miR-223靶向抑制PAX6調(diào)控腦膠質(zhì)瘤細(xì)胞的生長(zhǎng)和侵襲研究
發(fā)布時(shí)間：2022-02-09 09:51
腦膠質(zhì)瘤是最常見(jiàn)的原發(fā)性中樞神經(jīng)系統(tǒng)惡性腫瘤,因它具有獨(dú)特的侵襲性而難以治療,因此尋找腦膠質(zhì)瘤新的治療靶點(diǎn)具有重要意義。近年來(lái)研究表明,腫瘤抑制因子PAX6在膠質(zhì)瘤的發(fā)生發(fā)展過(guò)程中是一種抑制性調(diào)控因素,它的高表達(dá)能抑制膠質(zhì)瘤細(xì)胞的生長(zhǎng)和侵襲,但PAX6在膠質(zhì)瘤的表達(dá)水平明顯低于鄰近正常組織,提示探索膠質(zhì)瘤中PAX6表達(dá)降低的確切機(jī)制,有望為明確膠質(zhì)瘤的侵襲性指明新思路。miRNAs屬于一類(lèi)小的、非編碼的單鏈RNAs,它可以通過(guò)與靶基因mRNA的3’-UTR結(jié)合,引起靶基因mRNA降解或翻譯受阻,從而在轉(zhuǎn)錄后水平調(diào)節(jié)蛋白的表達(dá)。miRNAs具有多種生物學(xué)作用,研究表明miRNAs的異常表達(dá)在腫瘤的發(fā)生和進(jìn)展中起重要作用,miRNAs作為抑癌基因還是致癌基因取決于它們相關(guān)靶基因的功能。在不同類(lèi)型的腫瘤細(xì)胞中miR-223通過(guò)靶向不同的功能基因而表現(xiàn)出不同的作用。膠質(zhì)瘤的生長(zhǎng)和轉(zhuǎn)移與不同的miRNAs有關(guān),然而在腦膠質(zhì)瘤中miR-223的生物學(xué)功能目前還不清楚。此外,與PAX6相關(guān)的miRNAs的報(bào)道非常少見(jiàn),在腦膠質(zhì)瘤中,miR-223是否可以靶向作用于PAX6需要進(jìn)一步證實(shí)。本研究中,我...
【文章來(lái)源】：中南大學(xué)湖南省211工程院校985工程院校教育部直屬院校
【文章頁(yè)數(shù)】：138 頁(yè)
【學(xué)位級(jí)別】：博士
【部分圖文】：
PAX6在正常胚腦組織和腦膠質(zhì)瘤組織中的表達(dá)（100X)
博士學(xué)位論文 第一章腦膠質(zhì)瘤組織和細(xì)胞中miR-223、PAX6的差異性表達(dá)及IE向關(guān)圖1-2 PAX6蛋白的相對(duì)表達(dá)量注：**:與Nomal組比較，p<0.01； ★:與T1組比較，p<0.05;“：與T2組較，/7<0.01。另外6例TM分期不明確。1.3.2 腦膠質(zhì)瘤細(xì)胞(A172、1)251、U373、U138、XB1330)與胚腦膠質(zhì)細(xì)胞（HFGC中PAX6 mRNA和miR-223的表達(dá)1.3.2.1腦膠質(zhì)瘤細(xì)胞與正常腦膠質(zhì)細(xì)胞總RNA檢測(cè)的瓊脂糖凝膠電泳結(jié)果分別取6種細(xì)胞的總RNA各1 hL樣品進(jìn)行變性瓊脂糖凝膠電泳，約20 mi后于紫外成像儀上進(jìn)行觀察并拍照。如圖1-3所示，RNA樣品的28S，18S條清晰，上樣孔中無(wú)殘留。應(yīng)用分光光度計(jì)進(jìn)一步測(cè)定RNA樣品的純度，結(jié)果示OD260與OD280比值均在1.9-2.1之間，表明RNA樣品質(zhì)量完全符合實(shí)驗(yàn)求。HFGC A172 U251 U373 U138 XB1330
圖1-6 PAX6在腦膠質(zhì)瘤細(xì)胞中的相對(duì)表達(dá)量注：與 HFGC 組比較，’；7<0.05，p<0.01, ><0.0011.3.2.3 qRT-PCR檢測(cè)腦膠質(zhì)瘤細(xì)胞miR-223的表達(dá)結(jié)果qRT-PCR是目前miRNA定量檢測(cè)比較簡(jiǎn)便而又常用的方法，本課題運(yùn)用qRT-PCR檢測(cè)腦膠質(zhì)瘤細(xì)胞系中miR-223的表達(dá)，以U6作為內(nèi)參照，從反應(yīng)后擴(kuò)增曲線及館解曲線可以看出PCR的產(chǎn)物量足夠且比較單一（圖1-7,圖1-8)。