本文關(guān)鍵詞：Neurexin-1β及Neuroligin-1與蛛網(wǎng)膜下腔出血后認(rèn)知功能損害的關(guān)系研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：第一部分Neurexin-1β及Neuroligin-1在大鼠蛛網(wǎng)膜下腔出血后腦組織中的表達(dá)變化以及與認(rèn)知功能關(guān)系研究目的:建立大鼠蛛網(wǎng)膜下腔出血模型,研究不同時(shí)間點(diǎn)腦組織內(nèi)Neurexin-1β及Neuroligin-1的表達(dá)變化,以及對(duì)大鼠神經(jīng)行為學(xué)及認(rèn)知功能改變的影響。方法:54只成年健康雄性SD大鼠,隨機(jī)分為假手術(shù)組、SAH后3h、6h、12h、24h、48h、72h、1w、2w共9組,每組6只大鼠。所有SAH大鼠經(jīng)自體尾動(dòng)脈抽取非肝素化動(dòng)脈血注入視交叉前池,致蛛網(wǎng)膜下腔出血模型。分別在蛛網(wǎng)膜下腔出血后3h、6h、12h、24h、48h、72h、1w、2w處死大鼠。假手術(shù)組大鼠進(jìn)行尾動(dòng)脈采血并予顱骨鉆孔,但未進(jìn)行注血,于處理后72h處死大鼠。所有大鼠均進(jìn)行體循環(huán)灌注,并取大腦皮層、海馬組織做標(biāo)本,進(jìn)行Western blot及免疫熒光分析,檢測Neurexin-1β及Neuroligin-1的表達(dá)。并取20只成年健康雄性SD大鼠,隨機(jī)分為假手術(shù)組和SAH組,每組10只大鼠。按以上方法完成假手術(shù)或SAH模型制作,所有大鼠在48h后進(jìn)行神經(jīng)功能評(píng)分,并開始進(jìn)行Morris水迷宮試驗(yàn),測試大鼠認(rèn)知功能改變。結(jié)果:1.Western blot結(jié)果顯示:與假手術(shù)組相比,SAH后3h~24h大鼠腦皮質(zhì)中Neurexin-1β及Neuroligin-1的表達(dá)水平明顯降低(3h、6h、12h P0.05),SAH后24h~72h表達(dá)水平降低最為明顯(24h、48h、72h P0.01),2w組的表達(dá)水平與假手術(shù)組比較無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P0.05)。2.免疫熒光結(jié)果顯示:在大腦皮層及海馬,與假手術(shù)組相比,SAH后Neurexin-1β的相對(duì)熒光強(qiáng)度在3h~12h出現(xiàn)下降(3h、6h、12h P0.05),而SAH后24h~72h下降最明顯(24h、48h、72h P0.01),而后回升,至2w時(shí)相對(duì)免疫熒光強(qiáng)度與假手術(shù)組相比無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P0.05)。Neuroligin-1的相對(duì)免疫熒光強(qiáng)度在SAH后6h~48h出現(xiàn)下降(6h、12h、24h、48h P0.05),SAH后72h下降最顯著(72h P0.01),SAH后1w相對(duì)免疫熒光強(qiáng)度回升(1w P0.05),其中2w組各部位腦組織Neuroligin-1免疫熒光強(qiáng)度也存在一定差別,在海馬,2w組免疫熒光強(qiáng)度仍低于假手術(shù)組(P0.05),而在大腦皮層中則無明顯統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P0.05)。3.與假手術(shù)組相比,SAH組大鼠神經(jīng)功能評(píng)分明顯落后,食欲及活動(dòng)能力均下降(P0.01)。4.在Morris水迷宮試驗(yàn)中,與假手術(shù)組相比,SAH組的逃避潛伏期明顯延長(P0.01),游泳距離顯著增加(P0.01),逃避潛伏期改進(jìn)百分比下降(P0.01)。結(jié)論:1.突觸前膜蛋白Neurexin-1β在大鼠蛛網(wǎng)膜下腔出血后的3h~1w中,在大腦皮層和海馬區(qū)域中的表達(dá)均存在不同程度的降低,以24h~72h最明顯,SAH后1w其表達(dá)又出現(xiàn)一定程度的回升,至SAH后2w回升至假手術(shù)組水平;2.