目的：應(yīng)用化學(xué)合成的siRNA在體外抑制人腦膜瘤細(xì)胞HER2基因的表達(dá)，探討化學(xué)合成的siRNA介導(dǎo)的RNAi在腦膜瘤基因治療的可行性。 方法：從新鮮無(wú)菌腦膜瘤組織中提取出原代細(xì)胞進(jìn)行培養(yǎng)，并人工純化、傳代。選取免疫細(xì)胞化學(xué)法鑒定為HER2蛋白表達(dá)陽(yáng)性的腦膜瘤細(xì)胞，設(shè)計(jì)并合成針對(duì)HER2基因的小分子干擾RNA，選用陽(yáng)離子脂質(zhì)體Lipofectamine2000作為轉(zhuǎn)染試劑,同時(shí)設(shè)立空白組、空載體組、非特異性siRNA組、及HER2siRNA組；應(yīng)用脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染法將siRNA導(dǎo)入純化的腦膜瘤細(xì)胞內(nèi)，48小時(shí)后免疫細(xì)胞化學(xué)法檢測(cè)轉(zhuǎn)染后各組腦膜瘤細(xì)胞中HER2、Ki-67蛋白的表達(dá)。 結(jié)果：經(jīng)EMA、Vimetin、HER2免疫細(xì)胞化學(xué)檢測(cè)，HER2陽(yáng)性表達(dá)的腦膜瘤細(xì)胞原代培養(yǎng)取得成功，經(jīng)過(guò)轉(zhuǎn)染后免疫細(xì)胞化學(xué)檢測(cè)顯示HER2siRNA組較空白組、空載體組、非特異性siRNA組的HER2、Ki-67蛋白表達(dá)明顯下降(P<0.01)；而空白組、空載體組、非特異性siRNA組的HER2、Ki-67蛋白表達(dá)無(wú)明顯變化(P>0.05)，采用Spearman等級(jí)相關(guān)分析,提示腦膜瘤細(xì)胞中HER...

【文章頁(yè)數(shù)】：43 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
ABSTRACT
縮略詞簡(jiǎn)表
第1章 引言
第2章 材料和方法
    2.1 實(shí)驗(yàn)材料
        2.1.1 腦膜瘤標(biāo)本
        2.1.2 主要的試劑
        2.1.3 主要儀器
    2.2 方法
        2.2.1 腦膜瘤細(xì)胞原代培養(yǎng)
        2.2.2 腦膜瘤細(xì)胞的傳代培養(yǎng)
        2.2.3 腦膜瘤培養(yǎng)細(xì)胞的形態(tài)學(xué)觀察
        2.2.4 腦膜瘤細(xì)胞的鑒定
        2.2.5 腦膜瘤培養(yǎng)細(xì)胞轉(zhuǎn)染
        2.2.6 Elivision^TM免疫細(xì)胞化學(xué)法檢查轉(zhuǎn)染后腦膜瘤細(xì)胞中 HER2、Ki-67蛋白的表達(dá)
        2.2.7 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析
第3章 結(jié)果
    3.1 腦膜瘤病理組織學(xué)檢查：
    3.2 腦膜瘤原代培養(yǎng)細(xì)胞免疫組化鑒定
    3.3 腦膜瘤培養(yǎng)細(xì)胞形態(tài)學(xué)觀察
    3.4 HER2 蛋白在轉(zhuǎn)染后各組腦膜瘤細(xì)胞中的表達(dá)
    3.5 Ki-67 在轉(zhuǎn)染后各組腦膜瘤細(xì)胞中的表達(dá)
    3.6 HER2 及 Ki-67 在腦膜瘤細(xì)胞中表達(dá)的相關(guān)性
第4章 討論
第5章 結(jié)論
致謝
參考文獻(xiàn)
攻讀學(xué)位期間的研究成果
綜述
    參考文獻(xiàn)



本文編號(hào)：3976844