研究背景:腦卒中引發(fā)的炎癥反應(yīng)直接影響缺血性卒中后腦損傷修復(fù)和預(yù)后,小膠質(zhì)細(xì)胞活化狀態(tài)及功能直接調(diào)控缺血性卒中后炎癥反應(yīng),并影響卒中轉(zhuǎn)歸。缺血性卒中后,小膠質(zhì)細(xì)胞內(nèi)多種長鏈非編碼RNA（Long non-coding RNA,LncRNA）差異表達(dá),這些lncRNA可能參與調(diào)控小膠質(zhì)細(xì)胞功能,但其具體作用機(jī)制尚未闡明。LncRNA-1810034E14Rik在小膠質(zhì)細(xì)胞中廣泛分布,但對(duì)其功能研究尚缺乏。在本論文中,我們探討了缺血性卒中后lncRNA-1810034E14Rik的變化趨勢(shì),及l(fā)ncRNA-1810034E14Rik能否調(diào)控缺血性卒中后小膠質(zhì)細(xì)胞功能。此外,我們還進(jìn)一步探索了 lncRNA-1810034E14Rik調(diào)控小膠質(zhì)細(xì)胞功能的分子機(jī)制。研究方法:體外實(shí)驗(yàn)中,我們從C57BL/6乳鼠皮層提取原代小膠質(zhì)細(xì)胞,糖氧剝奪（Oxygen glucose deprivation,OGD）后提取RNA進(jìn)行l(wèi)ncRNA差異表達(dá)芯片分析,從中篩選出差異表達(dá)的lncRNA,并進(jìn)行生物信息學(xué)分析,挑選出目標(biāo)lncRNA-1810034E4Rik。我們包裝lncRNA-1810034e1... 