突觸后膜蛋白Neuroligin-1在大鼠SAH后6h開始,在大腦皮質(zhì)和海馬中,表達(dá)出現(xiàn)不同程度的下降,至72h最為明顯,而后又逐漸上升;3.Neuroligin-1表達(dá)降低出現(xiàn)的時(shí)相晚于Neurexin-1β,其中海馬中表達(dá)恢復(fù)比大腦皮層中遲緩。4.大鼠在蛛網(wǎng)膜下腔出血后出現(xiàn)認(rèn)知功能損害,學(xué)習(xí)記憶功能下降是其表現(xiàn)之一。第二部分Neurexin-1β及Neuroligin-1基因表達(dá)的沉默與大鼠蛛網(wǎng)膜下腔出血后認(rèn)知功能損害的關(guān)系研究目的:研究si RNA對(duì)Neurexin-1β及Neuroligin-1基因表達(dá)的干擾作用及對(duì)蛛網(wǎng)膜下腔出血后大鼠認(rèn)知功能損害的影響,并探討其作用機(jī)制。方法:80只成年健康雄性SD大鼠,隨機(jī)分為五組:假手術(shù)組、SAH組、scrambled si RNA組、Neurexin-1βsi RNA組、Neuroligin-1 si RNA組,每組16只大鼠。所有si RNA組大鼠在SAH造模前48小時(shí)經(jīng)側(cè)腦室注射注入相應(yīng)的si RNA 500pmmol/只,假手術(shù)組及SAH組大鼠注射等體積的生理鹽水。所有SAH大鼠經(jīng)自體尾動(dòng)脈抽取非肝素化動(dòng)脈血注入視交叉前池,致蛛網(wǎng)膜下腔出血模型。假手術(shù)組大鼠進(jìn)行尾動(dòng)脈采血并予顱骨鉆孔,但未進(jìn)行注血。每組隨機(jī)取6只在SAH后72h處死大鼠,均進(jìn)行體循環(huán)灌注,并取大腦皮質(zhì)、海馬組織做標(biāo)本,進(jìn)行Western blot及免疫熒光分析,檢測Neurexin-1β及Neuroligin-1的表達(dá)。余下的所有大鼠在SAH后48h進(jìn)行神經(jīng)功能評(píng)分,并開始進(jìn)行Morris水迷宮試驗(yàn),檢測大鼠認(rèn)知功能的改變。結(jié)果:1.Western blot結(jié)果顯示:與假手術(shù)組相比,SAH組大鼠腦組織中Neurexin-1β及Neuroligin-1的表達(dá)水平明顯降低(P0.01),SAH組與scrambled si RNA組相比無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05),而Neurexin-1βsi RNA組、Neuroligin-1 si RNA組蛋白表達(dá)水平與scrambled si RNA組相比均下降(P0.05)。2.免疫熒光結(jié)果顯示:在大腦皮層及海馬,與假手術(shù)組相比,SAH后Neurexin-1β、Neuroligin-1的相對(duì)熒光強(qiáng)度均降低(P0.01),而scrambled si RNA組與SAH組相比無明顯統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P0.05)。Neuroligin-1 si RNA組與scrambled si RNA組相比,熒光強(qiáng)度出現(xiàn)下降(P0.05)。3.與假手術(shù)組相比,SAH組大鼠神經(jīng)功能評(píng)分明顯落后,食欲及活動(dòng)能力下降(P0.01)。而與srambled si RNA組相比,Neurexin-1βsi RNA組和Neuroligin-1 si RNA組大鼠神經(jīng)功能評(píng)分下降,食欲及活動(dòng)能力下降(P0.05)。scrambled si RNA組和SAH組之間無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.5)。4.在Morris水迷宮試驗(yàn)中,與假手術(shù)組相比,SAH組及scrambled si RNA組的學(xué)習(xí)記憶功能明顯下降(P0.01),且SAH組與scrambled si RNA組之間無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05),Neurexin-1βsi RNA組和Neurexin-1βsi RNA組較SAH組下降(P0.01)。結(jié)論:Neurexin-1β及Neuroligin-1基因表達(dá)的沉默可使蛛網(wǎng)下腔出血后大鼠的認(rèn)知功能障礙進(jìn)一步加重。