研究背景:腦卒中引發(fā)的炎癥反應(yīng)直接影響缺血性卒中后腦損傷修復(fù)和預(yù)后,小膠質(zhì)細胞活化狀態(tài)及功能直接調(diào)控缺血性卒中后炎癥反應(yīng),并影響卒中轉(zhuǎn)歸。缺血性卒中后,小膠質(zhì)細胞內(nèi)多種長鏈非編碼RNA（Long non-coding RNA,LncRNA）差異表達,這些lncRNA可能參與調(diào)控小膠質(zhì)細胞功能,但其具體作用機制尚未闡明。LncRNA-1810034E14Rik在小膠質(zhì)細胞中廣泛分布,但對其功能研究尚缺乏。在本論文中,我們探討了缺血性卒中后lncRNA-1810034E14Rik的變化趨勢,及l(fā)ncRNA-1810034E14Rik能否調(diào)控缺血性卒中后小膠質(zhì)細胞功能。此外,我們還進一步探索了 lncRNA-1810034E14Rik調(diào)控小膠質(zhì)細胞功能的分子機制。研究方法:體外實驗中,我們從C57BL/6乳鼠皮層提取原代小膠質(zhì)細胞,糖氧剝奪（Oxygen glucose deprivation,OGD）后提取RNA進行l(wèi)ncRNA差異表達芯片分析,從中篩選出差異表達的lncRNA,并進行生物信息學(xué)分析,挑選出目標(biāo)lncRNA-1810034E4Rik。我們包裝lncRNA-1810034e1... 

