本文關(guān)鍵詞：miR-99a調(diào)控膠質(zhì)瘤細(xì)胞侵襲與遷移的作用及機(jī)制研究

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【摘要】：膠質(zhì)瘤,是人體最常見(jiàn)的原發(fā)性中樞神經(jīng)系統(tǒng)腫瘤,其發(fā)生率約占顱內(nèi)腫瘤的40%以上,而其中惡性膠質(zhì)瘤的年發(fā)病率約為3-8/10萬(wàn)人口。針對(duì)該疾病的臨床治療策略也在不斷完善和進(jìn)步,從單純普通外科治療到神經(jīng)導(dǎo)航手術(shù)與熒光引導(dǎo)手術(shù)治療;從普通化療藥物到新型烷化劑替莫唑胺;從常規(guī)放療到立體定向放療技術(shù);以及不斷發(fā)展的自殺基因、免疫基因等基因療法和免疫療法的出現(xiàn)。盡管以手術(shù)為主的綜合性治療手段全面采用,但由于膠質(zhì)瘤的高度侵襲性使得單純依靠外科手術(shù)難以完全切除腫瘤;而綜合性放療和化療又并不能高度特異性地殺滅膠質(zhì)瘤細(xì)胞,生物免疫治療的個(gè)體差異性和技術(shù)的不成熟,這些制約因素使得目前針對(duì)該疾病的治療效果不甚理想,另外還產(chǎn)生一系列嚴(yán)重的中樞神經(jīng)系統(tǒng)毒、副作用,如嚴(yán)重的放射性壞死損傷等。該治療狀況在長(zhǎng)期的研究歷程中并未得到根本性改觀,所以膠質(zhì)瘤始終是包括腫瘤學(xué)學(xué)科領(lǐng)域的長(zhǎng)期研究熱點(diǎn),詳細(xì)了解膠質(zhì)瘤的疾病機(jī)理、探索可替代治療手段是本領(lǐng)域的重要課題。目前神經(jīng)膠質(zhì)瘤的病因以及發(fā)病機(jī)制尚不明確,在大量分子病理學(xué)基礎(chǔ)性研究中人們發(fā)現(xiàn)膠質(zhì)瘤存在多種基因異常情況,通常伴有一種或是多種相關(guān)癌基因過(guò)量表達(dá),另外還可能同時(shí)伴有某些抑癌基因的突變?nèi)笔У?多種基因因素綜合作用使得細(xì)胞信號(hào)傳導(dǎo)通路發(fā)生異常,腫瘤細(xì)胞逃避正常生長(zhǎng)調(diào)控系統(tǒng)調(diào)節(jié)作用而發(fā)生自主性侵襲和增殖,進(jìn)而產(chǎn)生相關(guān)惡性表型。目前關(guān)于微小RNA(micro RNA或miRNA)在腫瘤形成與進(jìn)展中的作用越來(lái)越受到人們重視。micro RNA是一類小型非編碼RNA,這些micro RNA能夠與其靶m RNA的3,非編碼區(qū)相結(jié)合(3′UTR),通過(guò)轉(zhuǎn)錄后水平調(diào)控促進(jìn)靶m RNA的降解和/或抑制其翻譯從而發(fā)揮負(fù)性調(diào)控基因表達(dá)的作用。長(zhǎng)期研究證實(shí),神經(jīng)膠質(zhì)瘤的疾病進(jìn)展過(guò)程中存在micro RNA的異常表達(dá),micro RNA通過(guò)多種調(diào)控機(jī)制與腫瘤細(xì)胞惡性表型相關(guān)。大量研究結(jié)論指出有相當(dāng)一部分micro RNA位于某些腫瘤易感區(qū),特別是有些micro RNA在腫瘤細(xì)胞的表達(dá)量與其正常細(xì)胞中完全不同,這使得人們有理由相信micro RNA與腫瘤形成存在某種聯(lián)系。截止目前,大量研究已經(jīng)證實(shí)miR-99a作為腫瘤抑癌基因在多種腫瘤中表達(dá)下調(diào),并參與相關(guān)腫瘤細(xì)胞的增殖、分化、凋亡等生長(zhǎng)調(diào)控過(guò)程。而目前miR-99a在神經(jīng)膠質(zhì)瘤中的功能作用尚無(wú)明確文獻(xiàn)報(bào)道。miR-99a在腦膠質(zhì)瘤中是通過(guò)調(diào)控哪些靶基因的表達(dá)來(lái)抑制腫瘤細(xì)胞的生成,過(guò)表達(dá)膠質(zhì)瘤細(xì)胞miR-99a水平能否逆轉(zhuǎn)膠質(zhì)瘤惡性表型等成為神經(jīng)膠質(zhì)瘤新的治療靶點(diǎn)�；谏鲜鰧�(shí)驗(yàn)思路我們將重點(diǎn)研究miR-99a在膠質(zhì)細(xì)胞瘤惡性表型中所發(fā)揮的生物學(xué)功能,通過(guò)生物學(xué)體內(nèi)外實(shí)驗(yàn)相關(guān)研究來(lái)證實(shí)膠質(zhì)瘤中miR-99a表達(dá)對(duì)膠質(zhì)瘤細(xì)胞生長(zhǎng)具有相當(dāng)?shù)目刂菩?yīng)作。