本文關(guān)鍵詞：綠色熒光蛋白免疫缺陷鼠近交系建立及在腦腫瘤移植模型中的應(yīng)用，，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：第一部分:綠色熒光蛋白免疫缺陷小鼠近交系的建立及鑒定目的:培育表達(dá)增強(qiáng)型綠色熒光蛋白(EGFP)基因的近交系免疫缺陷動(dòng)物,旨在為建立穩(wěn)定表達(dá)EGFP的腦腫瘤原位移植模型奠定基礎(chǔ)。方法:通過(guò)雜交-回交的方法將EGFP基因?qū)隑ALB/c背景裸小鼠及NOD/SCID小鼠,并通過(guò)表型及基因型分步篩選子代,繁育新的近交品系。以PCR、生化位點(diǎn)及皮膚移植法對(duì)免疫缺陷動(dòng)物進(jìn)行遺傳學(xué)檢測(cè)。通過(guò)流式細(xì)胞術(shù)分析模型動(dòng)物的免疫學(xué)特性。結(jié)果:熒光裸鼠在雜交-回交第10代后,14個(gè)生化位點(diǎn)皆為純合型,T淋巴細(xì)胞比例低下(小于外周血淋巴細(xì)胞總數(shù)的0.3%),交替植皮成功率是100%,表明已達(dá)到EGFP基因同源導(dǎo)入建立近交系的標(biāo)準(zhǔn),在熒光激發(fā)下全身均可見(jiàn)到明亮的綠色熒光。表達(dá)綠色熒光蛋白的NOD/SCID小鼠T、B淋巴細(xì)胞比例皆低下,且其在熒光激發(fā)下全身(除外毛發(fā))也可見(jiàn)到明亮的綠色熒光。結(jié)論:成功地建立了一個(gè)既與親本C57BL/6-Tg(CAG-EGFP)-樣穩(wěn)定表達(dá)EGFP,又與免疫缺陷小鼠(BALB/c背景或NOD/SCID背景)一樣具有免疫功能缺陷的近交新品系。利用同源導(dǎo)入法建立的新品系穩(wěn)定表達(dá)EGFP的模型小鼠,為人膠質(zhì)瘤原位移植示蹤研究膠質(zhì)瘤及其腫瘤微環(huán)境奠定堅(jiān)實(shí)基礎(chǔ)。第二部分:EGFP免疫缺陷近交系小鼠不同腦區(qū)熒光表達(dá)特性分析及其在腦腫瘤移植模型中的應(yīng)用目的:分析近交系增強(qiáng)型綠色熒光(EGFP)裸小鼠腦組織不同區(qū)域EGFP的表達(dá)情況,旨在建立穩(wěn)定表達(dá)EGFP示蹤的腦腫瘤原位移植模型。方法:以免疫熒光法檢測(cè)所建立模型鼠不同區(qū)域腦組織及神經(jīng)干細(xì)胞EGFP表達(dá)情況。BALB/c熒光裸鼠顱內(nèi)接種U87-紅色熒光蛋白(RFP)細(xì)胞并建立原位膠質(zhì)瘤模型。乳腺癌腦轉(zhuǎn)移瘤組織塊接種于NOD/SCID/EGFP小鼠,建立原位移植瘤模型。結(jié)果:熒光裸鼠在熒光激發(fā)下全身均可見(jiàn)到明亮的綠色熒光,各臟器組織細(xì)胞(紅細(xì)胞除外)均表達(dá)EGFP,但表達(dá)強(qiáng)度有差異,腦組織中EGFP表達(dá),腦組織中EGFP呈中度表達(dá),顯著高于肝組織(肝組織中EGFP呈低度表達(dá)),且連續(xù)傳代胎腦神經(jīng)干細(xì)胞7代其熒光表達(dá)強(qiáng)度未見(jiàn)明顯降低。近交系熒光裸鼠皮下接種U87細(xì)胞致瘤率為5/5,原位移植U87-RFP膠質(zhì)瘤細(xì)胞株的顱內(nèi)移植瘤組織中可清晰顯示腫瘤組織中存在的紅色、綠色熒光細(xì)胞。乳腺癌腦轉(zhuǎn)移瘤臨床標(biāo)本組織塊原位接種NOD/SCID/EGFP小鼠,移植瘤組織中可見(jiàn)組織細(xì)胞呈巢狀分布的特點(diǎn)在該模型中很好地保留。結(jié)論:利用同源導(dǎo)入法建立的近交系免疫缺陷鼠穩(wěn)定表達(dá)EGFP,可為人膠質(zhì)瘤原位移植示蹤研究膠質(zhì)瘤及其腫瘤微環(huán)境奠定堅(jiān)實(shí)基礎(chǔ)。NOD/SCID/EGFP小鼠能夠更好地保留臨床腫瘤標(biāo)本的特性,在腫瘤微環(huán)境相關(guān)研究中具有潛在的應(yīng)用價(jià)值。
【關(guān)鍵詞】：熒光裸小鼠 熒光SCID小鼠 近交系 遺傳學(xué)檢測(cè) 綠色熒光蛋白 NOD/SCID小鼠 膠質(zhì)瘤模型
【學(xué)位授予單位】：蘇州大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號(hào)】：R739.41;R-332
【目錄】：

• 中文摘要4-6
• Abstract6-9
• 序言9-10
• 第一部分：綠色熒光蛋白免疫缺陷小鼠近交系的建立及鑒定10-18
• 引言10
• 材料和方法10-11
• 實(shí)驗(yàn)結(jié)果11-15
• 討論15-16
• 參考文獻(xiàn)16-18
• 第二部分：EGFP免疫缺陷近交系小鼠不同腦區(qū)熒光表達(dá)特性分析及其在腦腫瘤移植模型中的應(yīng)用18-29
• 引言18
• 材料和方法18-20
• 結(jié)果與分析20-24
• 討論24-27
• 參考文獻(xiàn)27-29
• 研究小結(jié)29-30
• 綜述30-35
• 參考文獻(xiàn)34-35
• 中英文對(duì)照縮略詞表35-36
• 攻讀碩士學(xué)位期間公開(kāi)發(fā)表的論文36-37
• 攻讀碩士學(xué)位期間所獲得的獎(jiǎng)勵(lì)37-38
• 致謝38-39

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