本文關(guān)鍵詞：遠(yuǎn)程缺血后處理通過Nrf2-ARE通路減輕大鼠慢性腦缺血損傷的機(jī)制研究

  更多相關(guān)文章： 大鼠 慢性腦缺血 血管性癡呆 Nrf2-ARE信號通路 Tau蛋白 遠(yuǎn)程缺血后處理

【摘要】：目的采用雙側(cè)頸總動脈永久結(jié)扎改良法(permanent bilateral common carotid artery occlusion,BCAO建立慢性腦缺血動物模型,證實遠(yuǎn)程缺血后處理對慢性腦缺血大鼠的神經(jīng)保護(hù)作用,進(jìn)一步明確其保護(hù)機(jī)制是否與激活Nrf2-ARE信號通路,降低Tau蛋白磷酸化水平,減少神經(jīng)元胞質(zhì)內(nèi)Tau蛋白異常積聚有關(guān)。方法(1)健康成年SD大鼠,隨機(jī)分為四組分別為假手術(shù)組(Sham,n=20)、雙側(cè)頸總動脈永久結(jié)扎模型組(BCAO,n=20)、肢體遠(yuǎn)程缺血后處理3天組(RIPC3d,n=20)和肢體遠(yuǎn)程缺血4周組(RIPC4W,n=20)。采用永久雙側(cè)頸總動脈結(jié)扎改良法(BCAO)制備慢性腦缺血模型,先結(jié)扎一側(cè)頸總動脈,3天后,再結(jié)扎另一側(cè)頸總動脈,術(shù)后立即實施遠(yuǎn)程缺血后處理即用橡皮筋結(jié)扎大鼠的雙下肢,結(jié)扎10分鐘,放松10分鐘,重復(fù)3次,每天2次,假手術(shù)組只分離血管神經(jīng),不作其他任何處理;(2)然后分別于第4周、8周兩個時間點進(jìn)行大鼠神經(jīng)行為測試,水迷宮實驗、高架十字迷宮實驗、新舊物體識別實驗、神經(jīng)行為學(xué)評分等,來測試大鼠空間學(xué)習(xí)記憶能力、焦慮情緒、以及神經(jīng)行為學(xué)損傷程度。(3)神經(jīng)行為學(xué)測試結(jié)束后,處死大鼠斷頭取腦,使用Nissl染色來觀察大鼠海馬組織形態(tài)學(xué)變化,利用Q-PCR來檢測大鼠腦組織中Nrf2及下游因子SOD-2,HO-1等mRNA的表達(dá)變化,用Elisa檢測Nrf2及下游因子蛋白表達(dá)變化,用普通免疫組織化學(xué)及免疫熒光實驗對陽性細(xì)胞進(jìn)行定位。結(jié)果(1)RIPC對于大鼠慢性腦缺血造成的認(rèn)知能力下降具有改善作用,通過水迷宮實驗、高架十字迷宮實驗、新舊物體識別實驗以及神經(jīng)行為學(xué)評分,結(jié)果顯示,在水迷宮中,與假手術(shù)組比較,BCAO和RIPC組逃避潛伏期和穿越平臺次數(shù)有顯著差異(P0.05)。慢性腦缺血組即BCAO組,與RIPC3d和RIPC4w組比較而言,其逃避潛伏期顯著延長(P0.05)穿越平臺次數(shù)顯著減少;在高架十字迷宮和神經(jīng)行為學(xué)評分中,8周時,與假手術(shù)組比較,BCAO組的開臂次數(shù)明顯減少(P0.05),實施RIPC后,其開臂次數(shù)明顯增多(P0.05)。在新舊物體識別實驗中,與BCAO比較,RIPC探索新物體行為和記憶能力明顯提高(P0.05),有統(tǒng)計學(xué)意義。(2)同時,通過Q-PCR和Elisa的檢測可知,RIPC可以上調(diào)Nrf2(P0.05)以及其下游因子SOD-2(P0.05),下調(diào)炎癥因子TNFα(P0.05)以及Tau蛋白(P0.05),同時免疫組織化學(xué)實驗顯示,Nrf2和SOD-2的陽性細(xì)胞較BCAO組明顯增多,Tau蛋白的陽性細(xì)胞明顯減少,在尼氏染色中,其結(jié)果也顯示,與Sham比較,BCAO組海馬區(qū)神經(jīng)元損傷較多,尼氏體大量減少,與BCAO組比較,RIPC組尼氏體受損較小。(3)免疫組織化學(xué)結(jié)果表明,與BCAO組相比,RIPC的Nrf2和SOD-2的陽性細(xì)胞數(shù)明顯增多,且NeuN的免疫熒光結(jié)果顯示BCAO組大鼠海馬區(qū),與Sham組比較,神經(jīng)元損傷較為嚴(yán)重,,陽性細(xì)胞明顯減少(P0.05),RIPC組與BCAO組比較,陽性細(xì)胞顯著增多(P0.05)。結(jié)論(1)RIPC可以改善大鼠認(rèn)知功能以及慢性腦缺血大鼠的學(xué)習(xí)記憶能力下降、減少其焦慮情緒等。(2)RIPC可能通過參與誘導(dǎo)激活Nrf2-ARE通路,上調(diào)其關(guān)鍵因子Nrf2和SOD-2,下調(diào)Tau蛋白和TNFα,激活內(nèi)源性抗氧化應(yīng)激,減少非正常Tau蛋白的積聚,減少神經(jīng)元損傷和壞死,保護(hù)腦組織。
【關(guān)鍵詞】：大鼠 慢性腦缺血 血管性癡呆 Nrf2-ARE信號通路 Tau蛋白 遠(yuǎn)程缺血后處理
【學(xué)位授予單位】：成都醫(yī)學(xué)院
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號】：R743.3
【目錄】：

