發(fā)布時間：2023-03-03 22:04

　　纖維性肌動蛋白(F-actin)與微管是神經(jīng)元的主要細胞骨架,神經(jīng)元死亡以二者進行性降解為主要特征,因此采用F-actin和微管穩(wěn)定性藥物來加固神經(jīng)元細胞骨架,對于防治神經(jīng)元遲發(fā)性死亡可能具有一定作用。我們前期實驗結(jié)果顯示,癲癇持續(xù)狀態(tài)后,樹突棘F(xiàn)-actin進行性減少,但是樹突干及胞體內(nèi)F-actin卻出現(xiàn)聚集現(xiàn)象。由于樹突棘基底部F-actin附著在樹突干內(nèi)的微管上,我們推測癲癇腦內(nèi)F-actin聚集可能是由于樹突干微管解聚后F-actin失去錨定和支撐作用所致,樹突棘F(xiàn)-actin損傷直接引起神經(jīng)元興奮性異常,而樹突干微管解聚則會加重樹突棘F(xiàn)-actin的損傷。腦缺血與癲癇持續(xù)狀態(tài)的病理過程相似,但是采用腦缺血模型研究海馬神經(jīng)元遲發(fā)性死亡的成功率較高,重復性較好。因此,本項目擬采用匹魯卡品和四血管阻斷法(4-VO)誘導的遲發(fā)性神經(jīng)元死亡模型,進一步探討神經(jīng)元遲發(fā)性死亡后F-actin和微管的動力學變化及神經(jīng)元遲發(fā)性死亡的進程,進而采用細胞骨架穩(wěn)定性藥物探討細胞骨架藥物對遲發(fā)性神經(jīng)元死亡的影響,旨在闡明F-actin和微管在癲癇和腦缺血發(fā)展過程中與神經(jīng)元死亡的關(guān)系,進而探討同時增強...

【文章頁數(shù)】：146 頁

【學位級別】：博士

【文章目錄】：
中文摘要
abstract
英文縮略詞
第1章 文獻綜述
    1.1 遲發(fā)性神經(jīng)元死亡概述
    1.2 遲發(fā)性神經(jīng)元死亡與肌動蛋白細胞骨架關(guān)系
        1.2.1 肌動蛋白細胞骨架概述
        1.2.2 肌動蛋白細胞骨架的分布
        1.2.3 肌動蛋白細胞骨架動態(tài)調(diào)節(jié)
        1.2.4 四血管阻斷法(4-VO)誘導的遲發(fā)性神經(jīng)元后肌動蛋白細胞骨架的變化
    1.3 遲發(fā)性神經(jīng)元死亡與微管細胞骨架關(guān)系
        1.3.1 微管細胞骨架的概述
        1.3.2 微管細胞骨架的分布
        1.3.3 微管細胞骨架的動態(tài)調(diào)節(jié)
        1.3.4 4-VO誘導的遲發(fā)性神經(jīng)元后微管細胞的骨架變化
    1.4 展望
第2章 通過穩(wěn)固F-actin細胞骨架減緩遲發(fā)性神經(jīng)元死亡的實驗研究
    2.1 前言
    2.2 材料與儀器
        2.2.1 實驗儀器
        2.2.2 實驗試劑
        2.2.3 試劑配制
        2.2.4 實驗動物
    2.3 實驗方法
        2.3.1 動物模型的建立
        2.3.2 藥物治療與實驗分組
        2.3.3 行為學觀察實驗
        2.3.4 組織樣品的制備
        2.3.5 Western blot
        2.3.6 F-actin染色
        2.3.7 Nissl和 Neun染色
        2.3.8 GFAP和 Iba1 染色
        2.3.9 統(tǒng)計學分析
    2.4 實驗結(jié)果
        2.4.1 匹魯卡品誘導的遲發(fā)性神經(jīng)元死亡模型行為學觀察
        2.4.2 FK506 部分抑制了cofilin去磷酸化和F/G比值的變化
        2.4.3 FK506 部分抑制SE后 F-actin解聚
        2.4.4 FK506 部分抑制了神經(jīng)元遲發(fā)性死亡
        2.4.5 FK506 部分抑制了癲癇PSE膠質(zhì)細胞增生
    2.5 討論
    2.6 小結(jié)
第3章 體內(nèi)和體外遲發(fā)性神經(jīng)元死亡模型中F-actin和微管的改變
    3.1 前言
    3.2 體內(nèi)實驗部分
        3.2.1 實驗儀器
        3.2.2 實驗試劑及抗體
        3.2.3 實驗動物
        3.2.4 實驗方法
        3.2.5 實驗結(jié)果
    3.3 體外實驗部分
        3.3.1 實驗儀器
        3.3.2 實驗試劑
        3.3.3 試劑配制
        3.3.4 實驗方法
        3.3.5 實驗結(jié)果
    3.4 討論
    3.5 小結(jié)
第4章 通過穩(wěn)固微管細胞骨架減緩遲發(fā)性神經(jīng)元死亡的實驗研究
    4.1 前言
    4.2 材料與儀器
        4.2.1 實驗試劑
        4.2.2 試劑配制
    4.3 實驗方法
        4.3.1 EpoD治療4-VO誘導遲發(fā)性神經(jīng)元死亡模型
        4.3.2 組織樣本的制備
        4.3.3 Nissl染色
        4.3.4 Fluoro-Jade B染色
        4.3.5 微管相關(guān)蛋白海馬CA1 區(qū)免疫熒光染色
        4.3.6 圖像分析
        4.3.7 統(tǒng)計分析
    4.4 實驗結(jié)果
        4.4.1 Epo D治療4-VO誘導的遲發(fā)性神經(jīng)元死亡模型實驗分組
        4.4.2 Epo D治療前后輕微抑制海馬CA1 區(qū)神經(jīng)元的損傷程度
        4.4.3 EpoD治療前后對微管相關(guān)蛋白的影響
    4.5 討論
    4.6 小結(jié)
第5章 結(jié)論
參考文獻
作者簡介及在學期間取得的科研成果
致謝



本文編號：3753192