發(fā)布時間：2017-05-25 07:14

  本文關(guān)鍵詞：增加Cj的灌胃頻率可使Hartley豚鼠的周圍神經(jīng)損傷加重，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：目的:1在聯(lián)合百日咳佐劑條件下,空腸彎曲菌的灌胃頻率是否對Hartley豚鼠的周圍神經(jīng)損傷有影響。2為進一步完善空腸彎曲菌(Campylobacter jejuni,Cj)經(jīng)自然途徑感染Hartley豚鼠致周圍神經(jīng)病的動物模型及研制疫苗提供依據(jù)。方法:1菌株的選擇:從空腸彎曲菌菌株庫中選取lulei株作為實驗菌株。2菌懸液的制備:對凍存的空腸彎曲菌lulei株進行復蘇、傳代,及形態(tài)、生化學鑒定,菌株純化后配制成3×108cfu/ml的空腸彎曲菌布氏肉湯菌懸液。3實驗動物的分組:將SPF級健康的4周齡Hartley豚鼠32只,經(jīng)適應期飼養(yǎng)1周后,依據(jù)體重、體重增長速度及是否容易灌胃等條件篩選出28只健康的豚鼠。隨機分為2個實驗組和1個對照組,實驗組根據(jù)空腸彎曲菌lulei株的不同灌胃頻率分為A組和B組。實驗組每組12只豚鼠,對照組4只。依據(jù)不同的解剖時間(末次灌喂后第6、12、18、24天)將實驗組和對照組隨機分為4個亞組,即A1、A2、A3、A4;B1、B2、B3、B4;C1、C2、C3、C4。實驗組每個亞組3只豚鼠,對照組每個亞組1只豚鼠。4攻毒方案:各組Hartley豚鼠均在第1次灌胃后的當天和第7天,2次腹腔注射1μg/ml的百日咳毒素(pertussis toxin,PT)0.5ml。實驗組A組每隔1天灌胃1次,共10次,實驗組B組每隔2天灌胃1次,共7次,對照組C組為僅腹腔注射百日咳毒素。Hartley豚鼠在每次灌喂前均禁食12小時、禁水3小時。A、B組每只Hartley豚鼠每次均灌喂3×108cfu/ml的空腸彎曲菌菌懸液2ml。灌喂后立即給予Hartley豚鼠食物和水。5實驗動物的觀察:自適應期起每天觀察Hartley豚鼠的活動情況、日常的精神狀態(tài)、皮毛色澤、聲音及是否有腹瀉等,并定期稱量體重。采用重復測量方差分析法,比較各組Hartley豚鼠的體重變化有無統(tǒng)計學差異。6取材:于末次灌喂后第6、12、18、24天分批解剖相應的組別,即第一次A1組、B1組、C1組,第二次A2組、B2組、C2組,第三次A3組、B3組、C3組,第四次A4組、B4組、C4組。4%水合氯醛(10ug/g)麻醉豚鼠,4%多聚甲醛灌注解剖后,分別取雙側(cè)坐骨神經(jīng)近端保存于4%多聚甲醛中,擇期進行鋨酸染色、HE染色及Luxol-fast-blue鍍銀染色。7坐骨神經(jīng)病理觀察及統(tǒng)計:每只豚鼠的右側(cè)坐骨神經(jīng)經(jīng)兩次取材石蠟包埋后進行HE染色及Luxol-fast-blue鍍銀染色觀察神經(jīng)病理改變。每只豚鼠的左側(cè)坐骨神經(jīng)經(jīng)鋨酸染色后,隨機分離100根神經(jīng)單絲,單盲法在光鏡下進行觀察,并計算出有病變的神經(jīng)單絲個數(shù),計算其發(fā)病率(周圍神經(jīng)單絲病變率=病變單絲數(shù)/100*100%),采用統(tǒng)計學軟件SPSS13.0根據(jù)病變率進行χ2檢驗,比較各組的周圍神經(jīng)單絲病變率有無差異及實驗組各亞組的周圍神經(jīng)單絲病變率有無差異。結(jié)果:1實驗動物的觀察1.1臨床癥狀Hartley豚鼠經(jīng)空腸彎曲菌口服灌胃后,根據(jù)臨床癥狀評分標準(參考Hartley豚鼠EAN模型的評分標準)進行評分均為0級。第四次灌胃后第2天(即首次灌胃后第8天),實驗組A組的25號、30號、32號和27號出現(xiàn)運動減少、抓其時掙扎力弱,27號還出現(xiàn)聲音音量減低。上述豚鼠均于2天后恢復正常。末次灌胃后第6天(即首次灌胃后第22天),32號豚鼠出現(xiàn)臀部脫毛現(xiàn)象,于其后第9天開始好轉(zhuǎn),到解剖前仍未完全恢復。1.2體重經(jīng)重復測量單因素方差分析后,實驗組豚鼠的體重和對照組無顯著差異,P0.05。