本文關(guān)鍵詞：HHV6、HPV16、HSV在局灶性皮質(zhì)發(fā)育障礙中的表達(dá)，，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：研究背景和目的:皮質(zhì)發(fā)育障礙(malformations of cortical development,MCD)又稱作皮質(zhì)發(fā)育不良、皮質(zhì)發(fā)育畸形[1]等,是一組局灶性或彌漫性皮質(zhì)結(jié)構(gòu)異常病變的總稱[2]。常引起癲癇、發(fā)育遲緩、局部神經(jīng)功能障礙和精神發(fā)育不全等多種臨床表現(xiàn)。由于皮質(zhì)組建異常,離子通道病變(channelopathies)等,常引起異常神經(jīng)元電位形成,神經(jīng)元興奮-抑制失衡的興奮毒性作用,是觸發(fā)癲癇的重要病理生理機(jī)制。占癲癇病因的24%,占耐藥性癲癇大約40%,是難治性癲癇的主要病因。局灶性皮質(zhì)發(fā)育障礙(focal cortical dysplasia,FCD)是MCD的重要亞型之一,1971年由泰勒及其同事[3]首先發(fā)現(xiàn)并詳細(xì)描述。FCD是難治性癲癇的重要病因,也是癲癇手術(shù)中最常見的皮質(zhì)發(fā)育障礙類型[4]。FCD主要影響大腦皮質(zhì)區(qū)域,以皮質(zhì)分層異常和異形細(xì)胞為特點(diǎn),并據(jù)此分為三型(FCDI,FCDII,FCDIII),其中,FCDII是最重要的亞型,出現(xiàn)特征性的異形神經(jīng)元(FCDIIa)和氣球樣細(xì)胞(FCDIIb),與藥物難治性癲癇關(guān)系尤為密切[4]。FCD作為難治性癲癇最重要的病因,其具體的形成機(jī)制仍不清楚。目前,有報(bào)道表明,哺乳動(dòng)物類雷帕霉素靶蛋白受體(mTOR)信號(hào)途徑的破壞可導(dǎo)致FCD的異常組織結(jié)構(gòu)。其他機(jī)制,比如胚胎期的基因突變及外部環(huán)境誘導(dǎo)的損傷(病毒感染,局部缺血或缺氧等)也被認(rèn)為是誘導(dǎo)FCD的主要病因[5]�；蛲蛔円呀�(jīng)被臨床樣本及動(dòng)物實(shí)驗(yàn)證實(shí)[5,6]。外部環(huán)境誘導(dǎo)的損傷,比如致畸性化學(xué)試劑,外傷等也已通過動(dòng)物實(shí)驗(yàn)證實(shí)[6,7]。然而,病毒感染在FCD中的作用尚不清楚。已有大量研究顯示,病毒感染及其誘發(fā)的炎癥反應(yīng)是癲癇發(fā)病的重要原因,病毒感染可引起臨床癲癇發(fā)作,利用病毒感染可建立癲癇發(fā)作模型。同時(shí),胚胎期病毒感染及其誘導(dǎo)的炎癥反應(yīng)尚可通過NF?B和mTOR等信號(hào)的激活,影響神經(jīng)干細(xì)胞的增殖、遷移和分化,導(dǎo)致腦發(fā)育異常形成FCD。已經(jīng)發(fā)現(xiàn),胚胎期易感病毒,如單純皰疹病毒(Herpes simplex virus,HSV),人乳頭瘤病毒16(Human papillomavirus16,HPV16),人皰疹病毒6(Human herpesvirus6,HHV6)在癲癇患者的腦組織中檢出率也明顯高于正常人,進(jìn)一步支持胚胎期病毒感染可能是FCD形成和癲癇發(fā)生的重要原因,但病毒感染在臨床fcd手術(shù)切除標(biāo)本尚未證實(shí)。因此,本課題將檢測(cè)胚胎期易感病毒在fcd的表達(dá),探討fcd癲癇和胚胎期易感病毒的相關(guān)關(guān)系,為臨床上治療fcd癲癇提供新的思路。方法:1.收集不同病人的腦組織切除標(biāo)本(包括fcdiia、fcdiib以及對(duì)照)。2.提取上述病人腦組織dna,采用nested-pcr技術(shù),檢測(cè)標(biāo)本中hsv1,hsv2,hhv6a,hhv6b,hpv16的感染情況。3.選取nested-pcr陽(yáng)性結(jié)果作為實(shí)驗(yàn)組,以正常腦組織作為對(duì)照組,采用免疫組化、免疫熒光的方法驗(yàn)證nested-pcr的結(jié)果,并觀察病毒感染的形態(tài)學(xué)分布。4.用westernblot進(jìn)一步驗(yàn)證之前的實(shí)驗(yàn)結(jié)果。