【文章頁數(shù)】：120 頁

【學(xué)位級(jí)別】：博士

【文章目錄】：
中文摘要
ABSTRACT
縮略詞
第一章 緒論
    1.1 缺血性卒中概述
    1.2 神經(jīng)免疫炎癥與缺血性卒中
        1.2.1 腦內(nèi)免疫炎癥與缺血性卒中
        1.2.2 外周免疫細(xì)胞與神經(jīng)免疫炎癥
            1) 浸潤性白細(xì)胞與神經(jīng)免疫炎癥
            2) 淋巴細(xì)胞與神經(jīng)免疫炎癥
        1.2.3 靶向神經(jīng)免疫炎治療與缺血性卒中
    1.3 小膠質(zhì)細(xì)胞與缺血性卒中
        1.3.1 小膠質(zhì)細(xì)胞生理功能
        1.3.2 小膠質(zhì)細(xì)胞激活與缺血性卒中
        1.3.3 小膠質(zhì)細(xì)胞與缺血性卒中后神經(jīng)免疫炎癥
        1.3.4 缺血性卒中后小膠質(zhì)細(xì)胞對(duì)血腦屏障的作用
        1.3.5 缺血性卒中后小膠質(zhì)細(xì)胞對(duì)神經(jīng)元的作用
    1.4 長鏈非編碼RNA與缺血性卒中
        1.4.1 非編碼RNA簡介
        1.4.2 LncRNA的發(fā)現(xiàn)
        1.4.3 LncRNA的功能
    1.5 LncRNA與缺血性卒中
        1.5.1 LncRNA與缺血性卒中后神經(jīng)元損傷
        1.5.2 LncRNA與缺血性卒中后內(nèi)皮細(xì)胞損傷
        1.5.3 LncRNA與缺血性卒中后神經(jīng)炎癥
    1.6 本論文研究的重點(diǎn)及意義
    1.7 本論文的邏輯結(jié)構(gòu)及基本思路
    1.8 參考文獻(xiàn)
第二章 缺血性卒中后LncRNA-1810034E14Rik表達(dá)改變
    2.1 引言
    2.2 實(shí)驗(yàn)材料和方法
        2.2.1 實(shí)驗(yàn)材料
        2.2.2 實(shí)驗(yàn)方法
            2.2.2.1 急性缺血性卒中模型建立
            2.2.2.2 小膠質(zhì)細(xì)胞分選
            2.2.2.3 RNA提取
            2.2.2.4 RT-qPCR
            2.2.2.5 原代細(xì)胞糖氧剝奪
            2.2.2.6 lncRNA芯片分析
            2.2.2.7 原代神經(jīng)元培養(yǎng)
            2.2.2.8 原代小膠質(zhì)細(xì)胞培養(yǎng)
            2.2.2.9 原代星形膠質(zhì)細(xì)胞培養(yǎng)
            2.2.2.10 原代內(nèi)皮細(xì)胞培養(yǎng)
            2.2.2.11 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法
    2.3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果
        2.3.1 OGD后小膠質(zhì)細(xì)胞內(nèi)lncRNA-1810034E14Rik顯著降低
        2.3.2 缺血性卒中后神經(jīng)元、星形膠質(zhì)細(xì)胞和內(nèi)皮細(xì)胞lncRNA-18100-34 E14 Rik無明顯改變
        2.3.3 LncRNA-1810034E14Rik深度生物信息分析
    2.4 討論
    2.5 結(jié)論
    2.6 參考文獻(xiàn)
第三章 LncRNA-1810034E14Rik對(duì)小膠質(zhì)細(xì)胞功能的影響
    3.1 前言
    3.2 實(shí)驗(yàn)材料與方法
        3.2.1 實(shí)驗(yàn)材料
        3.2.2 實(shí)驗(yàn)方法
            3.2.2.1 原代小膠質(zhì)細(xì)胞培養(yǎng)
            3.2.2.2 原代神經(jīng)元培養(yǎng)
            3.2.2.3 原代細(xì)胞糖氧剝奪實(shí)驗(yàn)
            3.2.2.4 總RNA提取
            3.2.2.5 RT-qPCR
            3.2.2.6 小膠質(zhì)細(xì)胞慢病毒轉(zhuǎn)染
            3.2.2.7 小膠質(zhì)細(xì)胞siRNA干擾
            3.2.2.8 免疫熒光染色
            3.2.2.9 劃痕實(shí)驗(yàn)
            3.2.2.10 熒光微球吞噬實(shí)驗(yàn)
            3.2.2.11 CCK-8細(xì)胞活性分析
            3.2.2.12 酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)
            3.2.13 原代小膠質(zhì)細(xì)胞原代神經(jīng)元條件共陪
            3.2.2.14 LDH釋放實(shí)驗(yàn)
            3.2.2.15 Calcein/PI染色
            3.2.2.16 蛋白提取
            3.3.3.17 蛋白定量
            3.2.2.18 免疫印跡
            3.2.2.19 結(jié)果統(tǒng)計(jì)
    3.3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果
        3.3.1 過表達(dá)lncRNA-1810034E14Rik減少OGD后小膠質(zhì)細(xì)胞激活
        3.3.2 過表達(dá)或干擾lncRNA-1810034E14Rik對(duì)OGD后小膠質(zhì)細(xì)胞遷移能力沒有影
        3.3.3 過表達(dá)或干擾lncRNA-1810034E14Rik對(duì)OGD后小膠質(zhì)細(xì)胞吞噬能力沒有影響
        3.3.4 過表達(dá)lncRNA-1810034E14Rik改善OGD后小膠質(zhì)細(xì)胞炎癥狀態(tài)
        3.3.5 過表達(dá)lncRNA-1810034E14Rik減輕OGD后小膠質(zhì)細(xì)胞的神經(jīng)
    3.4 討論
    3.5 結(jié)論
    3.6 參考文獻(xiàn)
第四章 LncRNA-1810034E14Rik對(duì)MCAO后腦損傷有保護(hù)作用
    4.1 前言
    4.2 實(shí)驗(yàn)材料與方法
        4.2.1 實(shí)驗(yàn)材料
        4.2.2 實(shí)驗(yàn)方法
            4.2.2.1 急性缺血性卒中模型建立
            4.2.2.2 腦梗死體積測(cè)定
            4.2.2.3 神經(jīng)功能缺損評(píng)分
            4.2.2.4 前肢爪抓力測(cè)定
            4.2.2.5 疲勞轉(zhuǎn)棒實(shí)驗(yàn)
            4.2.2.6 腦水腫程度檢測(cè)
            4.2.2.7 總RNA提取
            4.2.2.8 RT-qPCR
            4.2.2.9 慢病毒立體定位注射
            4.2.2.10 免疫熒光染色
            4.2.2.11 酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)
            4.2.2.12 蛋白提取
            4.3.3.13 蛋白定量
            4.2.2.14 免疫印跡
            4.2.2.15 結(jié)果統(tǒng)計(jì)
    4.3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果
        4.3.1 慢病毒立體定位注射過表達(dá)lncRNA-1810034E14Rik
        4.3.2 過表達(dá)lncRNA-1810034E14Rik減少M(fèi)CAO后腦梗死體積和腦水腫
        4.3.4 過表達(dá)lncRNA-1810034E14Rik改善MCAO后小鼠運(yùn)動(dòng)功能障礙
        4.3.4 過表達(dá)lncRNA-1810034E14Rik改善MCAO后腦組織炎癥狀態(tài)
        4.3.5 過表達(dá)lncRNA-1810034E14Rik抑制MCAO后小膠質(zhì)細(xì)胞激活
    4.4 討論
    4.5 結(jié)論
    4.6 參考文獻(xiàn)
第五章 LncRNA-1810034E14Rik通過抑制NF-κB減少缺血性卒中后小膠質(zhì)細(xì)胞激活
    5.1 前言
    5.2 實(shí)驗(yàn)材料與方法
        5.2.1 實(shí)驗(yàn)材料
        5.2.2 實(shí)驗(yàn)方法
            5.2.2.1 原代小膠質(zhì)細(xì)胞培養(yǎng)
            5.2.2.2 原代細(xì)胞糖氧剝奪實(shí)驗(yàn)
            5.2.2.3 小膠質(zhì)細(xì)胞慢病毒轉(zhuǎn)染
            5.2.2.4 小膠質(zhì)細(xì)胞siRNA干擾
            5.2.2.5 蛋白提取
            5.3.3.6 蛋白定量
            5.2.2.7 免疫印跡
            5.2.2.8 急性缺血性卒中模型建立
            5.2.2.9 小鼠慢病毒立體定位注射
            5.2.2.10 結(jié)果統(tǒng)計(jì)
    5.3 結(jié)果
        5.3.1 過表達(dá)lncRNA-1810034E14Rik抑制OGD后小膠質(zhì)細(xì)胞NF-κB信號(hào)通路激活
        5.3.2 過表達(dá)lncRNA-1810034E14Rik抑制MCAO后NF-κB激活
    5.4 討論
    5.5 結(jié)論
    5.6 參考文獻(xiàn)
攻讀學(xué)位期間發(fā)表文章情況
致謝



本文編號(hào)：3706605