本文關鍵詞：新生大鼠腦室出血后鐵超載和腦損傷及米諾環(huán)素的干預研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：腦室出血(intraventricular hemorrhage,IVH)具有高致殘率和高致死率的特點,在成人以原發(fā)性腦出血(intracerebral hemorrhage,ICH)擴展至腦室最為常見,而在新生兒主要原因為生發(fā)基質出血(germinal matrix hemorrhage,GMH)。生發(fā)基質出血是指來源于未成熟室管膜下生發(fā)基質區(qū)域的出血,在妊娠32周分娩中它的發(fā)生率高達20%。在美國,每年有超過12000名早產(chǎn)兒發(fā)生生發(fā)基質出血,而在我國,這一數(shù)字相比更多。臨床研究表明,新生兒GMH后可導致腦室擴張和遠期的神經(jīng)損傷,包括腦萎縮、癲癇發(fā)作和學習記憶功能的損傷。因此,研究新生兒腦室出血相關損傷機制和防護策略具有重要意義。目前,腦室出血導致腦損傷和腦積水的機制研究仍然十分欠缺,確切致傷因素及致傷機制仍有待進一步研究,臨床也缺乏有效的治療措施和治療藥物,而新生兒腦室出血研究更加薄弱,基礎研究和臨床研究都亟需加強。課題組長期從事腦出血、腦室出血后腦損傷相關研究,近期在成年大鼠IVH模型的初步研究表明,鐵超載有可能參與了IVH后腦室擴張和神經(jīng)元損傷的重要機制,證明了去鐵敏螯合鐵的作用可以顯著改善腦室出血后腦損傷。然而,目前鐵超載和鐵代謝相關蛋白在新生兒腦室出血相關模型中的研究仍未見報道。新生兒自我腦保護能力較弱,特別是有證據(jù)顯示新生兒腦組織對鐵離子損傷更加敏感,因此,我們推測:新生兒GMH后腦內積血逐步代謝后產(chǎn)生大量鐵離子,可能導致顯著的腦鐵超載,參與GMH后腦損傷及慢性腦積水的發(fā)生發(fā)展,鐵有可能成為新生兒腦出血治療的一個重要靶點。新近研究發(fā)現(xiàn),米諾環(huán)素螯合鐵的效應在多種腦出血模型中被證實具有腦保護作用,作為一個最有潛力的神經(jīng)保護劑,我們推測米諾環(huán)素螯合鐵的作用有可能在新生兒腦室出血中發(fā)揮重要的干預作用。因此,本課題以GMH后鐵超載為主要切入點,觀察新生大鼠實驗性腦室出血后腦損傷、腦積水和鐵代謝特征,采用米諾環(huán)素進行干預,觀察探索米諾環(huán)素對新生大鼠腦室出血后腦損傷的干預效應和相關機制,分兩部分研究驗證上述推測:第一部分就是通過建立新生大鼠GMH模型,觀察出血后鐵超載和鐵相關蛋白的表達情況,以探討鐵離子在新生兒GMH后腦損傷病理生理過程中的可能發(fā)生的作用。第二部分就是在建立好新生大鼠GMH模型后,給予米諾環(huán)素干預,觀察米諾環(huán)素在GMH模型中的鐵螯合作用和對鐵誘導腦損傷的保護效應,探討米諾環(huán)素神經(jīng)保護作用的機制。一、新生大鼠腦室出血后鐵超載及鐵相關蛋白的表達目的通過膠原酶誘導的方法建立新生大鼠GMH模型,動態(tài)觀察出血后腦鐵沉積及鐵代謝相關蛋白表達變化,評估鐵離子超載在腦室出血后腦損傷中作用。方法實驗動物分成膠原酶出血組和對照組,分別將膠原酶Ⅶ(0.3 U/μL)1μL或生理鹽水1μL注入P7大鼠右側基底節(jié)。分別于術后1d行腦組織含水量檢測,術后1、3、7d采用Western blot法觀察檢測血HO-1以及鐵蛋白輕鏈、重鏈的表達情況,術后1、3、7d、28d切片用于增強普魯士藍染色和免疫組化染色。結果1.膠原酶誘導法成功建立了新生大鼠實驗性GMH模型,出血后24小時,腦組織含水量與對照組相比顯著上升。2.增強普魯士藍染色顯示出血后1、3、7、28天基底節(jié)和腦室周圍大量鐵沉積。3.