本文關(guān)鍵詞：血管性血友病因子與腦梗塞形成的相關(guān)性分析研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：研究背景:腦血管疾病(cerebrovascular disease,CVD)是世界范圍內(nèi)成人致殘的首要因素和第三位人口死亡的病因,也是老年人認(rèn)知功能障礙和情感障礙的重要原因之一。由中國(guó)疾病預(yù)防控制中心2012年發(fā)布的國(guó)家衛(wèi)生統(tǒng)計(jì)數(shù)據(jù)指出,我國(guó)為CVD的高發(fā)國(guó)家,CVD的發(fā)病率由2003年的6.6‰上升到2008年的9.7‰,2011年CVD的城鎮(zhèn)人口死亡率為138.68/10萬,是我國(guó)人口死亡的第二位原因。腦卒中(stroke)是指急性起病、迅速出現(xiàn)局限性或彌漫性腦功能缺失征象的腦血管性臨床事件。腦梗塞(cerebral infarction,CI)又稱缺血性腦卒中(cerebral ischemic stroke,CIS)是由于腦部血液供應(yīng)障礙,缺血、缺氧引起的局限性腦組織的缺血性壞死或腦軟化,約占全部腦卒中的80%。血管內(nèi)皮損傷,導(dǎo)致血小板和炎性細(xì)胞在內(nèi)皮損傷部粘附、聚集,最終形成血栓是腦梗塞發(fā)生的主要原因。血管性血友病因子(von Willebrand factor,VWF)是一種大分子量的具有粘附功能的多聚體糖蛋白,其在止血與血栓過程中發(fā)揮著重要的作用。當(dāng)血管壁受損時(shí),VWF作為血小板膜糖蛋白(glycoprotein,GP)Ib與受損內(nèi)皮細(xì)胞上的膠原之間的橋梁,可以介導(dǎo)血小板粘附到血管壁上。近年來,越來越多的研究證明高水平的VWF和低水平的血管性血友病因子裂解蛋白酶(ADAMTS13)與缺血性腦卒中的發(fā)生發(fā)展有關(guān),而且VWF介導(dǎo)的新型血小板粘附和激活的拮抗劑,作為一種更強(qiáng)大、安全的抵抗血栓形成紊亂的藥物,也受到越來越多的關(guān)注。我室曾研制了一套操作簡(jiǎn)單、特異性強(qiáng)、敏感性高的ELISA試劑盒用于檢測(cè)血漿中的VWF抗原含量(VWF:Ag)、VWF瑞斯托霉素輔因子活性(VWF:Rcof)及VWF膠原結(jié)合能力(VWF:CB)。本研究使用這些ELISA試劑盒檢測(cè)腦梗塞患者血漿中的上述指標(biāo),并結(jié)合ADAMTS13活性(ADAMTS13)檢測(cè)、VWF多聚體電泳分析,為中國(guó)人群中的腦梗塞患者的分子病理機(jī)制研究提供更可靠的依據(jù)。目的:本研究旨在通過制備重組血小板糖膜蛋白Ibα-Fc融合蛋白(包含Ig G Fc段,rf GPIbα-Fc),并檢測(cè)腦梗塞患者和正常對(duì)照組血漿中的VWF:Ag、VWF:Rcof、VWF:CB和ADAMTS13,分析這些指標(biāo)之間的比值VWF:Rcof/VWF:Ag,VWF:CB/VWF:Ag,ADAMTS13/VWF:Ag,ADAMTS13/VWF:Rcof,ADAMTS13/VWF:C B,并結(jié)合VWF多聚體電泳分析,進(jìn)一步了解VWF及ADAMTS13在腦梗塞的發(fā)生發(fā)展中的作用。方法:(1)用CHO細(xì)胞培養(yǎng)表達(dá)rf GPIbα-Fc蛋白,用親和層析柱純化rf GPIbα-Fc,并用ELISA、10%SDS-PAGE電泳、Werstern blot方法檢測(cè)其純度和免疫學(xué)活性。(2)收集蘇州大學(xué)附屬第一醫(yī)院神經(jīng)內(nèi)科住院的94例腦梗塞患者血漿作為病例組和103例正常志愿者的血漿作為對(duì)照組。(3)采用ELISA方法檢測(cè)VWF:Ag、VWF:Rcof、VWF:CB水平,用熒光標(biāo)記VWF73底物熒光共振能量轉(zhuǎn)移試驗(yàn)(FRETS-VWF73)檢測(cè)ADAMTS13活性。(4)應(yīng)用SPSS 20.0和Med Calc 13.2.2.0.統(tǒng)計(jì)軟件分析上述指標(biāo)及它們之間的比值與腦梗塞的關(guān)系。