目的：結(jié)核性腦膜炎（Tuberculous meningitis，TBM）是神經(jīng)系統(tǒng)結(jié)核病中最常見的疾病，也是死亡率最高的肺外結(jié)核病。在中樞神經(jīng)系統(tǒng)結(jié)核中，金屬基質(zhì)蛋白酶9（MMP-9）分泌增加，并發(fā)癥和死亡與MMP-9含量有關(guān)。但目前對結(jié)核桿菌是如何引起中樞神經(jīng)系統(tǒng)組織細胞的MMP-9過度表達分泌了解不多。本實驗采用結(jié)核桿菌H37Rv感染人外周血單個核細胞后的條件培養(yǎng)基刺激人星型膠質(zhì)瘤細胞系U251，了解結(jié)核性腦膜炎發(fā)病中腦組織主要細胞MMP-9的表達分泌特點，以及腦組織細胞在調(diào)控MMP-9分泌時的相互作用，以進一步了解結(jié)核性腦膜炎的發(fā)病機制。方法：六孔板按每孔1.0×10⁶接種U251細胞，待細胞貼壁后，予結(jié)核分枝桿菌H37Rv按MOI（感染復(fù)數(shù)，即細菌：細胞比例）=1、10和100直接感染72h后（M.tb組），收集細胞上清，Elisa法檢測MMP-9含量，裂解細胞提取總RNA，RT-PCR檢測MMP-9基因表達。密度梯度離心法分離人外周血單個核細胞（PBMCs）后，用RPMI-1640培養(yǎng)基稀釋，接種六孔板（1.0×10⁶細胞/孔），... 

【文章來源】：南昌大學(xué)江西省211工程院校

【文章頁數(shù)】：56 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
ABSTRACT
中英文對照表
第1章 引言
第2章 材料與方法
    2.1 材料、主要試劑及儀器
        2.1.1 材料
        2.1.2 主要試劑
        2.1.3 主要儀器
        2.1.4 引物序列
    2.2 實驗方法
        2.2.1 主要溶液的配制
        2.2.2 人淋巴細胞分離管分離分離外周血單個核細胞（PBMCs）
        2.2.3 結(jié)核桿菌 H37Rv 培養(yǎng)
        2.2.4 結(jié)核桿菌 H37Rv 刺激人單個核細胞獲得條件培養(yǎng)基
        2.2.5 人神經(jīng)膠質(zhì)瘤細胞系 U251 培養(yǎng)
        2.2.6 實驗分組
        2.2.7 ELISA 法檢測細胞培養(yǎng)液上清中 MMP-9 含量
        2.2.8 流式細胞術(shù)檢測細胞培養(yǎng)液上清中 TNF-α、IL-1β、IL-6、IL-8、IL-10、IL-12 的含量
        2.2.9 明膠酶譜法檢測細胞上清中 MMP-9 的活性
        2.2.10 RT-PCR 檢測條件培養(yǎng)基刺激 U251 細胞 72h 后 MMP-9、TNF-α、IL-1β、IL-6、IL-8、IL-10、IL-12 mRNA 的表達
        2.2.11 Western blot 技術(shù)檢測細胞上清中 MMP-9 蛋白、胞漿內(nèi)參β-Actin 蛋白和胞核 NF-κB 蛋白表達水平
    2.3 統(tǒng)計學(xué)處理
第3章 結(jié)果
    3.1 人神經(jīng)星型膠質(zhì)瘤細胞系 U251 細胞培養(yǎng)
    3.2 Elisa 法檢測細胞上清液中 MMP-9 的含量
    3.3 RT-PCR 檢測 MMP-9 在細胞中的表達
    3.4 流式細胞術(shù)檢測細胞上清液中 TNF-α、IL-1β、IL-6、IL-8、IL-10、IL-12 的表達
    3.5 RT-PCR 檢測炎性細胞因子表達
    3.6 明膠酶譜法檢測細胞上清中 MMP-9 活性
    3.7 Western Blot 檢測條件培養(yǎng)基刺激后 MMP-9 蛋白的表達水平
    3.8 Western Blot 檢測胞核蛋白 NF- 表達水平
第4章 討論
第5章 結(jié)論
致謝
參考文獻
攻讀學(xué)位期間的研究成果
綜述
    參考文獻


【參考文獻】：
期刊論文
[1]金屬基質(zhì)蛋白酶-9在中樞神經(jīng)系統(tǒng)感染患者腦脊液中的表達水平及意義[J]. 李小鵬,張倫理,黃呈輝.  中華傳染病雜志. 2012 (03)
[2]巨噬細胞的極化及其意義[J]. 張鳳,熊思東.  細胞生物學(xué)雜志. 2007(01)



本文編號：3627281