厚樸酚對戊四氮慢性致癇大鼠海馬神經(jīng)元的保護作用

發(fā)布時間：2017-06-03 01:02

本文關鍵詞：厚樸酚對戊四氮慢性致癇大鼠海馬神經(jīng)元的保護作用，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：目的:癲癇為神經(jīng)內科一組常見的綜合征,各個年齡階段均可發(fā)生,該病癥可反復發(fā)作,如不及時治療會威及生命。現(xiàn)已有多種抗癲癇藥物相繼問世,但這些藥物大部分以控制癥狀為主,且治療療程長、副作用相對較多,部分患者遵醫(yī)囑服用藥物后仍不能控制癥狀。常有患者因治療過程中停藥或未經(jīng)醫(yī)師指導換藥而功虧一簣,其難治性給患者及家屬帶來生活和心理上的極大壓力。癲癇是由腦部異常放電所產(chǎn)生的腦部功能紊亂引起的。有研究證據(jù)表明,癲癇的多次發(fā)作后可對中樞神經(jīng)系統(tǒng)產(chǎn)生不可逆的損傷,尤以海馬等邊緣系統(tǒng)神經(jīng)元的損傷為甚。癲癇發(fā)作可使中樞神經(jīng)系統(tǒng)出現(xiàn)形式多樣的病理改變,包括神經(jīng)元丟失、凋亡、膠質纖維增生、苔蘚纖維增多等,其中細胞凋亡是神經(jīng)元損傷的主要形式。癲癇對于腦部的損傷是嚴重的,但目前尚無有效的腦保護藥物。厚樸酚是一種傳統(tǒng)中藥,有研究顯示其單體具有中樞鎮(zhèn)靜、抑制炎癥反應、抗衰老等多種藥理學作用。這種單體有否保護癲癇腦損傷的作用是一個值得研究的課題。本研究擬以戊四氮(PTZ)慢性致癇的SD大鼠作為對象,用厚樸酚單體成分進行干預,通過行為學、免疫組織化學和Western bolt等技術方法,檢測其在改善行為、保護神經(jīng)元的作用,為研制新型抗癲癇損傷藥物提供基礎研究資料。方法:SPF級成年雄性SD大鼠75只,實驗起始體重200±20g,隨機均分為溶媒對照組(NS)、單純戊四氮致癇組(PTZ)、高劑量厚樸酚+PTZ組(H)、中劑量厚樸酚+PTZ組(M)和低劑量厚樸酚+PTZ組(L),用腹腔注射PTZ方法復制癲癇動物模型。以PTZ點燃癲癇發(fā)生率評價其為行變化,通過尼氏染色觀察海馬神經(jīng)元形態(tài)和數(shù)量的變化,用Western bolt、免疫組化檢測海馬凋亡因子Caspase-3的表達、免疫酶聯(lián)法檢測TNF-α的表達以檢測對細胞的保護作用。結果:1行為學觀察結果對第7天,14天,21天,28天,35天和42天的點燃率的統(tǒng)計中,PTZ組大鼠點燃率均顯著大于各藥物控制組及NS組,并隨著厚樸酚干預劑量的增加PTZ點燃率有下降趨勢。2免疫酶聯(lián)法檢測各組大鼠海馬區(qū)的TNF-α表達結果各組大鼠海馬組織中PTZ組(284.45±20.70)的TNF-α表達量顯著性地高于其他組(P0.05);NS組(144.01±28.85)則低于其他各組;在藥物干預組中,高劑量組(186.43±21.34)、中劑量組(189.44±22.12)、低劑量組(192.14±39.01)間無顯著性差異(P0.1)。3 Western bolt檢測各組大鼠海馬區(qū)Caspase-3蛋白表達水平PTZ組大鼠海馬組織Caspase-3蛋白水平(3.01±0.56)顯著地高于其他各組(P0.05);藥物干預組中,低劑量組(2.50±0.46)顯著高于其他兩組(P0.05);中劑量組(1.98±0.40)高于高劑量組(1.44±0.32)(P0.05);NS組表達量最少(P0.05)。4免疫組化檢測各組大鼠海馬區(qū)Caspase-3陽性神經(jīng)元的結果PTZ組的Caspase-3陽性細胞數(shù),在CA1區(qū)(76.57±5.79)和CA3區(qū)(71.05±5.11)均顯著高于各藥物干預組(P0.05);NS組的CA1區(qū)(31.12±5.01)、CA3區(qū)(17.55±3.56)均顯著低于其余各組的陽性細胞數(shù);3個藥物干預組的海馬CA1區(qū)的Caspase-3陽性細胞數(shù)則隨劑量的增加而顯著減少(P0.05),既低劑量組(57.33±7.26)中劑量組(47.81±5.99)高劑量組(39.57±4.16);而在海馬CA3區(qū),低劑量組(47.98±4.33)顯著多于高劑量組(33.63±1.13)和中劑量組(33.78±4.39)(P0.05),但高、中兩組間無顯著性差異(P0.05)。5尼氏染色檢測海馬區(qū)神經(jīng)元形態(tài)和數(shù)量的結果PTZ組海馬區(qū)CA1和CA3區(qū)的神經(jīng)元顯示出細胞固縮、核分離和溶解等細胞凋亡的特征,且細胞數(shù)量明顯減少、排列散亂。藥物控制組亦可見少量神經(jīng)元腫脹,胞核染色深淺不均等現(xiàn)象,但神經(jīng)元數(shù)量較比PTZ組明顯增多、損傷小、細胞排列較規(guī)整。NS組海馬CA1及CA3區(qū)海馬結構相對完整,椎體細胞排列規(guī)整,胞漿呈均勻染色清晰的紫藍色,未見明顯丟失。上述5項檢測結果顯示,較比模型動物,厚樸酚干預后大鼠的癲癇點燃率、海馬區(qū)凋亡因子(Caspase-3、TNF-α)的表達水平均顯著降低、細胞的存活數(shù)量顯著升高,細胞形態(tài)也明顯好于PTZ組,有明顯的劑量依賴關系。結論:1厚樸酚能顯著地抑制PTZ的致癇作用,其效果有劑量依賴性;2厚樸酚能對癲癇腦損傷有明顯的保護作用,有顯著的量效關系;3厚樸酚對海馬神經(jīng)元的保護作用與降低TNF-α的釋放和Caspase-3的表達有關,可能是通過降低TNF-α-Caspase-3-凋亡信號通路的作用實現(xiàn)其保護功能的。
【關鍵詞】：厚樸酚 癲癇 戊四氮 細胞凋亡 腦保護
【學位授予單位】：河北醫(yī)科大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2015
【分類號】：R742.1
【目錄】：