5.以上述結(jié)果中感染病毒的標(biāo)本作為實(shí)驗(yàn)組提取rna,以無(wú)病毒感染的正常人大腦皮層提rna作為對(duì)照組。采用rt-pcr技術(shù)檢測(cè)病毒感染后下游信號(hào)tlr3及trif的表達(dá)。結(jié)果:1.成功收集實(shí)驗(yàn)組(fcd組)標(biāo)本37例,對(duì)照組標(biāo)本22例。根據(jù)臨床及病理分型結(jié)果,實(shí)驗(yàn)組中:fcdiia20例,fcdiib17例;對(duì)照組中:外傷8例、腦出血4例,其他腫瘤周圍正常組織10例。2.nested-pcr檢測(cè)hhv6a在fcd組的感染率為20/37(54.1%),其中,fcdiia感染率為9/20(45.0%),fcdiib感染率為11/17(64.7%),對(duì)照組感染率為2/22(9.1%)(與fcd組比較存在顯著差異,p0.05);hhv6b在fcd組的感染率為25/37(67.6%),其中,fcdiia感染率為14/20(70.0%),fcdiib感染率為11/17(64.7%),對(duì)照組感染率為5/22(22.7%)(與fcd組比較存在顯著差異,p0.05);基因測(cè)序、免疫組化和westernblot檢測(cè)證實(shí)了hhv6a和hhv6b病毒及其表達(dá)產(chǎn)物的存在。3.nested-pcr檢測(cè)hpv16在fcd組的感染率為18/37(48.6%),其中,fcdiia感染率為9/20(45.0%),fcdiib感染率為9/17(52.9%),對(duì)照組感染率為4/22(18.2%)(與fcd組比較存在顯著差異,p0.05);免疫組化和westernblot檢測(cè)證實(shí)了hpv16病毒表達(dá)產(chǎn)物的存在。4.nested-pcr檢測(cè)hsv1在fcd組的感染率為33/37(89.2%),其中,fcdiia感染率為18/20(90.0%),fcdiib感染率為15/17(88.2%),對(duì)照組感染率為5/22(22.7%)(與fcd組比較存在顯著差異,p0.05);hsv2在fcd組的感染率為30/37(81.1%),其中,fcdiia感染率為16/20(80.0%),fcdiib感染率為14/17(82.4%),對(duì)照組感染率為2/22(9.1%)(與FCD組比較存在顯著差異,P0.05);免疫組化和Western Blot檢測(cè)證實(shí)了上述HSV1和HSV2病毒表達(dá)產(chǎn)物的存在。5.在病毒感染陽(yáng)性標(biāo)本中,下游信號(hào)分子TLR3及TRIF的表達(dá)水平明顯高于無(wú)病毒感染的對(duì)照組(TLR3:t=39.220,P=0.000;TRIF:t=22.226,p=0.000)。結(jié)論:1.HHV6A、HHV6B、HPV16、HSV1和HSV2在FCD組的感染率明顯高于正常對(duì)照組,表明上述胚胎期易感病毒與FCD相關(guān),可能是FCD形成和癲癇發(fā)生的重要原因。2.伴病毒感染的FCD標(biāo)本存在明顯的TLR3-TRIF炎癥信號(hào)通路激活,提示FCD內(nèi)存在病毒激活的炎癥反應(yīng),可能是參與FCD癲癇的發(fā)病機(jī)制。
【關(guān)鍵詞】：局灶性皮質(zhì)發(fā)育障礙 人皰疹病毒6 人乳頭瘤病毒16 單純皰疹病毒 難治性癲癇
【學(xué)位授予單位】：第三軍醫(yī)大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號(hào)】：R742.8
【目錄】：

• 縮略語(yǔ)表4-5
• 英文摘要5-9
• 中文摘要9-12
• 1. 前言12-14
• 2. 材料與方法14-30
• 3. 結(jié)果30-47
• 4. 討論47-55
• 全文總結(jié)55-56
• 參考文獻(xiàn)56-62
• 文獻(xiàn)綜述 炎癥在癲癇中作用的研究現(xiàn)狀62-76
• 參考文獻(xiàn)67-76
• 研究生期間主要發(fā)表論文76-77
• 致謝77

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本文編號(hào)：364345