2周圍神經(jīng)病理表現(xiàn)2.1鋨酸染色實驗A組和B組Hartley豚鼠坐骨神經(jīng)均可見神經(jīng)單絲粗細不均,髓鞘向內(nèi)側(cè)突起、節(jié)段性皺縮、缺失;髓鞘內(nèi)有卵圓狀物質(zhì)沉積和蟲蝕樣缺損,多見于郎飛氏結(jié)處;髓鞘外側(cè)成鋸齒狀突起,呈“長城樣”改變。實驗組B組52號鼠分離出較為明顯的“華勒樣變性”的神經(jīng)單絲。對照組Hartley豚鼠坐骨神經(jīng)可見神經(jīng)單絲邊緣光滑,粗細均勻。2.2 HE染色實驗組可見軸索的斷裂、縮窄,髓鞘的缺失。對照組可見軸索光滑、粗細均勻。2.3 Luxol-fast-blue鍍銀染色鍍銀染色可見:實驗組軸索的斷裂、縮窄。Luxol-fast-blue鍍銀染色可見:實驗組軸索的斷裂、縮窄,髓鞘的缺失。3周圍神經(jīng)單絲病變率的統(tǒng)計分析實驗組中存在周圍神經(jīng)損傷的豚鼠占豚鼠總數(shù)的100%。對照組神經(jīng)單絲病變率為4.75%,實驗組A組、B組神經(jīng)單絲病變率分別為45.58%、32.17%。其中A組17號豚鼠和B組57號豚鼠神經(jīng)單絲病變率分別為34.00%、45.00%。據(jù)統(tǒng)計圖顯示其可能為離群值。剔除離群值后,對照組神經(jīng)單絲病變率仍為4.75%,實驗組A組、B組神經(jīng)單絲病變率分別為46.64%、31.00%。采用SPSS 13.0統(tǒng)計軟件進行統(tǒng)計分析:1.未刪除離群值時,對各組Hartley豚鼠坐骨神經(jīng)單絲的病變率進行χ2檢驗。得出P0.05(χ2=226.055),認為三組豚鼠神經(jīng)單絲的病變率不全相等。進一步行組間比較,采用χ2分割法,檢驗水準取α=0.05,校正后檢驗水準α′=0.0167。兩兩比較可見:A組神經(jīng)單絲的病變率B組C組,且統(tǒng)計學存在差異。2.刪除離群值后,得出P0.05(χ2=236.430),認為三組豚鼠神經(jīng)單絲的病變率不全相等。兩兩比較可見:A組神經(jīng)單絲的病變率B組C組,且統(tǒng)計學存在差異。所以,無論是剔除離群值前還是剔除后,A組神經(jīng)單絲的病變率B組C組。依據(jù)不同的解剖時間點,實驗組A組各亞組A1、A2、A3、A4的神經(jīng)單絲的病變率分別為43.33%、45.67%、49.00%、44.33%。實驗組B組各亞組B1、B2、B3、B4的神經(jīng)單絲的病變率分別為30.00%、35.33%、29.00%、34.33%。采用SPSS 13.0統(tǒng)計軟件進行χ2檢驗。雙側(cè)性檢驗,檢驗水準取α=0.05。1.對A組的4個亞組進行統(tǒng)計分析,P0.05(χ2=2.214),認為統(tǒng)計學無差異。2.對B組的4個亞組進行統(tǒng)計分析,P0.05(χ2=4.048),認為統(tǒng)計學無差異。所以,可以認為在攻毒完成后的24天內(nèi),周圍神經(jīng)單絲的損傷維持在一個較為恒定的水平,不存在加重與減輕的趨勢。結(jié)論:1從空腸彎曲菌菌株庫中選取的lulei株經(jīng)口服灌胃能導致所有的豚鼠都出現(xiàn)周圍神經(jīng)損傷。2在聯(lián)合百日咳佐劑條件下,增加空腸彎曲菌的灌胃頻率可使Hartley豚鼠的周圍神經(jīng)損傷加重。3周圍神經(jīng)的自我恢復時間超過24天。
【關(guān)鍵詞】：空腸彎曲菌 周圍神經(jīng)病 Hartley豚鼠 灌胃頻率 百日咳毒素
【學位授予單位】：河北醫(yī)科大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2016
【分類號】：R745
【目錄】：

• 中文摘要4-8
• 英文摘要8-13
• 前言13-14
• 材料與方法14-27
• 結(jié)果27-30
• 附圖30-41
• 附表41-43
• 討論43-47
• 結(jié)論47-48
• 參考文獻48-50
• 綜述 AMAN型吉蘭-巴雷綜合征50-61
• 參考文獻56-61
• 致謝61-62
• 個人簡歷62-63

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本文編號：393022