纖維性肌動(dòng)蛋白(F-actin)與微管是神經(jīng)元的主要細(xì)胞骨架,神經(jīng)元死亡以二者進(jìn)行性降解為主要特征,因此采用F-actin和微管穩(wěn)定性藥物來(lái)加固神經(jīng)元細(xì)胞骨架,對(duì)于防治神經(jīng)元遲發(fā)性死亡可能具有一定作用。我們前期實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示,癲癇持續(xù)狀態(tài)后,樹突棘F(xiàn)-actin進(jìn)行性減少,但是樹突干及胞體內(nèi)F-actin卻出現(xiàn)聚集現(xiàn)象。由于樹突棘基底部F-actin附著在樹突干內(nèi)的微管上,我們推測(cè)癲癇腦內(nèi)F-actin聚集可能是由于樹突干微管解聚后F-actin失去錨定和支撐作用所致,樹突棘F(xiàn)-actin損傷直接引起神經(jīng)元興奮性異常,而樹突干微管解聚則會(huì)加重樹突棘F(xiàn)-actin的損傷。腦缺血與癲癇持續(xù)狀態(tài)的病理過(guò)程相似,但是采用腦缺血模型研究海馬神經(jīng)元遲發(fā)性死亡的成功率較高,重復(fù)性較好。因此,本項(xiàng)目擬采用匹魯卡品和四血管阻斷法(4-VO)誘導(dǎo)的遲發(fā)性神經(jīng)元死亡模型,進(jìn)一步探討神經(jīng)元遲發(fā)性死亡后F-actin和微管的動(dòng)力學(xué)變化及神經(jīng)元遲發(fā)性死亡的進(jìn)程,進(jìn)而采用細(xì)胞骨架穩(wěn)定性藥物探討細(xì)胞骨架藥物對(duì)遲發(fā)性神經(jīng)元死亡的影響,旨在闡明F-actin和微管在癲癇和腦缺血發(fā)展過(guò)程中與神經(jīng)元死亡的關(guān)系,進(jìn)而探討同時(shí)增強(qiáng)...

【文章頁(yè)數(shù)】：146 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：博士

【文章目錄】：
中文摘要
abstract
英文縮略詞
第1章 文獻(xiàn)綜述
    1.1 遲發(fā)性神經(jīng)元死亡概述
    1.2 遲發(fā)性神經(jīng)元死亡與肌動(dòng)蛋白細(xì)胞骨架關(guān)系
        1.2.1 肌動(dòng)蛋白細(xì)胞骨架概述
        1.2.2 肌動(dòng)蛋白細(xì)胞骨架的分布
        1.2.3 肌動(dòng)蛋白細(xì)胞骨架動(dòng)態(tài)調(diào)節(jié)
        1.2.4 四血管阻斷法(4-VO)誘導(dǎo)的遲發(fā)性神經(jīng)元后肌動(dòng)蛋白細(xì)胞骨架的變化
    1.3 遲發(fā)性神經(jīng)元死亡與微管細(xì)胞骨架關(guān)系
        1.3.1 微管細(xì)胞骨架的概述
        1.3.2 微管細(xì)胞骨架的分布
        1.3.3 微管細(xì)胞骨架的動(dòng)態(tài)調(diào)節(jié)
        1.3.4 4-VO誘導(dǎo)的遲發(fā)性神經(jīng)元后微管細(xì)胞的骨架變化
    1.4 展望
第2章 通過(guò)穩(wěn)固F-actin細(xì)胞骨架減緩遲發(fā)性神經(jīng)元死亡的實(shí)驗(yàn)研究
    2.1 前言
    2.2 材料與儀器
        2.2.1 實(shí)驗(yàn)儀器
        2.2.2 實(shí)驗(yàn)試劑
        2.2.3 試劑配制
        2.2.4 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物
    2.3 實(shí)驗(yàn)方法
        2.3.1 動(dòng)物模型的建立
        2.3.2 藥物治療與實(shí)驗(yàn)分組
        2.3.3 行為學(xué)觀察實(shí)驗(yàn)
        2.3.4 組織樣品的制備
        2.3.5 Western blot
        2.3.6 F-actin染色
        2.3.7 Nissl和 Neun染色
        2.3.8 GFAP和 Iba1 染色
        2.3.9 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析
    2.4 實(shí)驗(yàn)結(jié)果
        2.4.1 匹魯卡品誘導(dǎo)的遲發(fā)性神經(jīng)元死亡模型行為學(xué)觀察
        2.4.2 FK506 部分抑制了cofilin去磷酸化和F/G比值的變化
        2.4.3 FK506 部分抑制SE后 F-actin解聚
        2.4.4 FK506 部分抑制了神經(jīng)元遲發(fā)性死亡
        2.4.5 FK506 部分抑制了癲癇PSE膠質(zhì)細(xì)胞增生
    2.5 討論
    2.6 小結(jié)
第3章 體內(nèi)和體外遲發(fā)性神經(jīng)元死亡模型中F-actin和微管的改變
    3.1 前言
    3.2 體內(nèi)實(shí)驗(yàn)部分
        3.2.1 實(shí)驗(yàn)儀器
        3.2.2 實(shí)驗(yàn)試劑及抗體
        3.2.3 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物
        3.2.4 實(shí)驗(yàn)方法
        3.2.5 實(shí)驗(yàn)結(jié)果
    3.3 體外實(shí)驗(yàn)部分
        3.3.1 實(shí)驗(yàn)儀器
        3.3.2 實(shí)驗(yàn)試劑
        3.3.3 試劑配制
        3.3.4 實(shí)驗(yàn)方法
        3.3.5 實(shí)驗(yàn)結(jié)果
    3.4 討論
    3.5 小結(jié)
第4章 通過(guò)穩(wěn)固微管細(xì)胞骨架減緩遲發(fā)性神經(jīng)元死亡的實(shí)驗(yàn)研究
    4.1 前言
    4.2 材料與儀器
        4.2.1 實(shí)驗(yàn)試劑
        4.2.2 試劑配制
    4.3 實(shí)驗(yàn)方法
        4.3.1 EpoD治療4-VO誘導(dǎo)遲發(fā)性神經(jīng)元死亡模型
        4.3.2 組織樣本的制備
        4.3.3 Nissl染色
        4.3.4 Fluoro-Jade B染色
        4.3.5 微管相關(guān)蛋白海馬CA1 區(qū)免疫熒光染色
        4.3.6 圖像分析
        4.3.7 統(tǒng)計(jì)分析
    4.4 實(shí)驗(yàn)結(jié)果
        4.4.1 Epo D治療4-VO誘導(dǎo)的遲發(fā)性神經(jīng)元死亡模型實(shí)驗(yàn)分組
        4.4.2 Epo D治療前后輕微抑制海馬CA1 區(qū)神經(jīng)元的損傷程度
        4.4.3 EpoD治療前后對(duì)微管相關(guān)蛋白的影響
    4.5 討論
    4.6 小結(jié)
第5章 結(jié)論
參考文獻(xiàn)
作者簡(jiǎn)介及在學(xué)期間取得的科研成果
致謝



本文編號(hào)：3753192