目的：篩選人巨細(xì)胞病毒（human cytomegalovirus, HCMV）感染人神經(jīng)膠質(zhì)瘤細(xì)胞差異表達(dá)的miRNA,為進(jìn)一步研究HCMV的致畸機(jī)制提供基礎(chǔ)。方法：用HCMV （MOI=5）感染人神經(jīng)膠質(zhì)瘤U251細(xì)胞株,感染后24h,48h,72h收獲細(xì)胞作為為實(shí)驗(yàn)組,以模擬感染的正常細(xì)胞為對(duì)照組。用miRNA表達(dá)譜芯片技術(shù)檢測(cè)細(xì)胞的miRNA表達(dá)水平,應(yīng)用軟件篩選并獲得一些差異表達(dá)明顯的miRNA,再利用Taqman探針或SYBR綠色熒光染料I （SYBR GREEN I）實(shí)時(shí)定量PCR驗(yàn)證芯片結(jié)果,應(yīng)用生物信息學(xué)軟件預(yù)測(cè)miRNA的靶基因,并篩選出與神經(jīng)系統(tǒng)發(fā)育有關(guān)的靶基因。結(jié)果：與模擬感染的細(xì)胞相比,24h.p.i,48h.p.i,72h.p.i實(shí)驗(yàn)組中有33個(gè)細(xì)胞miRNA表達(dá)顯著差異,其中19個(gè)表達(dá)上調(diào)均超過(guò)2倍,有hsa-miR-1275, hsa-miR-296-3p, hsa-miR-1246, hsa-miR-409-3p等；14個(gè)表達(dá)下調(diào)超過(guò)2倍,有hsa-miR-634, hsa-miR-129-3p, hsa-miR-340*, hsa-miR-769-5... 

【文章頁(yè)數(shù)】：73 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
ABSTRACT
目錄
縮略語(yǔ)
前言
第一章 材料與方法
    1.1 實(shí)驗(yàn)材料
        1.1.1 細(xì)胞株
        1.1.2 病毒株
        1.1.3 主要試劑及其來(lái)源
        1.1.4 主要儀器設(shè)備
        1.1.5 常用試劑的配制
    1.3 實(shí)驗(yàn)方法
        1.3.1 HCMV AD169株增殖與毒力測(cè)定
        1.3.2 HCMV AD169株感染U251細(xì)胞株
        1.3.3 細(xì)胞總RNA的提取
        1.3.4 miRNA表達(dá)譜芯片雜交及數(shù)據(jù)分析
        1.3.5 實(shí)時(shí)定量PCR
        1.3.6 部分差異表達(dá)的miRNA的靶基因生物信息學(xué)分析
第二章 結(jié)果
    2.1 HCMV AD169株增殖與毒力測(cè)定
        2.1.1 HCMV AD169株感染HEL細(xì)胞致細(xì)胞病變效應(yīng)
        2.1.2 HCMV TCID_(50)滴定
        2.1.3 HCMV蝕斑實(shí)驗(yàn)
    2.2 總RNA質(zhì)量檢測(cè)
    2.3 miRNA表達(dá)譜芯片雜交結(jié)果
    2.4 部分差異miRNA實(shí)時(shí)定量PCR驗(yàn)證結(jié)果
        2.4.1 探針?lè)▽?shí)時(shí)定量PCR驗(yàn)證結(jié)果
        2.4.2 染料法實(shí)時(shí)定量PCR驗(yàn)證結(jié)果
    2.5 部分差異miRNA靶基因生物信息學(xué)分析
第三章 討論
    3.1 研究HCMV致畸機(jī)制的意義
    3.2 miRNA的特點(diǎn)及與病毒的關(guān)系
    3.3 miRNA表達(dá)譜芯片的分析
    3.4 miRNA實(shí)時(shí)定量PCR的分析
    3.5 miRNA靶基因的生物信息學(xué)分析
第四章 結(jié)論
參考文獻(xiàn)
綜述
    參考文獻(xiàn)
致謝
攻讀學(xué)位期間主要的研究成果


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]人巨細(xì)胞病毒感染對(duì)人神經(jīng)干細(xì)胞定向星形膠質(zhì)細(xì)胞分化過(guò)程中Notch相關(guān)信號(hào)分子表達(dá)的影響[J]. 李玲,白志強(qiáng),李鵬,劉志軍,王海濤,劉海燕,姜光域,宋旭霞,錢冬萌,閆志勇,丁守怡,王斌.  醫(yī)學(xué)研究生學(xué)報(bào). 2010(10)
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