào);2005年06期

4 焦伊勝;王永來;張淑蘭;王桂玲;;凋亡蛋白抑制因子Livin shRNA慢病毒載體的構(gòu)建與鑒定[J];中國(guó)現(xiàn)代醫(yī)學(xué)雜志;2008年24期

5 褚波;黃雪峰;唐云明;;慢病毒載體及其應(yīng)用進(jìn)展[J];生物醫(yī)學(xué)工程學(xué)雜志;2008年01期

6 毛穎佳;鄭源強(qiáng);石艷春;;慢病毒載體及其應(yīng)用的研究進(jìn)展[J];中國(guó)生物制品學(xué)雜志;2009年02期

7 曾錦芳;王少元;;慢病毒載體及其在血液病研究中的應(yīng)用進(jìn)展[J];醫(yī)學(xué)綜述;2011年08期

8 馬強(qiáng);舒文;李明;吳英松;;一種新型慢病毒載體制備體系的改進(jìn)[J];熱帶醫(yī)學(xué)雜志;2011年08期

9 張薇;趙志英;張坤;;慢病毒載體及應(yīng)用研究進(jìn)展[J];包頭醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào);2011年05期

10 何佳平;方_g聃;張帆;孫鳳強(qiáng);王娟;張敬之;;慢病毒載體轉(zhuǎn)錄通讀率檢測(cè)方法的建立[J];生物工程學(xué)報(bào);2013年07期

中國(guó)重要會(huì)議論文全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 馮東福;畢永延;陳二濤;王永志;楚勝華;;小鼠pLVX-Wnt3a-IRES-ZsGreen1慢病毒載體的構(gòu)建及神經(jīng)干細(xì)胞轉(zhuǎn)染[A];中華醫(yī)學(xué)會(huì)神經(jīng)外科學(xué)分會(huì)第九次學(xué)術(shù)會(huì)議論文匯編[C];2010年

2 李振宇;徐開林;潘秀英;陳香梅;鹿群先;主鴻鵠;李慧;陳海英;何徐彭;;慢病毒載體的構(gòu)建及其包裝細(xì)胞系的建立[A];中華醫(yī)學(xué)會(huì)第八次全國(guó)血液學(xué)學(xué)術(shù)會(huì)議論文匯編[C];2004年

3 王海彬;;雌激素相關(guān)受體α基因超表達(dá)慢病毒載體的構(gòu)建[A];中華醫(yī)學(xué)會(huì)第六次全國(guó)骨質(zhì)疏松和骨礦鹽疾病學(xué)術(shù)會(huì)議暨中華醫(yī)學(xué)會(huì)骨質(zhì)疏松和骨礦鹽疾病分會(huì)成立十周年論文匯編[C];2011年

4 張曉宇;秦宜德;王超;張文曉;王巍;何曉光;;牛乳鐵蛋白肽基因的慢病毒載體構(gòu)建[A];華東六省一市生物化學(xué)與分子生物學(xué)會(huì)2010年學(xué)術(shù)交流會(huì)論文集[C];2010年

5 李振宇;徐開林;潘秀英;鹿群先;;慢病毒載體的構(gòu)建、改造及其包裝細(xì)胞系的建立[A];2005年華東六省一市血液病學(xué)學(xué)術(shù)會(huì)議暨浙江省血液病學(xué)學(xué)術(shù)年會(huì)論文匯編[C];2005年

6 王玉蘭;任振華;;感染食蟹猴骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞的病毒載體研究[A];第十三次全國(guó)臨床藥理學(xué)學(xué)術(shù)大會(huì)論文匯編[C];2012年

7 黃新鳳;葉金波;蔣英芝;任曉虎;黃培武;劉建軍;;SET shRNA慢病毒載體的構(gòu)建及其在肝細(xì)胞中的表達(dá)鑒定[A];中國(guó)科協(xié)第十四屆年會(huì)第十七分會(huì)場(chǎng)環(huán)境危害與健康防護(hù)研討會(huì)論文集[C];2012年

8 楊龍江;侯健;;構(gòu)建含有人血小板因子4和其片段的慢病毒載體[A];第12屆全國(guó)實(shí)驗(yàn)血液學(xué)會(huì)議論文摘要[C];2009年

9 李振宇;徐開林;潘秀英;鹿群先;孫海英;主鴻鵠;陳香梅;何徐彭;;慢病毒載體的構(gòu)建、改造及其包裝細(xì)胞系的建立[A];第九屆全國(guó)實(shí)驗(yàn)血液學(xué)會(huì)議論文摘要匯編[C];2003年

