本文關(guān)鍵詞：GLP-2對LPS誘導(dǎo)的小膠質(zhì)細(xì)胞活化的影響及機制，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：帕金森疾病(Parkinson Disease,PD)是一種常見的神經(jīng)組織退行性疾病。PD的主要病因是中腦黑質(zhì)區(qū)多巴胺神經(jīng)元的大量損失,其主要特征包括短暫運動遲緩,肌肉僵直,腳步混亂等。近年來越來越多針對PD的研究表明神經(jīng)炎癥反應(yīng)在PD的發(fā)生發(fā)展中起到至關(guān)重要的作用。在神經(jīng)炎癥發(fā)生過程中小膠質(zhì)細(xì)胞是主要的效應(yīng)細(xì)胞,研究中發(fā)現(xiàn)過度活化的小膠質(zhì)細(xì)胞會產(chǎn)生大量的促炎因子,這些具有神經(jīng)毒性的炎性因子會大量產(chǎn)生并累積,從而導(dǎo)致中腦內(nèi)炓質(zhì)區(qū)中的多巴胺神經(jīng)元選擇性死亡進(jìn)而引起PD的發(fā)生。盡管目前我們已經(jīng)明確神經(jīng)炎癥反應(yīng)與PD的發(fā)病機理有關(guān),但其作用機制尚不清楚。因此,抑制神經(jīng)炎癥反應(yīng)的發(fā)生可能在治療PD的過程中成為一處關(guān)鍵環(huán)節(jié)。三十三個氨基酸組成的胰高血糖素樣肽-2(GLP-2)是來源于腸粘膜內(nèi)分泌L細(xì)胞的一類多肽物質(zhì)。這種小分子多肽主要分布于回,結(jié)腸部位內(nèi)。GLP-2可以經(jīng)由其受體GLP-2R所介導(dǎo)發(fā)揮多種生物學(xué)特性及作用,如促進(jìn)正常小腸保護(hù)、修復(fù)受到損傷的腸粘膜,促進(jìn)腸粘膜生長及發(fā)育及增加腸道的血液流量等。這其中就包括有效的抑制炎癥作用。近年來發(fā)現(xiàn)其在外周起到非常重要的抗炎作用。更有研究表明其對于活化后的腹腔巨噬細(xì)胞有明顯的抗炎作用。另外,最新的研究成果發(fā)現(xiàn)GLP-2在腦的多個部位有表達(dá)。本實驗探究了GLP-2對活化后的小膠質(zhì)細(xì)胞系BV-2的抗炎作用及其作用機制。以期揭示GLP-2對于神經(jīng)炎癥乃至PD的潛在治療作用。首先利用不同濃度的GLP-2(10~(-9)、10~(-8)、10~(-7)、10~(-6)M)預(yù)處理BV-2細(xì)胞1 h,然后由脂多糖(LPS)進(jìn)行刺激,收集細(xì)胞培及養(yǎng)上清提取RNA和蛋白樣品。利用熒光定量RT-PCR方法檢測促炎酶類(i NOS和COX-2)以及促炎細(xì)胞因子(IL-1β、IL-6和TNF-α)基因水平變化;利用ELISA方法檢測促炎細(xì)胞因子蛋白水平變化;利用Western blotting方法檢測促炎酶類蛋白表達(dá)水平變化。然后利用PCR檢測BV-2中是否存在GLP-2受體-GLP-2R,之后利用Western blotting檢測了兩條關(guān)鍵炎癥信號通路MAPKs和NF-κB中關(guān)鍵因子的磷酸化水平以研究GLP-2發(fā)揮抗炎功能的機理。結(jié)果表明GLP-2能顯著抑制BV-2細(xì)胞中LPS誘導(dǎo)的i NOS、COX-2、IL-1β、IL-6、TNF-α基因和蛋白水平的增加。通過PCR檢測BV-2后發(fā)現(xiàn)該小膠質(zhì)細(xì)胞系中并不存在GLP-2受體(GLP-2R)的表達(dá)。利用Gαs蛋白偶聯(lián)受體阻斷劑NF449處理BV-2后能夠明顯抑制GLP-2的抗炎作用。Western blotting結(jié)果顯示GLP-2在BV-2細(xì)胞中能降低LPS誘導(dǎo)的ERK1/2、JNK1/2以及p65的磷酸化水平,然而對p38的磷酸化水平?jīng)]有影響。以上結(jié)果說明GLP-2是通過調(diào)節(jié)MAPK信號通路中的ERK、JNK及NF-κB信號通路中的的p65的磷酸化水平來抑制小膠質(zhì)細(xì)胞活化從而達(dá)到抑制炎癥的作用。
【關(guān)鍵詞】：帕金森病 神經(jīng)炎癥 小膠質(zhì)細(xì)胞 GLP-2 LPS
【學(xué)位授予單位】：吉林大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號】：R742.5
【目錄】：

• 中文摘要5-7
• Abstract7-13
• 前言13-15
• 第一篇 文獻(xiàn)綜述15-29
• 第一章 GLP-215-22
• 1 前言15-16
• 2 GLP-2 腸道產(chǎn)生的神經(jīng)信號肽16
• 3 GLP-2 在胃腸道中的作用16-18
• 4 GLP-2 與腸道神經(jīng)系統(tǒng)中炎癥反應(yīng)18-19
• 5 GLP-2 的創(chuàng)新前景19-21
• 6 總結(jié)21-22
• 第2章 帕金森疾病中的神經(jīng)炎癥和小膠質(zhì)細(xì)胞22-29
• 1 帕金森病中的神經(jīng)炎癥22-26
• 2 帕金森病中的小膠質(zhì)細(xì)胞26-29
• 第二篇 研究內(nèi)容29-54
• 第1章 GLP-2 對LPS誘導(dǎo)的小膠質(zhì)細(xì)胞系BV-2 中促炎酶類和促炎細(xì)胞因子的影響29-43
• 1 實驗材料及實驗方法30-38
• 2 實驗結(jié)果38-40
• 3 討論40-42
• 4 小結(jié)42-43
• 第2章 GLP-2R在GLP-2 抗炎功能中的作用43-49
• 1 實驗材料與方法43-45
• 2 實驗結(jié)果45-47
• 3 討論47-48
• 4 結(jié)論48-49
• 第3章 GLP-2 抑制LPS誘導(dǎo)BV-2 細(xì)胞中MAPKS和NF-ΚB信號通路的影響49-54
• 1 實驗材料與方法49-51
• 2 結(jié)果51-52
• 3 討論52-53
• 4 小結(jié)53-54
• 結(jié)論54-55
• 參考文獻(xiàn)55-67
• 導(dǎo)師簡介67-68
• 作者簡介68-69
• 致謝69

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本文編號：392156