第三部分Neurexin-1β及Neuroligin-1基因表達(dá)的沉默與上調(diào)對(duì)氧合血紅蛋白共培養(yǎng)的海馬神經(jīng)元突觸樣結(jié)構(gòu)形成的影響目的:研究Neurexin-1β及Neuroligin-1基因表達(dá)沉默或上調(diào)后,與氧合血紅蛋白共培養(yǎng)的海馬神經(jīng)元突觸樣結(jié)構(gòu)形態(tài)和數(shù)目變化,并探討其作用機(jī)制。方法:取孕18天的Wistar大鼠母鼠,麻醉后剖宮取胎鼠,在無菌條件下,在預(yù)冷的D-Hank’s玻璃皿中,分離胎鼠大腦,剝離出雙側(cè)海馬對(duì),在D-Hank’s液中機(jī)械分離,轉(zhuǎn)入離心管中離心并棄去上清,加入木瓜蛋白酶消化10min,用含有10%FBS的DMEM液終止消化并洗滌,通過200目濾網(wǎng)過濾,離心并棄去上清,加入含有10%FBS的DMEM液,反復(fù)吹打成單細(xì)胞懸液,常溫下靜置5分鐘,取中層細(xì)胞懸浮液,轉(zhuǎn)入培養(yǎng)瓶中,37℃差速貼壁3h,非神經(jīng)細(xì)胞貼壁較快,收獲未貼壁細(xì)胞(內(nèi)含神經(jīng)元可達(dá)90%以上),進(jìn)行吹打后,以0.4%臺(tái)盼藍(lán)染液染色并計(jì)數(shù)活細(xì)胞,調(diào)整細(xì)胞密度為1.0×10^6/ml,種植于0.1mg/ml的多聚-D-賴氨酸包被后的蓋玻片上,將24孔板置于37℃培養(yǎng)箱中。24h內(nèi)全量換為含2%B-27和0.5m M Gluta MAX?-I的Neurobasal-A培養(yǎng)液,提供5%的CO2氣體,在37℃培養(yǎng)14-19天,其后,每三天置換半量培養(yǎng)液。并定期觀察神經(jīng)元生長情況。培養(yǎng)至第15天,利用Neurexin-1β及Neuroligin-1基因si RNAs、過表達(dá)質(zhì)粒及陰性對(duì)照載體轉(zhuǎn)染海馬神經(jīng)細(xì)胞,24h后以20μM氧合血紅蛋白刺激神經(jīng)元并共培養(yǎng)24h,同時(shí)設(shè)置空白對(duì)照和氧合血紅蛋白對(duì)照組。進(jìn)行Western blot和免疫熒光分析。結(jié)果:1.Western blot結(jié)果顯示:與空白對(duì)照組相比,氧合血紅蛋白對(duì)照組經(jīng)過與Oxy Hb共培養(yǎng)24h后,其Neurexin-1β及Neuroligin-1的表達(dá)水平均下降(P0.01),Neurexin-1βsi RNA組、Neuroligin-1 si RNA組其目的蛋白表達(dá)水平較氧合血紅蛋白對(duì)照組出現(xiàn)更加顯著的降低(P0.01),而各過表達(dá)組與氧合血紅蛋白對(duì)照組相比,相應(yīng)目的蛋白的表達(dá)水平獲得明顯提升。另外,實(shí)驗(yàn)提示突觸前膜標(biāo)志物Synapsin及突觸后膜標(biāo)志物PSD95與Neurexin-1β及Neuroligin-1的表達(dá)水平呈現(xiàn)正相關(guān)。當(dāng)Neurexin-1β及Neuroligin-1的基因表達(dá)沉默后,Synapsin和PSD95表達(dá)水平也出現(xiàn)明顯下降(P0.01),而Neurexin-1β及Neuroligin-1過表達(dá)組Synapsin和PSD95的表達(dá)也出現(xiàn)明顯上調(diào)(P0.01)2.免疫熒光結(jié)果顯示:氧合血紅蛋白對(duì)照組Neurexin-1β及Neuroligin-1的相對(duì)免疫熒光強(qiáng)度較空白對(duì)照組顯著下降(P0.01),而與氧合血紅蛋白對(duì)照組相比,Neurexin-1βsi RNA組、Neuroligin-1 si RNA組相應(yīng)目的蛋白的相對(duì)免疫熒光強(qiáng)度進(jìn)一步下降(P0.01),兩個(gè)過表達(dá)組其目的蛋白的相對(duì)免疫熒光強(qiáng)度較血紅蛋白對(duì)照組明顯升高(P0.01)。各陰性對(duì)照組與氧合血紅蛋白對(duì)照組相對(duì)熒光強(qiáng)度無明顯統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P0.05)。