發(fā)布時間：2022-02-10 15:09

　　帕金森病（Parkinson’s disease,PD）是繼阿爾茨海默�。ˋlzheimer’s disease,AD）之后的第二大神經退行性疾病,是一種常見且復雜的神經系統(tǒng)退行性疾病,其主要特征是肌僵直、靜止性震顫、運動遲緩和姿勢反射障礙等運動癥狀。此外,PD患者在早期還表現出認知功能障礙、精神異常和自主神經功能障礙等一系列非運動癥狀。PD的主要病理特征是黑質（substantia nigra,SN）多巴胺（dopamine,DA）能神經元選擇性缺失,導致紋狀體（striatum,Str）神經元末梢釋放DA減少,而殘存DA能神經元內出現α-突觸核蛋白（α-synuclein,α-syn）異常聚集,形成路易小體（Lewy bodies,LBs）。PD的發(fā)病機制尚不明確,遺傳、環(huán)境、衰老、炎癥、氧化應激、線粒體功能障礙和鐵代謝異常等都可能參與到PD的發(fā)生發(fā)展中。最近的研究表明,SN區(qū)DA能神經元上ATP敏感性鉀通道(ATP-sensitive potassium channels,K_ATP通道)的選擇性激活可能參與了PD中SN區(qū)DA能神經元的損傷。K_ATP... 

【文章來源】：青島大學山東省

【文章頁數】：72 頁

【學位級別】：碩士

【部分圖文】：

三管玻璃微電極Fig1Schemeof3barrelglassmicroelectrode

青島大學碩士學位論文61.5.3顱骨開窗用金屬耳桿將麻醉完全的小鼠俯臥位固定于腦立體定位儀，左右刻度保持一致，使其居中。用外科剪剪掉頭部毛發(fā)，用碘伏消毒處理三次，于頭部正中切開，用無菌生理鹽水暴露視野，少量雙氧水腐蝕顱骨骨膜，充分暴露前后囟位置。用電極前后左右測量，調整小鼠的鼻夾位置，從而使小鼠前后囟處在同一水平面。參考小鼠腦定位圖譜確定小鼠SN區(qū)位置：前囟后3.0-3.3mm，中線旁開1.25-1.5mm，顱骨表面下3.25-4.5mm。在顱骨表面SN區(qū)對應區(qū)域用0.4mm的牙科鉆開窗，去掉外層顱骨，細針輕微剝除腦膜暴露大腦皮層，用生理鹽水止血后，用2%瓊脂覆蓋于暴露出的大腦皮層與顱骨表面齊平。圖2電生理記錄的實驗裝置圖Fig2Schematicdiagramofexperimentaldevicesusedforextracellularrecordings1.5.4細胞外記錄神經元自發(fā)放電活動緩慢轉動腦立體定位儀豎直桿，使玻璃微電極緩慢下降；當降至瓊脂表面時，監(jiān)視器會顯示基線變細，之后改用液壓推進器控制電極的下降，緩慢地將電極尖端送至SN區(qū)。根據SN區(qū)定位及DA能神經元自發(fā)放電活動特點，鑒別SN區(qū)DA能神經元。觀察DA能神經元細胞放電穩(wěn)定5min，運用生物細胞納升精密儀器注射器，將藥物注射到DA能神經元表面。經生物信號放大器放大信號，數模轉換器將信號轉換為數字信號后輸入計算機，運用Spike2軟件記錄DA能神經元放電，實驗裝置圖如圖2所示。細胞放電信號記錄的信噪比大于3：1可用于分析。頻率分析主要是選取加藥之前120sec的平均放電頻率（X1）作為基礎放電頻率，并計算出其標準差（SD），加藥后反應頻率采用加藥后反應高峰50sec的平均頻率（X2）。此外，我們認為X2>X1±2SD或X2<X1±2SD認為細胞對藥物有反應，而X1-2SD<X2<X1+2SD認為細胞對藥物無反應。

材料與方法71.5.5組織學檢查每次在體細胞外電生理記錄結束后，注射2%滂胺天藍于所記錄部位（SN區(qū)）從而標記微電極尖端位置。實驗結束后，將處于麻醉狀態(tài)的老鼠充分暴露心臟位置，經小鼠左心室進針，先灌注生理鹽水至肝臟變白，后改為冰冷4%PFA灌注。之后迅速斷頭取腦，用4%PFA過夜固定，用冰凍切片機切片（50μm），并于顯微鏡下觀察玻璃微電極尖端末端是否位于SN區(qū)（圖3A），剔除位置不正確的數據。圖3黑質單側微量注射定位冠狀切片圖Fig3Confirmationofmicroinjectionsitesinthesubstantianigra2.腦內立體慢病毒注射2.1實驗動物準備實驗動物購買于青島藥品檢驗所，選取8-10周C57BL/6小鼠（體重20±2g）以及4月齡A53Tα-syn轉基因小鼠，飼養(yǎng)環(huán)境為室溫23±1℃，12：12hr循環(huán)晝夜光照條件生活，自由進食與飲水。在實驗前讓小鼠適應環(huán)境一周，用于后續(xù)實驗。2.2實驗儀器儀器名稱生產公司冰凍切片機Leica公司，德國動物腦立體定位儀瑞沃德公司，中國微量注射器飛鴿醫(yī)療器械公司，中國熒光顯微鏡CarlZeiss公司，德國2.3實驗試劑（1）0.01mol/LPBS（pH7.4）配制試劑名稱生產公司質量Na2HPO4·12H2O江蘇強盛公司，中國4gNaH2PO4·2H2O江蘇強盛公司，中國0.4gNaClSigma公司，美國9g

【參考文獻】：
期刊論文
[1]ATP敏感性鉀通道與帕金森病關系的研究進展[J]. 杜希恂,秦康,焦倩,謝俊霞,姜宏.  生理學報. 2016(05)
[2]ATP敏感性鉀通道在帕金森病中的作用（英文）[J]. 曾潔,王剛,陳生弟.  Neuroscience Bulletin. 2007(06)



本文編號：3619064