目的探討慢病毒介導(dǎo)的RNA干擾技術(shù)(RNA interference,RNAi)下調(diào)BCL-2結(jié)合抗凋亡基因(BCL-2 associated anthanogen-1,BAG-1)表達(dá)對氧糖剝奪/再復(fù)氧誘導(dǎo)人神經(jīng)母細(xì)胞瘤細(xì)胞(SH-SY5Y)凋亡及熱休克蛋白70(Heat Shock Protein 70,HSP70)表達(dá)的影響。方法構(gòu)建靶向BAG-1 RNAi慢病毒載體,感染對數(shù)生長期的SH-SY5Y細(xì)胞,抑制BAG-1表達(dá)。采用熒光顯微鏡觀察熒光,嘌呤霉素篩選細(xì)胞,保證感染效率>75%。轉(zhuǎn)染成功后細(xì)胞分組如下:正常細(xì)胞組(未感染慢病毒的正常SH-SY5Y細(xì)胞);慢病毒對照組[感染含增強(qiáng)綠色熒光蛋白(EGFP)基因的慢病毒];BAG-1 RNAi組(即BAG-1基因沉默組,感染含BAG-1基因干擾序列及EGFP的慢病毒),根據(jù)所用序列不同分為BAG-1 RNAi-α組、BAG-1 RNAi-β組。慢病毒感染后72 h采用蛋白質(zhì)免疫印跡實(shí)驗(yàn)(Western Blot)檢測BAG-1 RNAi組細(xì)胞BAG-1蛋白表達(dá)情況,確定干擾效果。4組細(xì)胞分別給予氧糖剝奪4 h,8 h,12...

【文章頁數(shù)】：60 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
引言
材料與方法
    1 實(shí)驗(yàn)對象
    2 實(shí)驗(yàn)材料
    3 實(shí)驗(yàn)方法
    4 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析
    5 實(shí)驗(yàn)流程圖
結(jié)果
    1 SH-SY5Y細(xì)胞形態(tài)學(xué)觀察
    2 慢病毒感染及BAG-1 基因沉默效果
    3 BAG-1 基因沉默導(dǎo)致OGD/R損傷SH-SY5Y細(xì)胞活性下降
    4 BAG-1 基因沉默導(dǎo)致OGD/R誘導(dǎo)SH-SY5Y細(xì)胞凋亡增加
    5 BAG-1 基因沉默對OGD/R損傷SH-SY5Y細(xì)胞HSP70表達(dá)的影響
討論
結(jié)論
參考文獻(xiàn)
綜述
    綜述參考文獻(xiàn)
攻讀學(xué)位期間的研究成果
縮略詞表
致謝



本文編號：3772880