本文關鍵詞：遠程缺血后處理通過Nrf2-ARE通路減輕大鼠慢性腦缺血損傷的機制研究

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【摘要】：目的采用雙側頸總動脈永久結扎改良法(permanent bilateral common carotid artery occlusion,BCAO建立慢性腦缺血動物模型,證實遠程缺血后處理對慢性腦缺血大鼠的神經(jīng)保護作用,進一步明確其保護機制是否與激活Nrf2-ARE信號通路,降低Tau蛋白磷酸化水平,減少神經(jīng)元胞質內Tau蛋白異常積聚有關。方法(1)健康成年SD大鼠,隨機分為四組分別為假手術組(Sham,n=20)、雙側頸總動脈永久結扎模型組(BCAO,n=20)、肢體遠程缺血后處理3天組(RIPC3d,n=20)和肢體遠程缺血4周組(RIPC4W,n=20)。采用永久雙側頸總動脈結扎改良法(BCAO)制備慢性腦缺血模型,先結扎一側頸總動脈,3天后,再結扎另一側頸總動脈,術后立即實施遠程缺血后處理即用橡皮筋結扎大鼠的雙下肢,結扎10分鐘,放松10分鐘,重復3次,每天2次,假手術組只分離血管神經(jīng),不作其他任何處理;(2)然后分別于第4周、8周兩個時間點進行大鼠神經(jīng)行為測試,水迷宮實驗、高架十字迷宮實驗、新舊物體識別實驗、神經(jīng)行為學評分等,來測試大鼠空間學習記憶能力、焦慮情緒、以及神經(jīng)行為學損傷程度。(3)神經(jīng)行為學測試結束后,處死大鼠斷頭取腦,使用Nissl染色來觀察大鼠海馬組織形態(tài)學變化,利用Q-PCR來檢測大鼠腦組織中Nrf2及下游因子SOD-2,HO-1等mRNA的表達變化,用Elisa檢測Nrf2及下游因子蛋白表達變化,用普通免疫組織化學及免疫熒光實驗對陽性細胞進行定位。結果(1)RIPC對于大鼠慢性腦缺血造成的認知能力下降具有改善作用,通過水迷宮實驗、高架十字迷宮實驗、新舊物體識別實驗以及神經(jīng)行為學評分,結果顯示,在水迷宮中,與假手術組比較,BCAO和RIPC組逃避潛伏期和穿越平臺次數(shù)有顯著差異(P0.05)。慢性腦缺血組即BCAO組,與RIPC3d和RIPC4w組比較而言,其逃避潛伏期顯著延長(P0.05)穿越平臺次數(shù)顯著減少;在高架十字迷宮和神經(jīng)行為學評分中,8周時,與假手術組比較,BCAO組的開臂次數(shù)明顯減少(P0.05),實施RIPC后,其開臂次數(shù)明顯增多(P0.05)。在新舊物體識別實驗中,與BCAO比較,RIPC探索新物體行為和記憶能力明顯提高(P0.05),有統(tǒng)計學意義。(2)同時,通過Q-PCR和Elisa的檢測可知,RIPC可以上調Nrf2(P0.05)以及其下游因子SOD-2(P0.05),下調炎癥因子TNFα(P0.05)以及Tau蛋白(P0.05),同時免疫組織化學實驗顯示,Nrf2和SOD-2的陽性細胞較BCAO組明顯增多,Tau蛋白的陽性細胞明顯減少,在尼氏染色中,其結果也顯示,與Sham比較,BCAO組海馬區(qū)神經(jīng)元損傷較多,尼氏體大量減少,與BCAO組比較,RIPC組尼氏體受損較小。(3)免疫組織化學結果表明,與BCAO組相比,RIPC的Nrf2和SOD-2的陽性細胞數(shù)明顯增多,且NeuN的免疫熒光結果顯示BCAO組大鼠海馬區(qū),與Sham組比較,神經(jīng)元損傷較為嚴重,,陽性細胞明顯減少(P0.05),RIPC組與BCAO組比較,陽性細胞顯著增多(P0.05)。結論(1)RIPC可以改善大鼠認知功能以及慢性腦缺血大鼠的學習記憶能力下降、減少其焦慮情緒等。(2)RIPC可能通過參與誘導激活Nrf2-ARE通路,上調其關鍵因子Nrf2和SOD-2,下調Tau蛋白和TNFα,激活內源性抗氧化應激,減少非正常Tau蛋白的積聚,減少神經(jīng)元損傷和壞死,保護腦組織。
【關鍵詞】：大鼠 慢性腦缺血 血管性癡呆 Nrf2-ARE信號通路 Tau蛋白 遠程缺血后處理
【學位授予單位】：成都醫(yī)學院
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2016
【分類號】：R743.3
【目錄】：