在Synapsin和PSD95的免疫熒光雙染中,可見到神經(jīng)元之間樹突和軸突相互組合而成的突觸樣結(jié)構(gòu),Neurexin-1βsi RNA組、Neuroligin-1 si RNA組,其Synapsin和PSD95相對(duì)免疫熒光強(qiáng)度較氧合血紅蛋白對(duì)照組顯著下降(P0.01),突觸樣結(jié)構(gòu)也明顯減少(P0.01)。而Neurexin-1β及Neuroligin-1過表達(dá)后Synapsin和PSD95的相對(duì)免疫熒光強(qiáng)度也出現(xiàn)明顯升高(P0.01),突觸樣結(jié)構(gòu)也顯著增多(P0.01)。結(jié)論:1.si RNAs和過表達(dá)質(zhì)�？煞謩e引起體外培養(yǎng)的海馬神經(jīng)元中Neurexin-1β和Neuroligin-1基因表達(dá)的沉默與上調(diào);2.突出前膜標(biāo)志物Synapsin及突觸后膜標(biāo)志物PSD95與Neurexin-1β及Neuroligin-1的表達(dá)水平呈現(xiàn)正相關(guān);3.Neurexin-1β及Neuroligin-1基因表達(dá)的沉默可引起與氧合血紅蛋白共培養(yǎng)的海馬神經(jīng)元突觸樣結(jié)構(gòu)減少,而Neurexin-1β及Neuroligin-1基因的過表達(dá)可使突觸樣結(jié)構(gòu)增多。
【關(guān)鍵詞】：蛛網(wǎng)膜下腔出血 Neurexin-1β Neuroligin-1 認(rèn)知功能損害 蛛網(wǎng)膜下腔出血 Neurexin-1β Neuroligin-1 認(rèn)知功能損害 基因表達(dá)沉默 Neurexin-1β Neuroligin-1 si RNA 突觸樣結(jié)構(gòu)
【學(xué)位授予單位】：蘇州大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號(hào)】：R743.35
【目錄】：

• 中文摘要4-9
• Abstract9-15
• 前言15-19
• 參考文獻(xiàn)17-19
• 第一部分Neurexin-1β 及Neuroligin-1 在大鼠蛛網(wǎng)膜下腔出血后腦組織中的表達(dá)變化以及與認(rèn)知功能關(guān)系研究19-44
• 材料與方法19-32
• 結(jié)果32-38
• 討論38-39
• 結(jié)論39-40
• 參考文獻(xiàn)40-44
• 第二部分Neurexin-1β 及Neuroligin-1 基因表達(dá)的沉默與大鼠蛛網(wǎng)膜下腔出血后認(rèn)知功能損害的關(guān)系研究44-61
• 材料和方法44-51
• 結(jié)果51-56
• 討論56-57
• 結(jié)論57-58
• 參考文獻(xiàn)58-61
• 第三部分Neurexin-1β 及Neuroligin-1 基因表達(dá)的沉默與上調(diào)對(duì)氧合血紅蛋白共培養(yǎng)的海馬神經(jīng)元突觸樣結(jié)構(gòu)形成的影響61-76
• 材料和方法61-67
• 結(jié)果67-71
• 討論71-73
• 結(jié)論73
• 參考文獻(xiàn)73-76
• 綜述76-88
• 參考文獻(xiàn)81-88
• 中英文縮略詞表88-89
• 攻讀碩士期間公開發(fā)表的論文89-90
• 致謝90-91

【參考文獻(xiàn)】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前1條

1 周東;李治綱;詹升全;舒航;林志俊;李昭杰;林曉風(fēng);曾少建;陳光忠;;動(dòng)脈瘤性蛛網(wǎng)膜下腔出血患者認(rèn)知功能研究[J];中國臨床神經(jīng)外科雜志;2010年02期

  本文關(guān)鍵詞：Neurexin-1β及Neuroligin-1與蛛網(wǎng)膜下腔出血后認(rèn)知功能損害的關(guān)系研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

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本文編號(hào)：398278