目的:通過建立小鼠腦微血管內(nèi)皮細(xì)胞(bEnd.3)氧糖剝奪/再復(fù)氧(OGD/R)模型,探討24-乙酰澤瀉醇A對(duì)OGD/R損傷bEnd.3細(xì)胞的保護(hù)作用及其與miR-92a-3p的關(guān)系。方法:1.24-乙酰澤瀉醇A對(duì)OGD/R損傷bEnd.3細(xì)胞的保護(hù)作用研究(1)采用缺氧培養(yǎng)箱建立OGD/R模型,用cck8法檢測(cè)不同缺氧時(shí)間bEnd.3細(xì)胞的活性,選擇相對(duì)活性50%-60%作為造模條件。(2)檢測(cè)1mg/L、10mg/L和20mg/L的24-乙酰澤瀉醇A對(duì)OGD/R損傷bEnd.3細(xì)胞形態(tài)及活性的影響;一氧化氮試劑盒、乳酸脫氫酶試劑盒分別檢測(cè)NO和LDH;ELISA試劑盒檢測(cè)24-乙酰澤瀉醇A對(duì)TNF-α和IL-1β的影響;western bolt檢測(cè)緊密連接蛋白(claudin-5、occludin、ZO-1)的表達(dá),探討24-乙酰澤瀉醇A對(duì)OGD/R損傷細(xì)胞是否有保護(hù)作用。(3)通過qPCR檢測(cè)24-乙酰澤瀉醇A對(duì)OGD/R損傷細(xì)胞miR-92a-3p和miR-92a-1-5p表達(dá)的影響。通過Targetscan7.2和miRDB數(shù)據(jù)庫尋找miR-92a-3p可能靶基因,進(jìn)一步探討...

【文章頁數(shù)】：66 頁

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

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英文縮略詞
中文摘要
Abstract
引言
第一部分 24-乙酰澤瀉醇A對(duì) OGD/R損傷b End.3 細(xì)胞的保護(hù)作用研究
    1 實(shí)驗(yàn)材料
        1.1 實(shí)驗(yàn)細(xì)胞
        1.2 實(shí)驗(yàn)儀器
        1.3 實(shí)驗(yàn)試劑
        1.4 藥物及主要試劑配制
    2 實(shí)驗(yàn)方法
        2.1 細(xì)胞培養(yǎng)、傳代、凍存、復(fù)蘇
        2.2 模型建立及實(shí)驗(yàn)分組
        2.3 24 -乙酰澤瀉醇A對(duì) OGD/R損傷b End.3 細(xì)胞活性的影響
        2.4 酶聯(lián)免疫反應(yīng)(ELISA)法檢測(cè)培養(yǎng)上清TNF-α和IL-1β含量
        2.5 檢測(cè)細(xì)胞上清NO、LDH的含量
        2.6 western blot檢測(cè)claudin-5、occludin、ZO-1 蛋白表達(dá)
        2.7 qPCR法檢測(cè)miR-92a-3p和miR-92a-1-5p的表達(dá)水平
    3 統(tǒng)計(jì)分析
    4 實(shí)驗(yàn)結(jié)果
        4.1 OGD/R 對(duì) b End.3 細(xì)胞活性的影響
        4.2 24-乙酰澤瀉醇 A 對(duì) b End.3 細(xì)胞活性的影響
        4.3 24 -乙酰澤瀉醇A對(duì) OGD/R損傷b End.3 細(xì)胞形態(tài)及活性的影響
        4.4 24 -乙酰澤瀉醇A對(duì) OGD/R損傷b End.3 細(xì)胞NO的影響
        4.5 24 -乙酰澤瀉醇A對(duì) OGD/R損傷b End.3 細(xì)胞LDH的影響
        4.6 24 -乙酰澤瀉醇A對(duì) OGD/R損傷b End.3 細(xì)胞相關(guān)炎性因子的影響
        4.7 24 -乙酰澤瀉醇A對(duì) OGD/R損傷b End.3 細(xì)胞緊密連接蛋白表達(dá)的影響
        4.8 24 -乙酰澤瀉醇A對(duì) OGD/R損傷b End.3 細(xì)胞miR-92a-3p和 miR-92a-1-5p表達(dá)的影響
第二部分 MicroRNA-92a-3p對(duì) OGD/R損傷腦微血管內(nèi)皮細(xì)胞的調(diào)控作用研究
    1 實(shí)驗(yàn)材料
        1.1 實(shí)驗(yàn)細(xì)胞
        1.2 實(shí)驗(yàn)儀器
        1.3 實(shí)驗(yàn)試劑
        1.4 20μmol mi RNA儲(chǔ)存液配制
    2 實(shí)驗(yàn)方法
        2.1 細(xì)胞培養(yǎng)、傳代、凍存
        2.2 模型建立、細(xì)胞轉(zhuǎn)染及分組
        2.3 miR-92a-3p轉(zhuǎn)染對(duì)OGD/R損傷b End.3 細(xì)胞活性的影響
        2.4 檢測(cè)細(xì)胞上清NO、LDH的含量
        2.5 western blot檢測(cè)claudin-5、occludin、ZO-1 蛋白表達(dá)
        2.6 miR-92a-3p預(yù)測(cè)靶基因的驗(yàn)證
    3 統(tǒng)計(jì)分析
    4 結(jié)果
        4.1 miR-92a-3p mimics和miR-92a-3p inhibitor轉(zhuǎn)染細(xì)胞后miR-92a-3p的表達(dá)
        4.2 miR-92a-3p轉(zhuǎn)染對(duì)OGD/R損傷b End.3 細(xì)胞活性的影響
        4.3 miR-92a-3p轉(zhuǎn)染對(duì)OGD/R損傷b End.3 細(xì)胞NO的影響
        4.4 miR-92a-3p轉(zhuǎn)染對(duì)OGD/R損傷b End.3 細(xì)胞LDH的影響
        4.5 miR-92a-3p轉(zhuǎn)染對(duì)OGD/R損傷b End.3 細(xì)胞緊密連接蛋白的影響
        4.6 miR-92a-3p調(diào)節(jié)occludin和ZO-1 的表達(dá)
討論
    1 24-乙酰澤瀉醇A對(duì)緊密連接的保護(hù)作用
    2 24-乙酰澤瀉醇A的抗炎作用
    3 24-乙酰澤瀉醇A調(diào)節(jié)NO的合成和LDH的溢出
    4 miR-92a-3p的調(diào)控作用
結(jié)論
不足和展望
參考文獻(xiàn)
文獻(xiàn)綜述
    參考文獻(xiàn)
致謝
作者簡(jiǎn)歷



本文編號(hào)：3919440