• 摘要6-8
• Abstract8-11
• 前言11-15
• 第一部分 遠程缺血后處理改善慢性腦缺血大鼠的神經(jīng)功能15-30
• 1.材料與方法15-16
• 1.1 主要實驗儀器15-16
• 2 實驗方法16-21
• 2.1 實驗動物與分組16
• 2.2 慢性腦缺血動物模型（BCAO）制備16-17
• 2.3 肢體缺血后處理（RIPC）模型制備17
• 2.4 大鼠認知功能的評定17-20
• 2.5 統(tǒng)計方法20-21
• 3 結果21-26
• 3.1 水迷宮實驗結果比較21-23
• 3.2 神經(jīng)行為學結果比較23-24
• 3.3 高架十字迷宮結果比較24-25
• 3.4 新舊物體識別結果比較25-26
• 4 討論26-29
• 4.1 關于慢性腦缺血26
• 4.2 關于遠程缺血后處理-RIPC26-27
• 4.3 關于RIPC的動物模型27
• 4.4 RIPC 改善 BCAO 大鼠的認知功能27-29
• 5 結論29-30
• 第二部分 遠程缺血后處理對慢性腦缺血大鼠神經(jīng)保護作用的機制研究30-55
• 1.材料與方法30-35
• 1.1 主要實驗儀器30-31
• 1.2 主要實驗試劑31-32
• 1.3 主要試劑配制32-35
• 2 實驗方法35-42
• 2.1 Q-PCR35-36
• 2.2 Elisa-蛋白測定36-37
• 2.3 冰凍切片制作37-38
• 2.4 石蠟切片的制作38-39
• 2.5 石蠟切片免疫組織化學染色39
• 2.6 冰凍切片免疫熒光染色39-40
• 2.7 石蠟切片免疫熒光40-41
• 2.8 Nissl染色41-42
• 3 結果42-51
• 3.1 Q-PCR42-43
• 3.2 Elisa43-44
• 3.3 免疫組織化學44-50
• 3.4 Nissal染色50-51
• 4 討論51-54
• 4.1 RIPC參與調控Nrf2-ARE信號通路51-52
• 4.2 RIPC減少Tau蛋白積聚52-54
• 5 結論54-55
• 參考文獻55-59
• 文獻綜述59-70
• 參考文獻66-70
• 附錄70-71
• 縮略語全稱（英文全稱中文全稱）71-72
• 攻讀學位期間研究成果72-73
• 致謝73-74

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1 陳同度,張昌穎;素食大鼠的貧血現(xiàn)象[J];營養(yǎng)學報;1957年04期

2 陳偉強;趙善廣;;自制注射用大鼠固定裝置[J];上海實驗動物科學;1992年04期

3 肖柳英,林培英,馮昭明,張丹;不同周齡的SD大鼠生理、生化及體重的正常值測定[J];中藥新藥與臨床藥理;1996年03期

4 李淑云;簡易大鼠灌胃器的制作[J];錦州醫(yī)學院學報;2001年04期

5 楊明智,陳積圣;一種大鼠抓取與固定的新工具介紹[J];上海實驗動物科學;2001年03期

6 戴英,陸群;復方H_(505)對Wistar大鼠外周血的血液流變學指標的影響[J];中國血液流變學雜志;2001年01期

7 韋應波,孫喜慶,曹新生,姚永杰,馮岱雅,楊長斌;+Gz暴露時間對大鼠記憶功能和行為的影響[J];航天醫(yī)學與醫(yī)學工程;2003年01期

8 呂學軍,郭俊生,李敏,周利梅,張永娟;暈船大鼠體內鐵含量的變化[J];中國職業(yè)醫(yī)學;2003年04期

9 湯仁仙,王迎偉,王慧,周峰;201A中藥合劑對大鼠抗腎小球基底膜腎炎病變的影響[J];徐州醫(yī)學院學報;2003年06期

10 孫同柱,付小兵,翁立新,梁雪梅,陳偉;介紹一種簡易的大鼠保定方法[J];上海實驗動物科學;2004年01期

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2 祝~=驤;iJ梊霞;洃克琴;崔素英;文允摪;，

本文編號：519230