目的：結(jié)核性腦膜炎（Tuberculous meningitis，TBM）是神經(jīng)系統(tǒng)結(jié)核病中最常見的疾病，也是死亡率最高的肺外結(jié)核病。在中樞神經(jīng)系統(tǒng)結(jié)核中，金屬基質(zhì)蛋白酶9（MMP-9）分泌增加，并發(fā)癥和死亡與MMP-9含量有關(guān)。但目前對結(jié)核桿菌是如何引起中樞神經(jīng)系統(tǒng)組織細(xì)胞的MMP-9過度表達(dá)分泌了解不多。本實(shí)驗(yàn)采用結(jié)核桿菌H37Rv感染人外周血單個(gè)核細(xì)胞后的條件培養(yǎng)基刺激人星型膠質(zhì)瘤細(xì)胞系U251，了解結(jié)核性腦膜炎發(fā)病中腦組織主要細(xì)胞MMP-9的表達(dá)分泌特點(diǎn)，以及腦組織細(xì)胞在調(diào)控MMP-9分泌時(shí)的相互作用，以進(jìn)一步了解結(jié)核性腦膜炎的發(fā)病機(jī)制。方法：六孔板按每孔1.0×10⁶接種U251細(xì)胞，待細(xì)胞貼壁后，予結(jié)核分枝桿菌H37Rv按MOI（感染復(fù)數(shù)，即細(xì)菌：細(xì)胞比例）=1、10和100直接感染72h后（M.tb組），收集細(xì)胞上清，Elisa法檢測MMP-9含量，裂解細(xì)胞提取總RNA，RT-PCR檢測MMP-9基因表達(dá)。密度梯度離心法分離人外周血單個(gè)核細(xì)胞（PBMCs）后，用RPMI-1640培養(yǎng)基稀釋，接種六孔板（1.0×10⁶細(xì)胞/孔），... 

【文章來源】：南昌大學(xué)江西省211工程院校

【文章頁數(shù)】：56 頁

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
ABSTRACT
中英文對照表
第1章 引言
第2章 材料與方法
    2.1 材料、主要試劑及儀器
        2.1.1 材料
        2.1.2 主要試劑
        2.1.3 主要儀器
        2.1.4 引物序列
    2.2 實(shí)驗(yàn)方法
        2.2.1 主要溶液的配制
        2.2.2 人淋巴細(xì)胞分離管分離分離外周血單個(gè)核細(xì)胞（PBMCs）
        2.2.3 結(jié)核桿菌 H37Rv 培養(yǎng)
        2.2.4 結(jié)核桿菌 H37Rv 刺激人單個(gè)核細(xì)胞獲得條件培養(yǎng)基
        2.2.5 人神經(jīng)膠質(zhì)瘤細(xì)胞系 U251 培養(yǎng)
        2.2.6 實(shí)驗(yàn)分組
        2.2.7 ELISA 法檢測細(xì)胞培養(yǎng)液上清中 MMP-9 含量
        2.2.8 流式細(xì)胞術(shù)檢測細(xì)胞培養(yǎng)液上清中 TNF-α、IL-1β、IL-6、IL-8、IL-10、IL-12 的含量
        2.2.9 明膠酶譜法檢測細(xì)胞上清中 MMP-9 的活性
        2.2.10 RT-PCR 檢測條件培養(yǎng)基刺激 U251 細(xì)胞 72h 后 MMP-9、TNF-α、IL-1β、IL-6、IL-8、IL-10、IL-12 mRNA 的表達(dá)
        2.2.11 Western blot 技術(shù)檢測細(xì)胞上清中 MMP-9 蛋白、胞漿內(nèi)參β-Actin 蛋白和胞核 NF-κB 蛋白表達(dá)水平
    2.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理
第3章 結(jié)果
    3.1 人神經(jīng)星型膠質(zhì)瘤細(xì)胞系 U251 細(xì)胞培養(yǎng)
    3.2 Elisa 法檢測細(xì)胞上清液中 MMP-9 的含量
    3.3 RT-PCR 檢測 MMP-9 在細(xì)胞中的表達(dá)
    3.4 流式細(xì)胞術(shù)檢測細(xì)胞上清液中 TNF-α、IL-1β、IL-6、IL-8、IL-10、IL-12 的表達(dá)
    3.5 RT-PCR 檢測炎性細(xì)胞因子表達(dá)
    3.6 明膠酶譜法檢測細(xì)胞上清中 MMP-9 活性
    3.7 Western Blot 檢測條件培養(yǎng)基刺激后 MMP-9 蛋白的表達(dá)水平
    3.8 Western Blot 檢測胞核蛋白 NF- 表達(dá)水平
第4章 討論
第5章 結(jié)論
致謝
參考文獻(xiàn)
攻讀學(xué)位期間的研究成果
綜述
    參考文獻(xiàn)


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]金屬基質(zhì)蛋白酶-9在中樞神經(jīng)系統(tǒng)感染患者腦脊液中的表達(dá)水平及意義[J]. 李小鵬,張倫理,黃呈輝.  中華傳染病雜志. 2012 (03)
[2]巨噬細(xì)胞的極化及其意義[J]. 張鳳,熊思東.  細(xì)胞生物學(xué)雜志. 2007(01)



本文編號(hào)：3627281