10 劉峰;肖興鵬;田玉科;;大鼠蛋白激酶Cγ可控shRNA慢病毒的構(gòu)建與鑒定[A];2011年全國(guó)醫(yī)藥學(xué)術(shù)論壇交流會(huì)暨臨床藥學(xué)與藥學(xué)服務(wù)研究進(jìn)展培訓(xùn)班論文集[C];2011年

中國(guó)博士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 原莉莉;慢病毒載體介導(dǎo)的HSP47 siRNA抑制PVR的研究[D];天津醫(yī)科大學(xué);2015年

2 楊玉芳;用LMP1構(gòu)建重組慢病毒載體及建立轉(zhuǎn)基因小鼠模型[D];第一軍醫(yī)大學(xué);2004年

3 徐世永;慢病毒載體法高效轉(zhuǎn)基因雞制備技術(shù)研究[D];南京農(nóng)業(yè)大學(xué);2007年

4 王玉梅;人PTEN基因RNAi和RESC慢病毒載體的構(gòu)建及其功能的相關(guān)性研究[D];鄭州大學(xué);2011年

5 吳福國(guó);表達(dá)Cdc42-shRNA重組慢病毒載體的構(gòu)建及其對(duì)膀胱癌細(xì)胞影響的實(shí)驗(yàn)研究[D];蘭州大學(xué);2007年

6 馬強(qiáng);腫瘤翻譯調(diào)控蛋白（TCTP）對(duì)結(jié)腸癌細(xì)胞LoVo的生物學(xué)特性影響及安全型慢病毒載體構(gòu)建探索[D];南方醫(yī)科大學(xué);2009年

7 郝又國(guó);攜帶Rab9 cDNA的慢病毒對(duì)C型Niemann-Pick病小鼠的神經(jīng)保護(hù)作用[D];華中科技大學(xué);2009年

8 楊歡;慢病毒介導(dǎo)中國(guó)人產(chǎn)甲酸草酸桿菌中草酸分解基因FRC和OXC轉(zhuǎn)染肝干細(xì)胞的實(shí)驗(yàn)研究[D];華中科技大學(xué);2011年

9 張文卿;HCMV pp150表達(dá)及E1-pp65慢病毒載體刺激T細(xì)胞免疫應(yīng)答的研究[D];山東大學(xué);2006年

10 林元邦;改進(jìn)型復(fù)制缺陷性腺病毒（HDAd）轉(zhuǎn)基因載體特異性及穩(wěn)定性研究[D];天津醫(yī)科大學(xué);2012年

中國(guó)碩士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 熊冬蘭;白細(xì)胞介素-18基因慢病毒表達(dá)載體抗肺癌作用的研究[D];福建醫(yī)科大學(xué);2015年

2 許媛;TWEAK慢病毒載體的構(gòu)建及在肝癌細(xì)胞中的表達(dá)與功能初步研究[D];川北醫(yī)學(xué)院;2015年

3 鄧乃剛;p.93K-T QDPR基因慢病毒過表達(dá)載體的構(gòu)建[D];河北聯(lián)合大學(xué);2014年

4 徐小隔;Let-7d慢病毒載體對(duì)體外骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞向神經(jīng)細(xì)胞分化的影響[D];鄭州大學(xué);2015年

5 王碩;慢病毒介導(dǎo)BMPR Ⅱ基因沉默對(duì)人肝癌移植瘤生長(zhǎng)的影響[D];南昌大學(xué)醫(yī)學(xué)院;2015年

6 操儲(chǔ)云;4個(gè)沉默雞Ii基因慢病毒載體的構(gòu)建及其效果比較[D];安徽農(nóng)業(yè)大學(xué);2014年

7 魏寇準(zhǔn);肝素酶過表達(dá)慢病毒載體的構(gòu)建及鑒定[D];皖南醫(yī)學(xué)院;2014年

8 蘇一鳴;構(gòu)建過表達(dá)神經(jīng)生長(zhǎng)因子β亞基基因的慢病毒載體的實(shí)驗(yàn)研究[D];福建醫(yī)科大學(xué);2010年

9 高強(qiáng);慢病毒載體包裝細(xì)胞系的建立[D];沈陽藥科大學(xué);2006年

10 李雄;rPNCE-Lenti1259慢病毒載體的構(gòu)建及轉(zhuǎn)染人類胚胎干細(xì)胞[D];中南大學(xué);2009年

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