發(fā)布時間：2023-03-30 00:02

　　目的:研究表明長鏈非編碼RNA參與多種疾病的病理生理過程,在維持細胞內(nèi)環(huán)境穩(wěn)態(tài)方面發(fā)揮重要作用。然而長鏈非編碼RNA調(diào)控缺血性腦損傷的具體機制仍不清楚。本研究旨在探究長鏈非編碼RNA Snhg8調(diào)控慢性腦缺血誘導(dǎo)神經(jīng)元凋亡的具體機制。研究方法:利用HT22細胞及C57BL/6 J小鼠構(gòu)建CCI體外模型及在體模型。在CCI體外模型及在體模型中檢測Snhg8,miR-384及Hoxa13的表達水平,應(yīng)用PCR技術(shù)檢測Snhg8和miR-384的表達,應(yīng)用western blot技術(shù)檢測Hoxa13的表達。在HT22細胞中穩(wěn)定轉(zhuǎn)染Snhg8過表達質(zhì)粒、Hoxa13過表達質(zhì)粒及FAM3A過表達質(zhì)粒,瞬時轉(zhuǎn)染agomir-384和antagomir-384,Hoxa13過表達質(zhì)粒(含或不含3’端非翻譯區(qū));在構(gòu)建的細胞系中分別檢測Snhg8,miR-384及Hoxa13的表達。PCR檢測Snhg8及miR-384的表達,應(yīng)用Western blot檢測Hoxa13及FAM3A的表達;流式細胞術(shù)檢測HT22細胞的凋亡率。雙熒光素酶報告基因系統(tǒng)檢測miR-384與Snhg8、Hoxa13的結(jié)合;染色...

【文章頁數(shù)】：48 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
1 前言
2 材料和方法
    2.1 .主要試劑和儀器
        2.1.1 實驗動物
        2.1.2 細胞株
        2.1.3 主要試劑
        2.1.4 主要儀器
    2.2 實驗方法
        2.2.1 細胞培養(yǎng)與CCI處理
        2.2.2 實驗動物與分組
        2.2.3 手術(shù)操作與在體轉(zhuǎn)染
        2.2.4 Real-time PCR
        2.2.5 Western blot實驗
        2.2.6 細胞轉(zhuǎn)染
        2.2.7 流式細胞技術(shù)檢測HT22細胞凋亡
        2.2.8 末端脫氧核苷酸轉(zhuǎn)移酶介導(dǎo)的d UTP缺口末端標記測定法(TUNEL)檢測小鼠海馬神經(jīng)元凋亡
        2.2.9 RNA結(jié)合蛋白免疫沉淀法(RIP)實驗
        2.2.10 染色質(zhì)免疫沉淀(ChIP)
        2.2.11 雙熒光素酶報告基因檢測
        2.2.12 統(tǒng)計學(xué)方法
3 實驗結(jié)果
    3.1 CCI在體模型及體外模型中Snhg8和Hoxa13 低表達,mi R-384 高表達
    3.2 過表達Snhg8 與沉默mi R-384 均可抑制CCI誘導(dǎo)的小鼠海馬神經(jīng)元凋亡
    3.3 Mi R-384 靶向作用于Snhg8 并部分逆轉(zhuǎn)Snhg8 誘導(dǎo)的神經(jīng)元保護作用
    3.4 Hoxa13 通過作用于FAM3A啟動子區(qū)減輕CCI誘導(dǎo)的神經(jīng)元凋亡,過表達FAM3A可抑制神經(jīng)元凋亡
    3.5 過表達mi R-384 通過作用于Hoxa133'UTR端部分逆轉(zhuǎn)過表達Hoxa13 誘導(dǎo)的神經(jīng)保護功能
    3.6 在體實驗中過表達Snhg8 結(jié)合沉默mi R-384 可減輕CCI誘導(dǎo)的神經(jīng)元凋亡
4 討論
5 結(jié)論
本研究創(chuàng)新性的自我評價
參考文獻
綜述
    參考文獻
攻讀學(xué)位期間取得的研究成果
致謝
個人簡介



本文編號：3774767