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【學(xué)位級別】：博士

【文章目錄】：
中文摘要
ABSTRACT
縮略詞
第一章 緒論
    1.1 缺血性卒中概述
    1.2 神經(jīng)免疫炎癥與缺血性卒中
        1.2.1 腦內(nèi)免疫炎癥與缺血性卒中
        1.2.2 外周免疫細胞與神經(jīng)免疫炎癥
            1) 浸潤性白細胞與神經(jīng)免疫炎癥
            2) 淋巴細胞與神經(jīng)免疫炎癥
        1.2.3 靶向神經(jīng)免疫炎治療與缺血性卒中
    1.3 小膠質(zhì)細胞與缺血性卒中
        1.3.1 小膠質(zhì)細胞生理功能
        1.3.2 小膠質(zhì)細胞激活與缺血性卒中
        1.3.3 小膠質(zhì)細胞與缺血性卒中后神經(jīng)免疫炎癥
        1.3.4 缺血性卒中后小膠質(zhì)細胞對血腦屏障的作用
        1.3.5 缺血性卒中后小膠質(zhì)細胞對神經(jīng)元的作用
    1.4 長鏈非編碼RNA與缺血性卒中
        1.4.1 非編碼RNA簡介
        1.4.2 LncRNA的發(fā)現(xiàn)
        1.4.3 LncRNA的功能
    1.5 LncRNA與缺血性卒中
        1.5.1 LncRNA與缺血性卒中后神經(jīng)元損傷
        1.5.2 LncRNA與缺血性卒中后內(nèi)皮細胞損傷
        1.5.3 LncRNA與缺血性卒中后神經(jīng)炎癥
    1.6 本論文研究的重點及意義
    1.7 本論文的邏輯結(jié)構(gòu)及基本思路
    1.8 參考文獻
第二章 缺血性卒中后LncRNA-1810034E14Rik表達改變
    2.1 引言
    2.2 實驗材料和方法
        2.2.1 實驗材料
        2.2.2 實驗方法
            2.2.2.1 急性缺血性卒中模型建立
            2.2.2.2 小膠質(zhì)細胞分選
            2.2.2.3 RNA提取
            2.2.2.4 RT-qPCR
            2.2.2.5 原代細胞糖氧剝奪
            2.2.2.6 lncRNA芯片分析
            2.2.2.7 原代神經(jīng)元培養(yǎng)
            2.2.2.8 原代小膠質(zhì)細胞培養(yǎng)
            2.2.2.9 原代星形膠質(zhì)細胞培養(yǎng)
            2.2.2.10 原代內(nèi)皮細胞培養(yǎng)
            2.2.2.11 統(tǒng)計學(xué)方法
    2.3 實驗結(jié)果
        2.3.1 OGD后小膠質(zhì)細胞內(nèi)lncRNA-1810034E14Rik顯著降低
        2.3.2 缺血性卒中后神經(jīng)元、星形膠質(zhì)細胞和內(nèi)皮細胞lncRNA-18100-34 E14 Rik無明顯改變
        2.3.3 LncRNA-1810034E14Rik深度生物信息分析
    2.4 討論
    2.5 結(jié)論
    2.6 參考文獻
第三章 LncRNA-1810034E14Rik對小膠質(zhì)細胞功能的影響
    3.1 前言
    3.2 實驗材料與方法
        3.2.1 實驗材料
        3.2.2 實驗方法
            3.2.2.1 原代小膠質(zhì)細胞培養(yǎng)
            3.2.2.2 原代神經(jīng)元培養(yǎng)
            3.2.2.3 原代細胞糖氧剝奪實驗
            3.2.2.4 總RNA提取
            3.2.2.5 RT-qPCR
            3.2.2.6 小膠質(zhì)細胞慢病毒轉(zhuǎn)染
            3.2.2.7 小膠質(zhì)細胞siRNA干擾
            3.2.2.8 免疫熒光染色
            3.2.2.9 劃痕實驗
            3.2.2.10 熒光微球吞噬實驗
            3.2.2.11 CCK-8細胞活性分析
            3.2.2.12 酶聯(lián)免疫吸附試驗
            3.2.13 原代小膠質(zhì)細胞原代神經(jīng)元條件共陪
            3.2.2.14 LDH釋放實驗
            3.2.2.15 Calcein/PI染色
            3.2.2.16 蛋白提取
            3.3.3.17 蛋白定量
            3.2.2.18 免疫印跡
            3.2.2.19 結(jié)果統(tǒng)計
    3.3 實驗結(jié)果
        3.3.1 過表達lncRNA-1810034E14Rik減少OGD后小膠質(zhì)細胞激活
        3.3.2 過表達或干擾lncRNA-1810034E14Rik對OGD后小膠質(zhì)細胞遷移能力沒有影
        3.3.3 過表達或干擾lncRNA-1810034E14Rik對OGD后小膠質(zhì)細胞吞噬能力沒有影響
        3.3.4 過表達lncRNA-1810034E14Rik改善OGD后小膠質(zhì)細胞炎癥狀態(tài)
        3.3.5 過表達lncRNA-1810034E14Rik減輕OGD后小膠質(zhì)細胞的神經(jīng)
    3.4 討論
    3.5 結(jié)論
    3.6 參考文獻
第四章 LncRNA-1810034E14Rik對MCAO后腦損傷有保護作用
    4.1 前言
    4.2 實驗材料與方法
        4.2.1 實驗材料
        4.2.2 實驗方法
            4.2.2.1 急性缺血性卒中模型建立
            4.2.2.2 腦梗死體積測定
            4.2.2.3 神經(jīng)功能缺損評分
            4.2.2.4 前肢爪抓力測定
            4.2.2.5 疲勞轉(zhuǎn)棒實驗
            4.2.2.6 腦水腫程度檢測
            4.2.2.7 總RNA提取
            4.2.2.8 RT-qPCR
            4.2.2.9 慢病毒立體定位注射
            4.2.2.10 免疫熒光染色
            4.2.2.11 酶聯(lián)免疫吸附試驗
            4.2.2.12 蛋白提取
            4.3.3.13 蛋白定量
            4.2.2.14 免疫印跡
            4.2.2.15 結(jié)果統(tǒng)計
    4.3 實驗結(jié)果
        4.3.1 慢病毒立體定位注射過表達lncRNA-1810034E14Rik
        4.3.2 過表達lncRNA-1810034E14Rik減少MCAO后腦梗死體積和腦水腫
        4.3.4 過表達lncRNA-1810034E14Rik改善MCAO后小鼠運動功能障礙
        4.3.4 過表達lncRNA-1810034E14Rik改善MCAO后腦組織炎癥狀態(tài)
        4.3.5 過表達lncRNA-1810034E14Rik抑制MCAO后小膠質(zhì)細胞激活
    4.4 討論
    4.5 結(jié)論
    4.6 參考文獻
第五章 LncRNA-1810034E14Rik通過抑制NF-κB減少缺血性卒中后小膠質(zhì)細胞激活
    5.1 前言
    5.2 實驗材料與方法
        5.2.1 實驗材料
        5.2.2 實驗方法
            5.2.2.1 原代小膠質(zhì)細胞培養(yǎng)
            5.2.2.2 原代細胞糖氧剝奪實驗
            5.2.2.3 小膠質(zhì)細胞慢病毒轉(zhuǎn)染
            5.2.2.4 小膠質(zhì)細胞siRNA干擾
            5.2.2.5 蛋白提取
            5.3.3.6 蛋白定量
            5.2.2.7 免疫印跡
            5.2.2.8 急性缺血性卒中模型建立
            5.2.2.9 小鼠慢病毒立體定位注射
            5.2.2.10 結(jié)果統(tǒng)計
    5.3 結(jié)果
        5.3.1 過表達lncRNA-1810034E14Rik抑制OGD后小膠質(zhì)細胞NF-κB信號通路激活
        5.3.2 過表達lncRNA-1810034E14Rik抑制MCAO后NF-κB激活
    5.4 討論
    5.5 結(jié)論
    5.6 參考文獻
攻讀學(xué)位期間發(fā)表文章情況
致謝



本文編號：3706605