(5)利用VWF多聚體電泳分析病例組及對(duì)照組血漿中的VWF多聚體形態(tài)。結(jié)果:(1)成功制備富含rf GPIbα-Fc的細(xì)胞上清并獲得高活性的rf GPIbα-Fc純化產(chǎn)物。(2)腦梗塞病例組的血漿VWF:Ag(M[IQR],176%[114%-293%])、VWF:Rcof(197%[105%-381%])水平高于對(duì)照組(105%[61%-145%];100%[60%-175%],P0.001);病例組ADAMTS13(109%[80%-132%])、VWF:CB/VWF:Ag(0.43[0.28-0.90])、ADAMTS13/VWF:Ag(0.54[0.32-0.99])和ADAMTS13/VWF:Rcof(0.57[0.29-0.91])水平明顯低于對(duì)照組(117%[103%-146%];1.13[0.72-1.81];1.23[0.79-2.16];1.18[0.71-1.79],P0.01)。高水平的VWF:Ag(OR=5.11,95%CI,1.49-17.50),VWF:Rcof(OR=5.04,95%CI,1.62-15.66)和低水平的VWF:CB/VWF:Ag(OR=5.91,95%CI,1.95-17.93),ADAMTS13/VWF:Ag(O R=9.11,95%CI,2.49-33.33),ADAMTS13/VWF:Rcof(OR=3.73,95%CI,1.39-10.03)與腦梗塞的發(fā)生有關(guān)。(3)VWF多聚體電泳分析病例組與對(duì)照組的VWF多聚體形態(tài)無明顯差別。結(jié)論:(1)獲得了具有較高純度和活性的rf GPIbα-Fc蛋白。(2)血漿中高水平的VWF:Ag、VWF:Rcof及低水平的VWF:CB/VWF:Ag、ADAMTS13/VWF:Ag、ADAMTS13/VWF:Rcof與腦梗塞的發(fā)生有關(guān);(3)腦梗塞病人血漿中僅為VWF量的異常,而無VWF多聚體形態(tài)的異常。(4)聯(lián)合應(yīng)用VWF:Ag、VWF:Rcof、VWF:CB/VWF:Ag、ADAMTS13/VWF:Ag、ADAMTS13/VWF:Rcof可以更清楚的了解VWF與腦梗塞的關(guān)系,并為以后臨床應(yīng)用VWF靶向藥物提供參考指標(biāo)。
【關(guān)鍵詞】：糖蛋白Ibα 血管性血友病因子 ADAMTS13 腦梗塞
【學(xué)位授予單位】：蘇州大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號(hào)】：R743.3
【目錄】：

• 摘要4-7
• Abstract7-11
• 引言11-14
• 第一部分 重組血小板膜糖蛋白Ibα 的表達(dá)和純化14-21
• 材料和方法14-17
• 結(jié)果17-19
• 討論19-21
• 第二部分 VWF相關(guān)指標(biāo)在腦梗塞中的檢測(cè)及統(tǒng)計(jì)分析21-39
• 材料與方法21-26
• 結(jié)果26-36
• 討論36-39
• 結(jié)論39-40
• 參考文獻(xiàn)40-44
• 綜述44-51
• 參考文獻(xiàn)48-51
• 攻讀學(xué)位期間發(fā)表的論文及基金資助情況51-52
• 中英文對(duì)照縮略詞表52-54
• 致謝54-56

【參考文獻(xiàn)】

中國(guó)期刊全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前3條

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中國(guó)碩士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前1條

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  本文關(guān)鍵詞：血管性血友病因子與腦梗塞形成的相關(guān)性分析研究，，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

本文編號(hào)：365073