通過(guò)鑒定miR-99a在膠質(zhì)瘤惡性表型調(diào)控中的靶基因來(lái)探討過(guò)表達(dá)膠質(zhì)瘤miR-99a對(duì)膠質(zhì)瘤抑制作用的機(jī)制研究,而我們的研究也將為膠質(zhì)瘤的治療提供一個(gè)新的潛在靶點(diǎn)。在本研究中我們將研究miR-99a在人腦膠質(zhì)瘤中異常表達(dá)對(duì)腫瘤細(xì)胞生長(zhǎng)表型的影響,選取膠質(zhì)瘤細(xì)胞系LN229作為研究細(xì)胞載體,并進(jìn)一步研究miR-99a與NOX4在同一人腦膠質(zhì)瘤組織之間的表達(dá)相關(guān)性,而且通過(guò)建立完整的顱內(nèi)膠質(zhì)瘤荷瘤模型探討miR-99a與人腦膠質(zhì)瘤細(xì)胞侵襲性和遷移性方面的相關(guān)性,為進(jìn)一步深入研究miR-99a在人類神經(jīng)膠質(zhì)瘤中的作用機(jī)制奠定重要基礎(chǔ)。本研究分為三個(gè)重要部分:1.通過(guò)人工構(gòu)建慢病毒包裝質(zhì)粒(hsa-miR-99a mimics和hsa-miR-99a inhibitor)分別上調(diào)和敲低膠質(zhì)細(xì)胞瘤細(xì)胞系LN229細(xì)胞中miR-99a表達(dá)水平來(lái)系統(tǒng)分析miR-99a對(duì)膠質(zhì)細(xì)胞瘤發(fā)生、進(jìn)展所起的作用,研究和了解慢病毒轉(zhuǎn)染在改變膠質(zhì)瘤miR-99a表達(dá)水平的實(shí)際應(yīng)用效果。2.慢病毒轉(zhuǎn)染hsa-miR-99a mimics和hsa-miR-99a inhibitor進(jìn)入膠質(zhì)細(xì)胞瘤細(xì)胞系LN229中,分別上調(diào)和敲低膠質(zhì)瘤細(xì)胞miR-99a的表達(dá)水平,觀察膠質(zhì)瘤細(xì)胞系LN229在細(xì)胞增殖活性、侵襲遷移能力等生物學(xué)性狀的變化。3.通過(guò)生物信息學(xué)技術(shù)手段獲取腫瘤中miR-99a的重要靶基因信息,并采用熒光素酶報(bào)告載體實(shí)驗(yàn)方法鑒定相關(guān)靶基因的確切性,探討膠質(zhì)瘤中miR-99a表達(dá)腫瘤細(xì)胞生長(zhǎng)的調(diào)控機(jī)制。4.構(gòu)建LN229裸鼠顱內(nèi)荷瘤模型,觀察膠質(zhì)瘤瘤體生長(zhǎng)速度和大小,將腫瘤組織進(jìn)行免疫組化染色分析,進(jìn)一步驗(yàn)證體內(nèi)環(huán)境下腫瘤靶基因的表達(dá)水平以及與細(xì)胞增殖,侵襲的相關(guān)性。經(jīng)大量實(shí)驗(yàn)研究我們得出以下初步實(shí)驗(yàn)結(jié)論:1.采用成熟的慢病毒轉(zhuǎn)染可有效上調(diào)或敲低miR-99a在LN229人膠質(zhì)細(xì)胞瘤細(xì)胞系的表達(dá)水平。2.敲低或上調(diào)膠質(zhì)瘤細(xì)胞系LN229中miR-99a表達(dá)水平能夠明顯改變膠質(zhì)瘤細(xì)胞的遷移和侵襲能力。3.NOX4基因是miR-99a的一個(gè)重要靶基因,NOX4的mRNA 3′UTR是miR-99a直接作用靶點(diǎn)。miR-99a與靶基因的表達(dá)具有相應(yīng)調(diào)控關(guān)系,上調(diào)miR-99a能夠使其惡性表型得以逆轉(zhuǎn),腫瘤細(xì)胞的增殖侵襲遷移能力受到明抑制。4.裸鼠顱內(nèi)膠質(zhì)瘤模型實(shí)驗(yàn)觀察發(fā)現(xiàn),在體內(nèi)環(huán)境下上調(diào)或敲低膠質(zhì)瘤細(xì)胞系miR-99a表達(dá)其生物學(xué)行為結(jié)果與體外實(shí)驗(yàn)基本一致,miR-99a過(guò)表達(dá)能夠下調(diào)靶基因NOX4的表達(dá),抑制腫瘤細(xì)胞的生長(zhǎng)。
【關(guān)鍵詞】：膠質(zhì)瘤 miR-99a 靶基因
【學(xué)位授予單位】：天津醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號(hào)】：R739.41
【目錄】：