結(jié)果顯示，miR-223在腦膠質(zhì)瘤細(xì)胞中均有表達(dá)，與正常胚腦膠質(zhì)細(xì)胞HFGC相比較，各膠質(zhì)瘤細(xì)胞中miR-223的表達(dá)均明顯上調(diào)，其中miR-223的表達(dá)量以在U138、XB1330細(xì)胞中的表達(dá)最高（；7<0.001)，在U251、U373細(xì)胞中的表達(dá)居中（pO.Ol)，在A172細(xì)胞中的表達(dá)較高（/7<0.05)(圖1-9)。f '.… ‘ ■ ““一一―丨二丄t ?>?? T ‘ ‘ ‘ 一二丨■______■_? ■ S； ::iJ// ■ \ ‘^ . "?隱■丨……丨■■■■■_ir "- atm.o ? Kv?3s:9( ws( nr -H tc- 供 於 a?8 >1^*11? t
本文編號(hào)：3616794
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【學(xué)位級(jí)別】：博士
【部分圖文】：
PAX6在正常胚腦組織和腦膠質(zhì)瘤組織中的表達(dá)（100X)
博士學(xué)位論文 第一章腦膠質(zhì)瘤組織和細(xì)胞中miR-223、PAX6的差異性表達(dá)及IE向關(guān)圖1-2 PAX6蛋白的相對(duì)表達(dá)量注：**:與Nomal組比較，p<0.01； ★:與T1組比較，p<0.05;“：與T2組較，/7<0.01。另外6例TM分期不明確。1.3.2 腦膠質(zhì)瘤細(xì)胞(A172、1)251、U373、U138、XB1330)與胚腦膠質(zhì)細(xì)胞（HFGC中PAX6 mRNA和miR-223的表達(dá)1.3.2.1腦膠質(zhì)瘤細(xì)胞與正常腦膠質(zhì)細(xì)胞總RNA檢測(cè)的瓊脂糖凝膠電泳結(jié)果分別取6種細(xì)胞的總RNA各1 hL樣品進(jìn)行變性瓊脂糖凝膠電泳，約20 mi后于紫外成像儀上進(jìn)行觀察并拍照。如圖1-3所示，RNA樣品的28S，18S條清晰，上樣孔中無(wú)殘留。應(yīng)用分光光度計(jì)進(jìn)一步測(cè)定RNA樣品的純度，結(jié)果示OD260與OD280比值均在1.9-2.1之間，表明RNA樣品質(zhì)量完全符合實(shí)驗(yàn)求。HFGC A172 U251 U373 U138 XB1330
圖1-6 PAX6在腦膠質(zhì)瘤細(xì)胞中的相對(duì)表達(dá)量注：與 HFGC 組比較，’；7<0.05，p<0.01, ><0.0011.3.2.3 qRT-PCR檢測(cè)腦膠質(zhì)瘤細(xì)胞miR-223的表達(dá)結(jié)果qRT-PCR是目前miRNA定量檢測(cè)比較簡(jiǎn)便而又常用的方法，本課題運(yùn)用qRT-PCR檢測(cè)腦膠質(zhì)瘤細(xì)胞系中miR-223的表達(dá)，以U6作為內(nèi)參照，從反應(yīng)后擴(kuò)增曲線及館解曲線可以看出PCR的產(chǎn)物量足夠且比較單一（圖1-7,圖1-8)。結(jié)果顯示，miR-223在腦膠質(zhì)瘤細(xì)胞中均有表達(dá)，與正常胚腦膠質(zhì)細(xì)胞HFGC相比較，各膠質(zhì)瘤細(xì)胞中miR-223的表達(dá)均明顯上調(diào)，其中miR-223的表達(dá)量以在U138、XB1330細(xì)胞中的表達(dá)最高（；7<0.001)，在U251、U373細(xì)胞中的表達(dá)居中（pO.Ol)，在A172細(xì)胞中的表達(dá)較高（/7<0.05)(圖1-9)。f '.… ‘ ■ ““一一―丨二丄t ?>?? T ‘ ‘ ‘ 一二丨■______■_? ■ S； ::iJ// ■ \ ‘^ . "?隱■丨……丨■■■■■_ir "- atm.o ? Kv?3s:9( ws( nr -H tc- 供 於 a?8 >1^*11? t
本文編號(hào)：3616794
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