發(fā)布時間：2024-03-04 23:38

　　目的:本研究旨在探討miRNA-451/MIF及其下游信號通路在腦微血管損傷、血管形成、神經(jīng)炎癥及神經(jīng)元自噬過程中的作用,闡明其在帕金森病(PD)認知障礙發(fā)生發(fā)展中的作用及機制。方法:采用ExoQuick從PD患者血漿中分離外泌體,分別用透射電鏡、NanoSight納米顆粒分析儀鑒定其形態(tài)學,Western blot檢測外泌體標記蛋白CD9、CD63的表達,使用高通道測序檢測外泌體miRNA的表達差異。利用液相芯片和ELISA法對PD患者腦脊液蛋白質(zhì)進行鑒定,利用TBSS技術分析腦白質(zhì)結(jié)構(gòu)異常改變及模式,探討PD認知障礙發(fā)生的腦結(jié)構(gòu)改變及分子機制,并為其提供分子生物和影像學標志物。將培養(yǎng)的小鼠腦微血管內(nèi)皮細胞(bend.3)分別轉(zhuǎn)染miRNA-451和miRNA-451 inhibitor慢病毒以過表達或沉默miRNA-451,分別檢測:(1)CCK-8增殖實驗和平板克隆形成實驗檢測各組bend.3細胞增殖和克隆形成能力;(2)Transwell和劃痕實驗檢測各組bend.3細胞的遷移能力;(3)管腔形成實驗檢測各組bend.3細胞血管形成能力;(4)Western blot檢測各組b...

【文章頁數(shù)】：173 頁

【學位級別】：博士

【部分圖文】：

圖1目前己知的PD基巨，，Yaylpeu7wiirt

前言??ｇｅｎｅ，?ＧＢＡ）基因突變可能是ＰＤ發(fā)生的危險因素之一＿，這一系列發(fā)現(xiàn)提示了??ＰＤ的致病突變基因存在多樣性（圖１）?［２１＿２化??Ｌｏｃｕｓ?Ｃｈｒｏｍｏｓｏｍｅ?Ｇｅｎｅ?Ｉｎｈｅｒｉｔａｎｃｅ?—??ＰＡＲＫｌ?４ｑ?ＳＮＣＡ?（ｐｏｉｎｔ?ｍｕｔａｔｉｏｎ）?....

圖３神經(jīng)退行性疾病血腦屏障損傷示意圖??Ｆｉｇ?３?Ｂｌｏｏｄ－ｂｒａｉｎ?ｂａｒｒｉｅｒ?ｂｒｅａｋｄｏｗｎ?ｉｎ?ｎｅｕｒｏｄｅｇｅｎｅｒａｔｉｖｅ?ｄｉｓｏｒｄｅｒ??

②Ｐ－ｇｐ蛋白與中國人群ＭＤＲ１基因多態(tài)性研宄有關，且ＭＤＲ１基因??的某些多態(tài)性對于ＰＤ可能具有保護作用。由此可見，血流低灌注過程中損傷涉??及了微血管－神經(jīng)元及血腦屏障的穩(wěn)態(tài)平衡的破壞。如圖３所示，??Ｐｅｒｉｃｙｌｅ??—ｉ??Ｂａｓｅｍｅｎｔ?＇?＾?１??ｔｎｅｍｂｒａ....

圖3.1血漿外泌體粒徑和濃度分析

病程?一?１０?１??ＵＰＤＲＳ－ＩＩＩ?—?１６?２７??Ｈ－Ｙ?分級?一?Ｌ５?１．５??ＭＭＳＥ?２５?３０?２８??ＭｏＣＡ?１６?２９?２７??ＨＡＭＡ?１８?６?３??ＨＡＭＤ?１８?２?３??高血壓?無無?無??糖尿病?無無無??ＢＭＩ?２２Ａ?１９Ａ?２７．５??....

圖３．２外泌體表面標志物和形態(tài)學特征

四旋蛋白是常見的外泌體特異性標志物，主要包括ＣＤ９，?ＣＤ６３和ＣＤ８１。??本研究采用Ｗｅｓｔｅｒｎ?ｂｌｏｔ方法檢測外泌體標記蛋白ＣＤ９，ＣＤ６３的表達情況，發(fā)??現(xiàn)提取外泌體表達ＣＤ９和ＣＤ６３?（見圖３．２Ａ）。??３．５透射電鏡鑒定外泌體形態(tài)??透射電鏡下觀察到外周血外....

本文編號：3919345