本文關(guān)鍵詞：高原環(huán)境下鈣結(jié)合蛋白S100B及S100A4對成年大鼠海馬齒狀回神經(jīng)干細胞增殖分化的影響，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：目的:觀察高原低壓缺氧環(huán)境對大鼠海馬齒狀回神經(jīng)發(fā)生的影響,探索低氧腦損傷后神經(jīng)發(fā)生和神經(jīng)功能修復(fù)的機制,為臨床治療中樞神經(jīng)系統(tǒng)損傷類疾病提供實驗依據(jù)。方法:120只健康成年雄性SD大鼠,隨機分為兩組:模擬海拔5000米組、氣壓52.9千帕(實驗組)和海拔2200米組、氣壓77.406千帕(對照組)。實驗組經(jīng)模擬海拔5000米低壓氧艙處理3天,低壓缺氧3天后進入修復(fù)期,轉(zhuǎn)移至海拔2200米環(huán)境下飼養(yǎng),對照組不經(jīng)模擬海拔5000米低壓氧艙預(yù)處理,直接在海拔2200米環(huán)境飼養(yǎng)。兩組又分為缺氧損傷后低海拔環(huán)境修復(fù)1、3、7、14、28天五個亞組,每組12只。在相應(yīng)時間點行腦組織取材。分別采用H-E染色、Nissl染色觀察腦組織形態(tài)學(xué)的變化;采用Brd U標(biāo)記,免疫組化染色檢測Brd U陽性細胞表達,觀察神經(jīng)干細胞增殖能力變化;免疫熒光雙標(biāo)檢測Brd U和DCX、GFAP的共表達,觀察神經(jīng)干細胞的分化能力;采用免疫組化染色檢測鈣結(jié)合蛋白家族S100B(S100蛋白家族B)、S100A4(S100蛋白家族A4)陽性表達細胞的分布和數(shù)量變化;并采用q RT-PCR檢測S100B、S100A4基因表達情況。結(jié)果:(1)H-E染色結(jié)果顯示,對照組相比較,實驗組在缺氧損傷后1天至3天,海馬顆粒細胞損傷明顯,出現(xiàn)形態(tài)不規(guī)則的異性細胞或呈空泡狀的細胞,并出現(xiàn)核濃縮的凋亡細胞。Nissl染色結(jié)果顯示,與對照組相比較,1天、3天及7天實驗組大鼠海馬區(qū)變性/壞死細胞明顯增多(p0.05),神經(jīng)細胞數(shù)量減少、細胞排列較紊亂,可觀察到深染的變性細胞。(2)Brd U免疫組化染色結(jié)果:實驗組Brd U陽性細胞數(shù)在低壓缺氧損傷后第7、14、28天明顯高于對照組對應(yīng)時間點(p0.05)。(3)Brd U/DCX和Brd U/GFAP免疫熒光雙標(biāo)結(jié)果:高海拔環(huán)境中,低氧損傷后海馬齒狀回存在DCX和GFAP陽性細胞表達。(4)S100B免疫組化染色結(jié)果:實驗組S100B蛋白的表達在低壓缺氧損傷后第1、3天明顯高于對照組對應(yīng)時間點(p0.05),其他時間點S100B蛋白表達量無統(tǒng)計學(xué)差異,S100B蛋白的表達和海馬形態(tài)組織結(jié)構(gòu)損傷的程度基本相一致。(5)S100A4免疫組化染色結(jié)果:實驗組S100A4蛋白的表達在低壓缺氧損傷后第3、7、14天明顯高于對照組對應(yīng)時間點(p0.05),28天組蛋白表達量無統(tǒng)計學(xué)差異,和神經(jīng)干細胞增殖的時間點基本一致(6)q RT-PCR檢測S100B、S100A4基因表達,結(jié)果顯示,實驗組S100A4基因在低氧損傷后3天、7天、14天組表達明顯高于對照祖(p0.05);實驗組S100B基因在低氧損傷后1天、3天組表達明顯高于對照組(p0.05)。結(jié)論:1、高海拔低壓缺氧刺激,激活大鼠海馬齒狀回顆粒細胞下層的神經(jīng)干細胞增殖。2、低壓缺氧腦損傷后大鼠海馬齒狀回增殖的神經(jīng)干細胞可以分化為神經(jīng)元或神經(jīng)膠質(zhì)細胞。3、高海拔低壓缺氧刺激可誘導(dǎo)鈣結(jié)蛋白S100B和S100A4蛋白表達上調(diào),過度表達的S100B通過激活一定的信號途徑,參與誘導(dǎo)海馬細胞損傷或凋亡;但高表達的鈣結(jié)合蛋S100A4可能參與海馬神經(jīng)干細胞的增殖和分化進程。
【關(guān)鍵詞】：低壓缺氧 大鼠 海馬 S100B S100A4 神經(jīng)干細胞
【學(xué)位授予單位】：青海大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號】：R741
【目錄】：

• 摘要4-6
• Abstract6-11
• 英文縮寫一覽表11-12
• 第1章 前言12-15
• 第2章 材料與方法15-30
• 2.1 實驗材料和儀器15-17
• 2.1.1 實驗動物15
• 2.1.2 實驗試劑15-16
• 2.1.3 實驗器材16-17
• 2.2 方法17-21
• 2.2.1 高原缺氧模擬條件17
• 2.2.2 動物分組17
• 2.2.3 BrdU標(biāo)記17-18
• 2.2.4 實驗相關(guān)試劑的配置18-20
• 2.2.5 組織取材20
• 2.2.6 腦組織石蠟切片的制備20-21
• 2.3 形態(tài)學(xué)及分子學(xué)水平研究21-29
• 2.3.1 HE染色21-22
• 2.3.2 Nissl染色22
• 2.3.3 免疫組織化學(xué)染色22-25
• 2.3.4 免疫熒光組織化學(xué)染色25-26
• 2.3.5 RT-PCR檢測S100B、S100A4、HIF-1ɑ 基因表達水平26-29
• 2.4 統(tǒng)計學(xué)處理29-30
• 第3章 結(jié)果30-42
• 3.1 高原缺氧損傷模型的建立30
• 3.2 低壓缺氧環(huán)境下海馬齒狀回形態(tài)學(xué)變化30-32
• 3.2.1 HE染色觀察30-31
• 3.2.2 Nissl染色觀察31-32
• 3.3 低壓缺氧環(huán)境下海馬齒狀回神經(jīng)干細胞的增殖和分化32-35
• 3.3.1 BrdU免疫組織化學(xué)染色觀察32-33
• 3.3.2 免疫熒光組織化學(xué)染色觀察33-35
• 3.4 低壓缺氧環(huán)境下海馬齒狀回S100A4 和S100B的表達35-42
• 3.4.1 成年大鼠S100B、S100A4mRNA Real-time PCR結(jié)果35-37
• 3.4.2 不同海拔條件下S100B表達量比較分析37
• 3.4.3 不同海拔條件下S100A4 表達量比較分析37-38
• 3.4.4 S100B免疫組織化學(xué)染色觀察38-40
• 3.4.5 S100A4 免疫組織化學(xué)染色觀察40-42
• 第4章 討論42-45
• 第5章 結(jié)論45-46
• 參考文獻46-49
• 致謝49-50
• 綜述50-62
• 參考文獻57-62
• 作者簡介62

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本文編號：397604