• 中文摘要4-7
• Abstract7-11
• 縮略語(yǔ)/符號(hào)說(shuō)明11-12
• 前言12-15
• 研究現(xiàn)狀、成果12-13
• 研究目的、方法13-15
• 第一部分 miR-99a對(duì)人腦膠質(zhì)瘤細(xì)胞生長(zhǎng)影響的體外研究15-40
• 材料與方法15-28
• 1 材料15-17
• 2 方法17-28
• 結(jié)果28-37
• 討論37-39
• 小結(jié)39-40
• 第二部分 miR-99a靶基因鑒定與機(jī)制研究40-53
• 材料與方法40-46
• 1 材料40-42
• 2 方法42-46
• 結(jié)果46-50
• 討論50-52
• 小結(jié)52-53
• 第三部分 miR-99a調(diào)控神經(jīng)膠質(zhì)瘤細(xì)胞系生長(zhǎng)的體內(nèi)研究53-63
• 材料與方法53-57
• 1 材料53-54
• 2 方法54-57
• 結(jié)果57-61
• 討論61-62
• 小結(jié)62-63
• 結(jié)論63-64
• 參考文獻(xiàn)64-68
• 發(fā)表論文和參加科研情況68-69
• 綜述 microRNA-99a在腫瘤等疾病中的研究進(jìn)展69-78
• 綜述參考文獻(xiàn)75-78
• 致謝78-79
• 個(gè)人簡(jiǎn)歷79

【參考文獻(xiàn)】

中國(guó)期刊全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前4條

1 張春智;浦佩玉;;MicroRNA與腦發(fā)育及神經(jīng)系統(tǒng)疾病[J];醫(yī)學(xué)分子生物學(xué)雜志;2008年01期

2 ;MicroRNA and Brain Tumors[J];Chinese Journal of Clinical Oncology;2007年05期

3 李建喜;楊志強(qiáng);王學(xué)智;;活性氧自由基在動(dòng)物機(jī)體內(nèi)的生物學(xué)作用[J];動(dòng)物醫(yī)學(xué)進(jìn)展;2006年10期

4 ;ROS-related Enzyme Expressions in Endothelial Cells Regulated by Tea Polyphenols[J];Biomedical and Environmental Sciences;2004年01期

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本文編號(hào)：522689