發(fā)布時(shí)間：2017-07-06 16:00

  本文關(guān)鍵詞：魯索利替尼對(duì)實(shí)驗(yàn)性自身免疫性腦脊髓炎小鼠炎性因子表達(dá)及調(diào)節(jié)性T細(xì)胞的影響

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【摘要】：目的:多發(fā)性硬化(multiple sclerosis,MS)是一種以中樞神經(jīng)系統(tǒng)(central nervous system,CNS)白質(zhì)脫髓鞘為主要病理特點(diǎn)的慢性炎性自身免疫性疾病�，F(xiàn)公認(rèn)小鼠實(shí)驗(yàn)性自身免疫性腦脊髓炎(experimental autoimmune encephalomyelitis,EAE)為研究MS的動(dòng)物模型。目前關(guān)于MS的發(fā)病機(jī)制尚未完全明確,CD4+T淋巴細(xì)胞介導(dǎo)的對(duì)自身髓鞘抗原產(chǎn)生的免疫應(yīng)答為其可能的發(fā)病機(jī)制。被激活的免疫細(xì)胞產(chǎn)生大量的炎性細(xì)胞因子進(jìn)入血腦屏障(Blood brain barrier,BBB),破壞神經(jīng)元和少突膠質(zhì)細(xì)胞,這些炎性細(xì)胞因子包括IL-12、IL-6、IL-17、IL-21、IL-23等。近年研究發(fā)現(xiàn)激酶/信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)及轉(zhuǎn)錄激活子(Janus Kinase/Signal Transducer and Activator of Transcription,JAK/STAT)通路調(diào)節(jié)這些細(xì)胞因子的生物學(xué)活動(dòng),為調(diào)控免疫應(yīng)答所必需。JAK/STAT通路的失調(diào)可以導(dǎo)致很多自身免疫性疾病,其中包括MS/EAE。在MS/EAE中,由于大量細(xì)胞因子的產(chǎn)生,相關(guān)負(fù)向調(diào)節(jié)因子的缺失,如細(xì)胞因子信號(hào)抑制物(suppressors of cytokine signaling proteins,SOCS),以及JAK/STAT基因編碼產(chǎn)物的富集,如STAT3,JAK/STAT通路被異常激活。在MS實(shí)驗(yàn)?zāi)Ｐ椭袘?yīng)用特定的JAK/STAT抑制劑,對(duì)緩解固有免疫及適應(yīng)性免疫有較好的效果[1]。目前針對(duì)MS尚未發(fā)現(xiàn)有效的治療藥物,現(xiàn)在應(yīng)用于MS的臨床藥物主要有IFN-β,醋酸格拉替雷和米托蒽醌。但由于藥物毒副作用較大,應(yīng)用受到限制。本實(shí)驗(yàn)用藥魯索利替尼為一種選擇性JAK1/JAK2激酶抑制劑,目前用于人骨髓纖維化的治療。其作用機(jī)制包括JAK1介導(dǎo)的促炎癥細(xì)胞因子的下調(diào),JAK2相關(guān)的促紅細(xì)胞生成及免疫細(xì)胞活化功能調(diào)節(jié),STAT3磷酸化抑制,炎癥細(xì)胞因子水平及信號(hào)下調(diào)。魯索利替尼對(duì)MS的作用尚未明確,本實(shí)驗(yàn)以魯索利替尼作為干預(yù)藥物,觀察EAE小鼠及魯索利替尼治療小鼠發(fā)病嚴(yán)重程度及體內(nèi)炎癥因子水平變化。探索魯索利替尼在EAE免疫學(xué)機(jī)制中發(fā)揮的作用。方法:將80只8至10周的雌性C57BL/6小鼠,體重約為18g-20g,隨機(jī)分為control組,EAE組,魯索利替尼大劑量組和魯索利替尼小劑量組,每組20只。建立EAE模型。魯索利替尼粉劑溶于1:1的乙醇:PBS溶劑。魯索利替尼大劑量組于建立模型完成當(dāng)天(記為第0天)起,每只隔天腹腔注射10ml/Kg魯索利替尼大劑量溶劑(0.5mg/ml);魯索利替尼小劑量組自第0天,每只隔天腹腔注射10ml/Kg魯索利替尼小劑量溶劑(0.25mg/ml);control及EAE組自第0天,每只隔天腹腔注射1:1乙醇:0.01M PBS溶液10 ml/Kg。直至處死。每天早晨對(duì)其進(jìn)行稱重和神經(jīng)功能評(píng)分。利用實(shí)時(shí)定量PCR技術(shù)檢測(cè)小鼠脾中IL-6、IL-17、STAT3、TNF-α、Fox P3+的m RNA表達(dá)水平。用ELISA的方法檢測(cè)小鼠血清中IL-6及TNF-α的蛋白表達(dá)水平。利用流式細(xì)胞學(xué)技術(shù)對(duì)各組CD4+CD25+Foxp3+調(diào)節(jié)型T細(xì)胞占CD4+T細(xì)胞的比例進(jìn)行比較。結(jié)果:1免疫后第25天,魯索利替尼組平均神經(jīng)功能評(píng)分較EAE組顯著降低(P0.05)。魯索利替尼大劑量組發(fā)病率較EAE組顯著降低(P0.05),魯索利替尼小劑量組發(fā)病率較EAE組無(wú)明顯差異(P0.05)。