免疫組織化學染色、Western blot顯示基底節(jié)和腦室周圍HO-1和鐵蛋白表達增加。HO-1含量呈先升高后降低的趨勢,在第3天達到高峰。鐵蛋白輕鏈、鐵蛋白重鏈含量呈逐漸上升的趨勢,在第7天達到高峰。結論本部分課題研究通過注射膠原酶誘導腦出血的方法在成功建立了新生大鼠GMH模型,觀察了出血后腦積水以及鐵超載和鐵相關蛋白HO-1、鐵蛋白的表達變化,證明了新生大鼠GMH后存在且持久的鐵超載、并伴有血腫和腦室周圍組織HO-1、鐵蛋白等鐵代謝相關蛋白表達上調。二、新生大鼠腦室出血后腦損傷及米諾環(huán)素的干預效應通過建立新生大鼠腦室出血模型,給予米諾環(huán)素干預,觀察新生大鼠GMH后的腦損傷情況及米諾環(huán)素的腦保護作用和鐵螯合效應,探討米諾環(huán)素神經(jīng)保護作用的機制。目的方法首先,為選擇合適的米諾環(huán)素初次給藥時間,預實驗中,在膠原酶誘導腦出血后15分鐘、1小時、2小時分別給予米諾環(huán)素腹腔注射(45 mg/kg),觀察干預后24小時新生大鼠腦組織含水量變化情況。根據(jù)腦組織含水量改善情況,我們選擇膠原酶誘導腦出血后15分鐘作為初次給藥時間。隨后,本次實驗分為對照組(Sham)、腦室出血+米諾環(huán)素干預組(GMH+MC)和腦室出血+溶劑干預組(GMH+Veh),通過膠原酶誘導腦室出血后分別給予米諾環(huán)素(45 mg/kg,GMH+MC組)或溶劑(GMH+Veh)腹腔注射7天(膠原酶注射后15分鐘,P8至P13,每天1次),對照組僅給予生理鹽水基底節(jié)注射,損傷后24小時測定腦組織檢測腦水含量和神經(jīng)元變性、凋亡情況,損傷后7天行Western blotting免疫印跡分析鐵蛋白重鏈、輕鏈的變化情況。損傷后1、7、28行MRI掃描觀察腦室擴張、腦組織缺失情況,行MRI檢測的大鼠在第21天開始進行行為學檢測。結果1.米諾環(huán)素能顯著減輕新生大鼠GMH后急性腦室擴張、腦水腫和神經(jīng)元變性損傷,改善出血后大鼠的運動和神經(jīng)認知功能的損害。2.米諾環(huán)素干預后可顯著減少GMH后7天的腦鐵蛋白水平。結論在新生大鼠GMH后,給予米諾環(huán)素干預,可以顯著改善出血后腦水腫、腦室擴張和腦組織缺失,改善遠期行為學,同時可以下調鐵蛋白的表達,提示米諾環(huán)素螯合鐵的機制可能在新生大鼠GMH后發(fā)揮腦保護作用。米諾環(huán)素有望成為新生兒腦室出血藥物治療的新方向。
【關鍵詞】：腦室出血 生發(fā)基質出血 腦含水量 HO-1 鐵蛋白 腦室出血 生發(fā)基質出血 米諾環(huán)素 鐵 鐵蛋白
【學位授予單位】：第三軍醫(yī)大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2015
【分類號】：R743.34
【目錄】：

• 縮略語表4-5
• 英文摘要5-8
• 中文摘要8-11
• 第一章 前言11-13
• 第二章 新生大鼠腦室出血后鐵超載及鐵相關蛋白的表達13-26
• 2.1 材料與方法13-18
• 2.2 結果18-22
• 2.3 討論22-25
• 2.4 小結25-26
• 第三章 新生大鼠腦室出血后腦損傷及米諾環(huán)素的干預效應26-39
• 3.1 材料與方法27-31
• 3.2 結果31-36
• 3.3 討論36-38
• 3.4 小結38-39
• 全文總結39-40
• 參考文獻40-45
• 文獻綜述 腦出血后鐵超載致繼發(fā)性腦損傷的機制及干預研究進展45-58
• 參考文獻52-58
• 攻讀碩士期間發(fā)表論文58-59
• 致謝59

【共引文獻】

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本文編號：383698