• 摘要6-8
• Abstract8-11
• 前言11-15
• 第一部分 遠(yuǎn)程缺血后處理改善慢性腦缺血大鼠的神經(jīng)功能15-30
• 1.材料與方法15-16
• 1.1 主要實驗儀器15-16
• 2 實驗方法16-21
• 2.1 實驗動物與分組16
• 2.2 慢性腦缺血動物模型（BCAO）制備16-17
• 2.3 肢體缺血后處理（RIPC）模型制備17
• 2.4 大鼠認(rèn)知功能的評定17-20
• 2.5 統(tǒng)計方法20-21
• 3 結(jié)果21-26
• 3.1 水迷宮實驗結(jié)果比較21-23
• 3.2 神經(jīng)行為學(xué)結(jié)果比較23-24
• 3.3 高架十字迷宮結(jié)果比較24-25
• 3.4 新舊物體識別結(jié)果比較25-26
• 4 討論26-29
• 4.1 關(guān)于慢性腦缺血26
• 4.2 關(guān)于遠(yuǎn)程缺血后處理-RIPC26-27
• 4.3 關(guān)于RIPC的動物模型27
• 4.4 RIPC 改善 BCAO 大鼠的認(rèn)知功能27-29
• 5 結(jié)論29-30
• 第二部分 遠(yuǎn)程缺血后處理對慢性腦缺血大鼠神經(jīng)保護(hù)作用的機(jī)制研究30-55
• 1.材料與方法30-35
• 1.1 主要實驗儀器30-31
• 1.2 主要實驗試劑31-32
• 1.3 主要試劑配制32-35
• 2 實驗方法35-42
• 2.1 Q-PCR35-36
• 2.2 Elisa-蛋白測定36-37
• 2.3 冰凍切片制作37-38
• 2.4 石蠟切片的制作38-39
• 2.5 石蠟切片免疫組織化學(xué)染色39
• 2.6 冰凍切片免疫熒光染色39-40
• 2.7 石蠟切片免疫熒光40-41
• 2.8 Nissl染色41-42
• 3 結(jié)果42-51
• 3.1 Q-PCR42-43
• 3.2 Elisa43-44
• 3.3 免疫組織化學(xué)44-50
• 3.4 Nissal染色50-51
• 4 討論51-54
• 4.1 RIPC參與調(diào)控Nrf2-ARE信號通路51-52
• 4.2 RIPC減少Tau蛋白積聚52-54
• 5 結(jié)論54-55
• 參考文獻(xiàn)55-59
• 文獻(xiàn)綜述59-70
• 參考文獻(xiàn)66-70
• 附錄70-71
• 縮略語全稱（英文全稱中文全稱）71-72
• 攻讀學(xué)位期間研究成果72-73
• 致謝73-74

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本文編號：519230