EAE平均發(fā)病潛伏期為(15.22±1.72)d,魯索利替尼大劑量組平均發(fā)病潛伏期為(18.17±1.85)d,魯索利替尼小劑量組平均發(fā)病潛伏期為(17.75±1.49)d;2各組小鼠脾組織中TNF-α、IL-17、IL-6、STAT3、Fox P3+的m RNA水平:在免疫后第25天時(shí),與control組相比,EAE組TNF-α、IL-17、IL-6、STAT3 m RNA水平均增高(P0.01),Fox P3+m RNA水平較control組無(wú)明顯差異(P0.05)。魯索利替尼大劑量組TNF-α、IL-17、IL-6、STAT3m RNA水平較EAE組低,有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P0.01),Fox P3+m RNA水平較EAE組升高,有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P0.01)。魯索利替尼小劑量組TNF-α、IL-6、STAT3 m RNA水平較EAE組低,有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P0.01),Fox P3+m RNA水平較EAE組明顯升高(P0.01),IL-17m RNA水平較EAE組無(wú)明顯統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P0.05);3各組小鼠血清中IL-6和TNF-α蛋白表達(dá)水平:在免疫后第25天時(shí),與control組相比,EAE組IL-6、TNF-α表達(dá)增高,有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P0.05)。與EAE組相比,魯索利替尼大劑量組IL-6、TNF-α表達(dá)降低,有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P0.05)。魯索利替尼小劑量組較EAE組TNF-α表達(dá)降低,有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P0.05);IL-6表達(dá)較EAE組無(wú)明顯差異(P0.05);4各組CD4+CD25+Foxp3+T細(xì)胞占CD4+T細(xì)胞的比例:在免疫后第25天時(shí),與control組相比,EAE組CD4+CD25+Foxp3+調(diào)節(jié)型T細(xì)胞占CD4+T細(xì)胞的比例降低,有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P0.05);魯索利替尼組無(wú)顯著差異(P0.05)。與EAE組相比,魯索利替尼組CD4+CD25+Foxp3+調(diào)節(jié)型T細(xì)胞占CD4+T細(xì)胞的比例升高,有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。結(jié)論:1 EAE發(fā)病時(shí)炎性因子釋放增加,JAK/STAT通路激活,調(diào)節(jié)性T細(xì)胞比例降低。2魯索利替尼可以減輕EAE小鼠神經(jīng)功能損害嚴(yán)重程度,降低發(fā)病率。3魯索利替尼可以降低EAE脾及血清中促炎癥細(xì)胞因子IL-6、IL-17、TNF-α的水平,且降低程度與用藥劑量正相關(guān)。魯索利替尼可以增加Fox P3+表達(dá)水平,具有免疫應(yīng)答負(fù)調(diào)節(jié)及調(diào)節(jié)自身免疫耐受的作用。4魯索利替尼可以提高CD4~+CD25~+Foxp3+調(diào)節(jié)型T細(xì)胞占CD4~+T細(xì)胞的比例,對(duì)EAE的發(fā)病及發(fā)展起到保護(hù)作用。5魯索利替尼可以降低EAE脾中STAT3的表達(dá),抑制JAK/STAT通路。
【關(guān)鍵詞】：多發(fā)性硬化 實(shí)驗(yàn)性自身免疫性腦脊髓炎 魯索利替尼 JAK/STAT通路 CD4~+CD25~+Foxp3~+調(diào)節(jié)型T細(xì)胞 IL-6 IL-17 FoxP3+ TNF-α STAT3
【學(xué)位授予單位】：河北醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號(hào)】：R744.51
【目錄】：

• 中文摘要4-7
• 英文摘要7-11
• 英文縮寫11-12
• 前言12-14
• 材料與方法14-22
• 結(jié)果22-23
• 附圖23-28
• 附表28-29
• 討論29-34
• 結(jié)論34-35
• 參考文獻(xiàn)35-37
• 綜述 JAK/STAT通路及其抑制劑在多發(fā)性硬化和EAE動(dòng)物模型中的作用37-47
• 參考文獻(xiàn)43-47
• 致謝47-48
• 個(gè)人簡(jiǎn)歷48

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1 孫哲;魯索利替尼對(duì)實(shí)驗(yàn)性自身免疫性腦脊髓炎小鼠炎性因子表達(dá)及調(diào)節(jié)性T細(xì)胞的影響[D];河北醫(yī)科大學(xué);2016年

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本文編號(hào)：526816