發(fā)布時間：2023-02-08 21:25

　　目的探究在人源性U87膠質(zhì)瘤細(xì)胞系中是否有干細(xì)胞的存在,并對其生長狀態(tài)和形態(tài)學(xué)的變化進(jìn)行查看,進(jìn)而探究生物鐘基因Period2(Per2)的節(jié)律性。方法(1)細(xì)胞分離、提取與鑒定(1)應(yīng)用懸浮培養(yǎng)的方式和添加bFGF、rhEGF、B27、N2到不含血清的培養(yǎng)基中來培養(yǎng)膠質(zhì)瘤U87細(xì)胞,通過倒置相差顯微鏡查看分離、培養(yǎng)獲得的腫瘤球形態(tài)及生長性狀;應(yīng)用免疫熒光染色對干細(xì)胞腫瘤球進(jìn)行表面蛋白的鑒定;應(yīng)用RT-qPCR檢測干細(xì)胞腫瘤球表面蛋白的mRNA表達(dá)量。(2)用含血清的完全培養(yǎng)基(DMEM:胎牛血清:青鏈霉素=1:10%:1%)對干細(xì)胞腫瘤球進(jìn)行分化誘導(dǎo)培養(yǎng),并用免疫熒光細(xì)胞染色鑒定分化誘導(dǎo)細(xì)胞的表型,進(jìn)而判定干細(xì)胞腫瘤球的多向分化能力。(2)生物鐘基因Per2的節(jié)律性應(yīng)用含10%血清的DMEM和添加營養(yǎng)因子的無血清的干細(xì)胞培養(yǎng)基分別培養(yǎng)U87細(xì)胞和U87干細(xì)胞腫瘤球,然后在培養(yǎng)基中加入PMA誘導(dǎo)劑,誘導(dǎo)其產(chǎn)生生物鐘基因的表達(dá),進(jìn)而選取不同的時間點(diǎn)4 h、8 h、12 h、16 h、20 h、24 h的細(xì)胞,用實(shí)時熒光定量PCR檢測Per2基因在兩種細(xì)胞中的節(jié)律性。結(jié)果1.在有10%血清...

【文章頁數(shù)】：65 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
ABSTRACT
符號說明
前言
材料與方法
    1.實(shí)驗(yàn)材料
        1.1 細(xì)胞株
        1.2 主要試劑與耗材
        1.3 主要實(shí)驗(yàn)儀器
        1.4 主要實(shí)驗(yàn)溶液配制
    2.實(shí)驗(yàn)方法
        2.1 U87細(xì)胞的復(fù)蘇、培養(yǎng)及傳代
        2.2 U87腫瘤球干細(xì)胞的分離提取及傳代
        2.3 免疫熒光細(xì)胞染色法鑒定腫瘤球干細(xì)胞
        2.4 RT-qPCR法測定干細(xì)胞表面蛋白
        2.5 U87腫瘤球干細(xì)胞的成球能力實(shí)驗(yàn)
        2.6 腫瘤球干細(xì)胞的誘導(dǎo)培養(yǎng)及其免疫熒光細(xì)胞染色
        2.7 PMA處理U87細(xì)胞和U87腫瘤球干細(xì)胞
        2.8 RT-qPCR法檢測生物鐘基因Per2的表達(dá)
        2.9 統(tǒng)計數(shù)據(jù)分析與圖像處理
結(jié)果
    1.U87膠質(zhì)瘤細(xì)胞的形態(tài)變化
    2.U87腫瘤球干細(xì)胞分選及形成
    3.U87腫瘤球干細(xì)胞CD133、Nestin、Sox2的熒光染色
    4.干細(xì)胞標(biāo)志物CD133、Nestin、Sox2的相對表達(dá)量
    5.U87腫瘤球干細(xì)胞二次成球情況
    6.誘導(dǎo)分化細(xì)胞的形態(tài)變化
    7.分化細(xì)胞的免疫熒光
    8.Per2基因在U87細(xì)胞中不同時間點(diǎn)的相對表達(dá)
    9.Per2基因在腫瘤球干細(xì)胞中不同時間點(diǎn)的相對表達(dá)
討論
結(jié)論
參考文獻(xiàn)
文獻(xiàn)綜述
    綜述參考文獻(xiàn)
致謝
攻讀學(xué)位期間發(fā)表的學(xué)術(shù)論文
個人簡介
開題、中期及學(xué)位論文答辯委員組成



本文編號：3738400